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1. (WO2002044399) METHODE DE TRANSCRIPTION IN VITRO DE LA TRANSCRIPTASE INVERSE A AMORCAGE ALEATOIRE POUR L'AMPLIFICATION D'ARN
Dernières données bibliographiques dont dispose le Bureau international   

N° de publication :    WO/2002/044399    N° de la demande internationale :    PCT/US2001/044821
Date de publication : 06.06.2002 Date de dépôt international : 28.11.2001
Demande présentée en vertu du Chapitre 2 :    25.06.2002    
CIB :
C12N 15/10 (2006.01)
Déposants : ROSETTA INPHARMATICS, INC. [US/US]; 12040 115th Avenue, N.E., Kirkland, WA 98034 (US) (Tous Sauf US).
ZIMAN, Michael [US/US]; (US) (US Seulement).
DAVIS, Colleen, P. [US/US]; (US) (US Seulement)
Inventeurs : ZIMAN, Michael; (US).
DAVIS, Colleen, P.; (US)
Mandataire : ANTLER, Adriane, M.; Pennie & Edmonds LLP, 1155 Avenue of the Americas, New York, NY 10036 (US)
Données relatives à la priorité :
60/253,641 28.11.2000 US
Titre (EN) IN VITRO TRANSCRIPTION METHOD FOR RNA AMPLIFICATION
(FR) METHODE DE TRANSCRIPTION IN VITRO DE LA TRANSCRIPTASE INVERSE A AMORCAGE ALEATOIRE POUR L'AMPLIFICATION D'ARN
Abrégé : front page image
(EN)A random-primed reverse transcriptase-in vitro method of linearly amplifying RNA is provided. According to the methods of the invention, source RNA (or other single-stranded nucleic acid), preferably, mRNA, is converted to double-stranded cDNA using two random primers, one of which comprises a RNA polymerase promoter sequence ('promoter-primer'), to yield a double-stranded cDNA that comprises a RNA polymerase promoter that is recognized by a RNA polymerase. Preferably, the primer for first-strand cDNA synthesis is a promoter-primer and the primer for second-strand cDNA synthesis is not a promoter-primer. The double-stranded cDNA is then transcribed into RNA by the RNA polymerase, optimally in the presence of a reverse transcriptase that is rendered incapable of RNA-dependent DNA polymerase activity during this transcription step. The subject methods produce linearly amplified RNA with little or no 3' bias in the sequences of the nucleic acid population amplified.
(FR)L'invention concerne une méthode de transcription -in vitro de la transcriptase inverse à amorçage aléatoire pour l'amplification linéaire d'ARN. Cette méthode consiste à convertir l'ARN source (ou autre acide nucléique simple brin), de préférence l'ARNm, en ADNc double brin à l'aide de deux amorces aléatoires, une desdites amorces renfermant une séquence d'ARN-polymérase-promoteur ('promoteur-amorce'), de manière à produire un ADNc double brin contenant un ARN-polymérase-promoteur reconnu par un ARN-polymérase. De préférence, l'amorce pour la synthèse du premier brin d'ADNc est un promoteur-amorce et l'amorce pour la synthèse du second brin d'ADNc n'est pas un promoteur-amorce. Cet ADNc double brin est ensuite transcrit en ARN par l'ARN-polymérase, de façon optimale en présence d'une transcriptase inverse rendue incapable de toute activité d'ADN-polymérase ARN-dépendante pendant cette étape de transcription. Ladite méthode permet de produire de l'ARN à amplification linéaire présentant peu ou pas de distorsion en 3' dans les séquences de population acide nucléique amplifiées.
États désignés : AE, AG, AL, AM, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BR, BY, BZ, CA, CH, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DK, DM, DZ, EC, EE, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, HR, HU, ID, IL, IN, IS, JP, KE, KG, KP, KR, KZ, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LV, MA, MD, MG, MK, MN, MW, MX, MZ, NO, NZ, OM, PH, PL, PT, RO, RU, SD, SE, SG, SI, SK, SL, TJ, TM, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VN, YU, ZA, ZW.
Organisation régionale africaine de la propriété intellectuelle (ARIPO) (GH, GM, KE, LS, MW, MZ, SD, SL, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
Office eurasien des brevets (OEAB) (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM)
Office européen des brevets (OEB) (AT, BE, CH, CY, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE, TR)
Organisation africaine de la propriété intellectuelle (OAPI) (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Langue de publication : anglais (EN)
Langue de dépôt : anglais (EN)