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1. WO2003002736 - TECHNIQUE PAR REVISION STRUCTUREE POUR LA RECOMBINAISON IN VITRO DE SEQUENCES POLYNUCLEOTIDIQUES

Numéro de publication WO/2003/002736
Date de publication 09.01.2003
N° de la demande internationale PCT/EP2002/007060
Date du dépôt international 26.06.2002
Demande présentée en vertu du Chapitre 2 20.08.2002
CIB
C12N 9/06 2006.01
CCHIMIE; MÉTALLURGIE
12BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
NMICRO-ORGANISMES OU ENZYMES; COMPOSITIONS LES CONTENANT; CULTURE OU CONSERVATION DE MICRO-ORGANISMES; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE; MILIEUX DE CULTURE
9Enzymes, p.ex. ligases (6.); Proenzymes; Compositions les contenant; Procédés pour préparer, activer, inhiber, séparer ou purifier des enzymes
02Oxydoréductases (1.), p.ex. luciférase
06agissant sur des composés contenant de l'azote comme donneurs (1.4, 1.5, 1.7)
C12N 9/16 2006.01
CCHIMIE; MÉTALLURGIE
12BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
NMICRO-ORGANISMES OU ENZYMES; COMPOSITIONS LES CONTENANT; CULTURE OU CONSERVATION DE MICRO-ORGANISMES; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE; MILIEUX DE CULTURE
9Enzymes, p.ex. ligases (6.); Proenzymes; Compositions les contenant; Procédés pour préparer, activer, inhiber, séparer ou purifier des enzymes
14Hydrolases (3.)
16agissant sur les liaisons esters (3.1)
C12N 15/10 2006.01
CCHIMIE; MÉTALLURGIE
12BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
NMICRO-ORGANISMES OU ENZYMES; COMPOSITIONS LES CONTENANT; CULTURE OU CONSERVATION DE MICRO-ORGANISMES; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE; MILIEUX DE CULTURE
15Techniques de mutation ou génie génétique; ADN ou ARN concernant le génie génétique, vecteurs, p.ex. plasmides, ou leur isolement, leur préparation ou leur purification; Utilisation d'hôtes pour ceux-ci
09Technologie d'ADN recombinant
10Procédés pour l'isolement, la préparation ou la purification d'ADN ou d'ARN
CPC
C12N 15/102
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
15Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
09Recombinant DNA-technology
10Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
102Mutagenizing nucleic acids
C12N 9/0034
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
9Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof
0004Oxidoreductases (1.)
0012acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7)
0026acting on CH-NH groups of donors (1.5)
0032with oxygen as acceptor (1.5.3)
0034Sarcosine oxidase (1.5.3.1)
C12N 9/16
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
9Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof
14Hydrolases (3)
16acting on ester bonds (3.1)
Déposants
  • ROCHE DIAGNOSTICS GMBH [DE/DE]; Sandhofer Strasse 116 68305 Mannheim, DE (DE)
  • F. HOFFMANN-LA ROCHE AG [CH/CH]; Grenzacherstrasse 124 CH-4070 Basel, CH (AT, BE, CA, CH, CY, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, JP, LU, MC, NL, PT, SE, TR)
  • SHAO, Zhixin [CN/DE]; DE (UsOnly)
  • KRATZSCH, Peter [DE/DE]; DE (UsOnly)
  • SCHMUCK, Rainer [DE/DE]; DE (UsOnly)
  • VON DER ELTZ, Herbert [DE/DE]; DE (UsOnly)
  • KENKLIES, Janet [DE/DE]; DE (UsOnly)
Inventeurs
  • SHAO, Zhixin; DE
  • KRATZSCH, Peter; DE
  • SCHMUCK, Rainer; DE
  • VON DER ELTZ, Herbert; DE
  • KENKLIES, Janet; DE
Données relatives à la priorité
01115424.227.06.2001EP
Langue de publication anglais (EN)
Langue de dépôt anglais (EN)
États désignés
Titre
(EN) A WALK-THROUGH TECHNIQUE FOR IN VITRO RECOMBINATION OF POLYNUCLEOTIDE SEQUENCES
(FR) TECHNIQUE PAR REVISION STRUCTUREE POUR LA RECOMBINAISON IN VITRO DE SEQUENCES POLYNUCLEOTIDIQUES
Abrégé
(EN)
A simple and efficient method for random in vitro mutagenesis and recombination of polynucleotide sequences based on walk-through with chain-elongating molecules and chain terminating molecules e.g. dNTPs/ddNTPs followed by reassembly and amplification is described. The utility of this method for improving protein structure and/or function is demonstrated by creating novel sarcosine oxidase variants and by recombining human placental alkaline phosphates and calf intestinal alkaline phosphatase for better mutants with improved properties.
(FR)
L'invention concerne un procédé simple et efficace de mutagenèse et de recombinaison aléatoires in vitro de séquences polynucléotidiques sur la base d'une révision structurée avec des molécules d'allongement de chaîne et des molécules de terminaison de chaîne, par exemple Dntp/ddNTP, suivie du réassemblage et de l'amplification. L'intérêt de ce procédé visant à améliorer la structure et/ou la fonction protéiques est démontré par la création de nouveaux variants de sarcosine oxydase et la recombinaison de phosphatase alcaline placentaire humaine et de phosphatase alcaline intestinale du veau pour de meilleurs mutants présentant de meilleures propriétés.
Également publié en tant que
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