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1. (WO2002020559) PROCEDE POUR PURIFIER DES PROTEINES RECOMBINEES EXPRIMEES EN TANT QU'AGREGATS NON SOLUBLES
Dernières données bibliographiques dont dispose le Bureau international   

N° de publication :    WO/2002/020559    N° de la demande internationale :    PCT/EP2001/009552
Date de publication : 14.03.2002 Date de dépôt international : 18.08.2001
Demande présentée en vertu du Chapitre 2 :    08.03.2002    
CIB :
C07K 1/113 (2006.01), C07K 1/36 (2006.01), C07K 14/415 (2006.01)
Déposants : MERCK PATENT GMBH [DE/DE]; Frankfurter Strasse 250, 64293 Darmstadt (DE) (Tous Sauf US).
SUCK, Roland [DE/DE]; (DE) (US Seulement).
CROMWELL, Oliver [DE/DE]; (DE) (US Seulement).
FIEBIG, Helmut [DE/DE]; (DE) (US Seulement)
Inventeurs : SUCK, Roland; (DE).
CROMWELL, Oliver; (DE).
FIEBIG, Helmut; (DE)
Représentant
commun :
MERCK PATENT GMBH; Frankfurter Strasse 250, 64293 Darmstadt (DE)
Données relatives à la priorité :
100 44 360.5 08.09.2000 DE
Titre (DE) VERFAHREN ZUR AUFREINIGUNG VON REKOMBINANTEN ALS UNLÖSLICHE AGGREGATE EXPRIMIERTE PROTEINEN
(EN) METHOD FOR PURIFYING RECOMBINANT PROTEINS EXPRESSED AS INSOLUBLE AGGREGATES
(FR) PROCEDE POUR PURIFIER DES PROTEINES RECOMBINEES EXPRIMEES EN TANT QU'AGREGATS NON SOLUBLES
Abrégé : front page image
(DE)Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Solubilisierung und Aufreinigung von rekombinanten Proteinen, die in bakteriellen Wirtzellen exprimiert und als unlösliche Aggregate (inclusion bodies) abgelagert werden. Die Aufreinigung basiert auf der Überführung der Inclusion Bodies in lösliche Formen unter Verwendung von organischen Denaturierungsreagenzien und Einsatz chromatographischer Verfahren. Hierbei werden anorganische, alkalische, salzhaltige Laufmittel ausgewählt, die es nach erfolgter Aufreinigung ermöglichen, die rekombinanten Proteine nach Neutralisation in für den medizinischen Gebrauch direkt einsetzbarer und physiologisch akzeptabler Form zur Verfügung zu stellen. Das Verfahren ist insbesondere geeignet für die Aufreinigung von Allergenen und Allergenfragmenten.
(EN)The invention relates to a method for solubilizing and purifying recombinant proteins, which are expressed in bacterial host cells and deposited as insoluble aggregates (inclusion bodies). The purification is based on the conversion of the inclusion bodies into soluble forms while using organic denaturation reagents and on the use of chromatographic methods. To this end, inorganic, alkaline mobile solvents that contain salt are selected, which, after a purification, make it possible to provide the recombinant proteins after neutralization in a physiologically acceptable form, which can be directly employed for medical use. The method is particularly suited for purifying allergens and allergen fragments.
(FR)L'invention concerne un procédé pour solubiliser et purifier des protéines recombinées qui sont exprimées dans des cellules hôtes bactériennes et sont déposées en tant qu'agrégats non solubles ($i(corps d'inclusion)). La purification s'effectue par transformation des corps d'inclusion en formes solides au moyen de réactifs de dénaturation organiques et par mise en oeuvre de procédés chromatographiques. A cet effet, on sélectionne des phases mobiles inorganiques, alcalines et renfermant des sels, qui permettent, une fois la purification effectuée, de mettre à disposition les protéines recombinées, après neutralisation, sous une forme physiologiquement tolérable et directement utilisable en médecine. Ce procédé est particulièrement approprié pour la purification d'allergènes et de fragments de ces derniers.
États désignés : AE, AG, AL, AM, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BR, BY, BZ, CA, CH, CN, CR, CU, CZ, DE, DK, DM, DZ, EE, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, HR, HU, ID, IL, IN, IS, JP, KE, KG, KP, KR, KZ, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LV, MA, MD, MG, MK, MN, MW, MX, MZ, NO, NZ, PL, PT, RO, RU, SD, SE, SG, SI, SK, SL, TJ, TM, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VN, YU, ZA, ZW.
Organisation régionale africaine de la propriété intellectuelle (ARIPO) (GH, GM, KE, LS, MW, MZ, SD, SL, SZ, TZ, UG, ZW)
Office eurasien des brevets (OEAB) (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM)
Office européen des brevets (OEB) (AT, BE, CH, CY, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE, TR)
Organisation africaine de la propriété intellectuelle (OAPI) (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Langue de publication : allemand (DE)
Langue de dépôt : allemand (DE)