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1. (WO2005064016) PROCÉDÉ DE DÉTECTION MULTIPLEX DE MICRO-ORGANISMES
Dernières données bibliographiques dont dispose le Bureau international   

N° de publication :    WO/2005/064016    N° de la demande internationale :    PCT/JP2004/019340
Date de publication : 14.07.2005 Date de dépôt international : 24.12.2004
CIB :
C12N 15/00 (2006.01), C12Q 1/68 (2006.01), G01N 33/48 (2006.01)
Déposants : PRIMA MEAT PACKERS, LTD. [JP/JP]; 17-4, Higashioi 3-chome Shinagawa-ku, Tokyo 1408529 (JP) (Tous Sauf US).
NATIONAL FOOD RESEARCH INSTITUTE [JP/JP]; 2-1-12, Kannondai Tsukuba-shi Ibaraki 3058642 (JP) (Tous Sauf US).
HORIKOSHI, Naoko [JP/JP]; (JP) (US Seulement).
KAWASAKI, Susumu [JP/JP]; (JP) (US Seulement).
OKADA, Yukio [JP/JP]; (JP) (US Seulement).
TAKESHITA, Kazuko [JP/JP]; (JP) (US Seulement).
SAMESHIMA, Takashi [JP/JP]; (JP) (US Seulement).
KAWAMOTO, Shinichi [JP/JP]; (JP) (US Seulement).
ISSHIKI, Kenji [JP/JP]; (JP) (US Seulement)
Inventeurs : HORIKOSHI, Naoko; (JP).
KAWASAKI, Susumu; (JP).
OKADA, Yukio; (JP).
TAKESHITA, Kazuko; (JP).
SAMESHIMA, Takashi; (JP).
KAWAMOTO, Shinichi; (JP).
ISSHIKI, Kenji; (JP)
Mandataire : HIROTA, Masanori; 3F Wakabayashi Bldg. 8-5 Akasaka 2-chome Minato-ku, Tokyo 107-0052 (JP)
Données relatives à la priorité :
2003-435943 26.12.2003 JP
Titre (EN) METHOD OF MULTIPLEX MICROORGANISM DETECTION
(FR) PROCÉDÉ DE DÉTECTION MULTIPLEX DE MICRO-ORGANISMES
(JA) 微生物の多重検出方法
Abrégé : front page image
(EN)It is intended to provide a multiplex detection method whereby contaminating microorganisms in foods (for example, pathogenic Escherichia coli O157, Listeria monocytogenes and salmonellas) can be detected at a high sensitivity comparable or even superior to an official method, which comprises amplifying a plural number of target genes in a single PCR tube and analyzing the same. The following procedures are successively performed: (A) the step of treating a lytic enzyme such as achromopeptidase or lysozyme and/or a bacteriocin having a lytic activity such as enterolysin with a surfactant and a protein-denaturing agent to thereby extract DNAs of target microorganisms to be detected; and (B) the step of mixing primers specific to the target microorganisms to be detected and carrying out multiplex PCR. It is favorable to employ the step of culturing the microorganisms under such culture conditions as allowing the proliferation of 1 CFU/100 g of the microorganisms before the culture to achieve a level of 103 CFU/ml or more after culturing for 18 to 48 hours (for example, under such conditions as giving a pH value of 5.1 or higher after the completion of the culture), before the step (A) of extracting the DNAs of the target microorganisms to be detected.
(FR)La présente invention concerne un procédé de détection multiplex permettant de détection des micro-organismes contaminants dans des aliments (par exemple, les agents pathogènes, E. Coli 0157, Listeria monocytogene et les salmonelles) avec une sensibilité élevée comparable, voire supérieur à la sensibilité obtenue dans un procédé classique. Le procédé décrit dans cette invention consiste à amplifier plusieurs gènes cibles dans un seul tube PCR puis à les analyser. Le procédé susmentionné comprend les étapes qui consistent (A) à traiter une enzyme lytique, telle qu'une achromopeptidase ou une lysozyme et/ou une bactériocine présentant une activité lytique, telle que l'entérolysine avec un tensioactif et avec un agent de dénaturation des protéines afin d'extraire les ADN de micro-organismes cibles devant être détectés ; et (B) à mélanger des amorces spécifiques avec les micro-organismes devant être détectés et à procéder à une PCR multiplex. Selon le mode de réalisation décrit dans cette invention, il est avantageux d'effectuer l'étape de culture des micro-organismes dans des conditions de culture qui permettent la prolifération de 1 CFU/100g de micro-organismes avant la culture de manière à obtenir un niveau égal ou supérieur à 103 CFU/ml après culture pendant 18 à 48 heures (par exemple, dans des conditions qui permettent d'obtenir une valeur de pH égale ou supérieure à 5.1 après achèvement de la culture), avant l'étape (A) qui consiste à extraire les ADN des micro-organismes devant être détectés.
(JA) 食品に存在する病原性大腸菌O157、リステリアモノサイトゲネス、サルモネラ属菌等の汚染微生物を、1本のPCR反応チューブで複数の標的遺伝子の増幅を行い、それを解析することで、公定法と同等又はそれ以上の高い感度で検出することができる微生物の多重検出方法を提供するものである。  (A)少なくとも、アクロモペプチダーゼ、リゾチーム等の溶菌酵素及び/又はエンテロリシン等の溶菌活性を持つバクテリオシンと界面活性剤とタンパク質変性剤で処理することにより、検出対象微生物のDNAを抽出する工程と、(B)検出対象微生物に特異的なプライマーを混合し、マルチプレックスPCRを行う工程を順次行う。また、上記(A)の検出対象微生物のDNAを抽出する工程の前に、1CFU/100gの微生物が18~48時間培養後に10CFU/ml以上となる培養条件下、例えば培養後のpHが5.1以上となる培養条件下で培養する工程を設けることが好ましい。
États désignés : AE, AG, AL, AM, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DK, DM, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, HR, HU, ID, IL, IN, IS, JP, KE, KG, KP, KR, KZ, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LV, MA, MD, MG, MK, MN, MW, MX, MZ, NA, NI, NO, NZ, OM, PG, PH, PL, PT, RO, RU, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, SY, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, YU, ZA, ZM, ZW.
Organisation régionale africaine de la propriété intellectuelle (ARIPO) (BW, GH, GM, KE, LS, MW, MZ, NA, SD, SL, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
Office eurasien des brevets (OEAB) (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM)
Office européen des brevets (OEB) (AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HU, IE, IS, IT, LT, LU, MC, NL, PL, PT, RO, SE, SI, SK, TR)
Organisation africaine de la propriété intellectuelle (OAPI) (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Langue de publication : japonais (JA)
Langue de dépôt : japonais (JA)