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1. (WO2002023198) PROCEDE INDIRECT DE DETERMINATION QUANTITATIVE DE LA CAPACITE DE LIAISON DISPONIBLE DANS UNE SOLUTION PROTEIQUE AQUEUSE
Dernières données bibliographiques dont dispose le Bureau international   

N° de publication :    WO/2002/023198    N° de la demande internationale :    PCT/DE2001/003420
Date de publication : 21.03.2002 Date de dépôt international : 01.09.2001
Demande présentée en vertu du Chapitre 2 :    02.03.2002    
CIB :
G01N 33/68 (2006.01)
Déposants : TERAKLIN AKTIENGESELLSCHAFT [DE/DE]; Friedrich-Barnewitz-Strasse 4, 18119 Rostock (DE) (Tous Sauf US).
MUNZERT, Eberhard [DE/DE]; (DE) (US Seulement)
Inventeurs : MUNZERT, Eberhard; (DE)
Mandataire : WEBER-SEIFFERT-LIEKE; Dr. R. Weber, Taunusstrasse 5a, 65183 Wiesbaden (DE)
Données relatives à la priorité :
100 44 634.5 08.09.2000 DE
Titre (DE) INDIREKTES VERFAHREN ZUR QUANTITATIVEN BESTIMMUNG DER VORHANDENEN BINDUNGSKAPAZITÄT IN EINER WÄSSRIGEN PROTEINLÖSUNG
(EN) INDIRECT METHOD FOR THE QUANTITATIVE ANALYSIS OF THE BINDING CAPACITY PRESENT IN AN AQUEOUS PROTEIN SOLUTION
(FR) PROCEDE INDIRECT DE DETERMINATION QUANTITATIVE DE LA CAPACITE DE LIAISON DISPONIBLE DANS UNE SOLUTION PROTEIQUE AQUEUSE
Abrégé : front page image
(DE)Zur quantitativen bzw. halbquantitativen Bestimmung der freien Bindungskapazität eines Proteins, insbesondere von Albumin, die möglichst einfach und schnell anhand von Reihenversuchen durchgeführt werden kann, wird ein indirektes Verfahren in einer wäßrigen Testprotein-Lösung vorgeschlagen, bei dem man: (a) eine Lösung (L1) mit einer wenigstens ungefähr definierten Menge des Testproteins (A) und eine Lösung (L2) mit der gleichen wenigstens ungefähr definierten Menge eines Referenzproteins (D) bereitstellt; (b) zu beiden Lösungen (L1 und L2) jeweils die gleiche definierte Menge einer Markersubstanz (M) zugibt, welche an wenigstens einer bestimmten Bindungsstelle des Testproteins (A) und des Referenzproteins (D) binden kann, wobei die Markersubstanz den Lösungen in solcher Mengen zugesetzt wird, daß nur im wesentlichen alle Bindungsstellen für diese Markersubstanz abgesättigt werden; (c) durch ausreichend lange Inkubation die Markersubstanz (M) an die freien Bindungsstellen des jeweiligen Proteins (A bzw. D) unter Bildung eines Protein-Markersubstanz-Komplexes (A:M, D:M) binden läßt; (d) ungebundene Markersubstanz (M) von dem jeweiligen Protein-Markersubstanz-Komplexes (A:M; D:M) abtrennt; (e) die jeweilige Menge (MA¿ung?; MD¿ung?) an ungebundener Markersubstanz oder eine hierzu proportionale physiko-chemische Veränderung (SA¿ung?; SD¿ung?) ermittelt und (f) die Bindungskapazität (K) des Testproteins nach der Formel (a) bestimmt.
(EN)The invention relates to a method for the quantitative or semi-quantitative analysis of the free binding capacity of a protein, especially of albumin. The aim of the invention is to provide an indirect method in an aqueous test solution that can be carried out as simply and quickly as possible in serial tests. The inventive method comprises the following steps: a) providing a solution (L1) that contains an at least approximately defined amount of the test protein (A) and a solution (L2) that contains the same at least approximately defined amount of a reference protein (D); b) adding to the two solutions (L1 and L2) the same defined amount of a marker substance (M) each, said marker substance being capable of binding to a defined binding site of the test protein (A) and of the reference protein (D), and adding said marker substance to the solutions in such an amount that only substantially all binding sites for said marker substance are saturated; c) allowing the marker substance (M) to bind to the free binding sites of the respective protein (A or D), thereby forming a protein/marker substance complex (A:M, D:M), by incubating the mixture for a sufficient time; d) separating the marker substance (M) not bound from the respective protein/marker substance complex (A:M; D:M); e) determining the respective amount (MA¿ung?; MD¿ung?) of the marker substance not bound or a physicochemical modification (SA¿ung?; SD¿ung?) that is proportional thereto; and f) determining the binding capacity (K) of the test protein according to the formula (a).
(FR)Selon l'invention, pour la détermination quantitative ou semi-quantitative de la capacité de liaison disponible d'une protéine, en particulier de l'albumine, cette détermination pouvant être réalisée le plus simplement et le plus rapidement possible sur la base d'essais en série, on met en oeuvre un procédé indirect avec une solution de protéine à tester aqueuse. Selon ledit procédé, (a) on prépare une solution (L1) avec une quantité, définie au moins approximativement, de la protéine à tester (A), ainsi qu'une solution (L2) qui comprend la même quantité, au moins approximativement définie, d'une protéine de référence (D); (b) on ajoute, respectivement, aux deux solutions (L1 et L2) la même quantité définie d'un marqueur (M) qui peut se fixer à au moins un point de liaison défini de la protéine à tester (A) et de la protéine de référence (D), ledit marqueur étant ajouté aux solutions en une quantité telle que seulement pratiquement tous les points de liaison dudit marqueur sont saturés; (c) on fait en sorte, grâce à une incubation suffisamment lente, que le marqueur (M) se fixe aux points de liaison libres de la protéine (A ou D) concernée, en formant un complexe protéine-marqueur (A:M, D:M); (d) on sépare le marqueur (M) non fixé de chaque complexe protéine-marqueur (A:M; D:M); (e) on détermine la quantité respective (MA¿ung?; MD¿ung?) respective de marqueur non lié ou une modification (SA¿ung?; SD¿ung?) physico-chimique proportionnelle à ladite quantité; et (f) on définit la capacité de liaison (K) de la protéine à tester selon la formule (a).
États désignés : AE, AG, AL, AM, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BR, BY, BZ, CA, CH, CN, CO, CR, CU, CZ, DK, DM, DZ, EE, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, HR, HU, ID, IL, IN, IS, JP, KE, KG, KP, KR, KZ, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LV, MA, MD, MG, MK, MN, MW, MX, MZ, NO, NZ, PL, PT, RO, RU, SD, SE, SG, SI, SK, SL, TJ, TM, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VN, YU, ZA, ZW.
Organisation régionale africaine de la propriété intellectuelle (ARIPO) (GH, GM, KE, LS, MW, MZ, SD, SL, SZ, TZ, UG, ZW)
Office eurasien des brevets (OEAB) (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM)
Office européen des brevets (OEB) (AT, BE, CH, CY, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE, TR)
Organisation africaine de la propriété intellectuelle (OAPI) (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Langue de publication : allemand (DE)
Langue de dépôt : allemand (DE)