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1. (WO2001016367) PROCEDES RELATIFS A DES ELEMENTS DE CONTROLE INTERNES EXOGENES PENDANT L'AMPLIFICATION D'ACIDE NUCLEIQUE
Dernières données bibliographiques dont dispose le Bureau international   

N° de publication :    WO/2001/016367    N° de la demande internationale :    PCT/US1999/006978
Date de publication : 08.03.2001 Date de dépôt international : 27.03.1999
CIB :
C07H 21/00 (2006.01), C12Q 1/68 (2006.01)
Déposants : THE PERKIN-ELMER CORPORATION [US/US]; 850 Lincoln Centre Drive Foster City, CA 94404 (US)
Inventeurs : AOYAGI, Kazuko; (US).
LIVAK, Kenneth, J.; (US)
Mandataire : BORTNER, Scott, R.; The Perkin-Elmer Corporation 850 Lincoln Centre Drive Foster City, CA 94404 (US)
Données relatives à la priorité :
09/048,880 26.03.1998 US (IA Considered Withdrawn 12.09.2001)
Titre (EN) METHODS FOR EXOGENOUS, INTERNAL CONTROLS DURING NUCLEIC ACID AMPLIFICATION
(FR) PROCEDES RELATIFS A DES ELEMENTS DE CONTROLE INTERNES EXOGENES PENDANT L'AMPLIFICATION D'ACIDE NUCLEIQUE
Abrégé : front page image
(EN)Reporter-quencher probe assays of nucleic acid amplification, such as PCR, are rendered more meaningful by the addition of internal control reagents. An internal control polynucleotide is amplified with internal control primers and the product is measured by correlation with increased fluorescence by polymerase mediated-exonuclease cleavage or hybridization of the internal control probe. Probes specific for target and internal control polynucleotides are labelled with spectrally resolvable reporters, allowing for concurrent detection and measurement of target and control amplification. A kit of all PCR reagents can be dispensed into reaction chambers in a high-throughput system for rapid and accurate nucleic acid amplification assay, with real-time or end-point measurements. Fluorescent signals correlated to target and internal control levels are spectrally resolvable and measured concurrently. A non-extending oligonucleotide or nucleic analog 'block', complementary to the internal control polynucleotide, is added to the amplification mixture to preclude amplification of the internal control polynucleotide and function as an internal negative control. The amplification control reagents, kits, and methods of the present invention provide positive and negative control tests occurring within, and measurable within, the reaction chamber.
(FR)Des analyses par sondes à reporteur-extincteur de l'amplification d'acide nucléique, telle que la PCR, sont rendues plus significatives par l'ajout de réactifs de contrôle internes. Un polynucléotide de contrôle interne est amplifié avec des amorces de contrôle internes et le produit est mesuré par corrélation avec une augmentation de fluorescence par clivage par exonucléase à médiation polymérase ou hybridation de l'élément de contrôle interne. Des sondes spécifiques de polynucléotides cibles et de contrôle internes sont marqués avec des reporteurs permettant la résolution spectrale, ce qui permet une détection et une mesure simultanées de l'amplification de la cible et de l'élément de contrôle. Un kit de tous les réactifs de PCR peut être introduit dans des chambres de réaction, dans un système à haut rendement, pour une analyse rapide et précise de l'amplification d'acide nucléique, avec des mesures en temps réel ou finales. Des signaux fluorescents corrélés à des niveaux de cibles et d'éléments de contrôle internes peuvent être spectralement résolus et mesurés en même temps. Un oligonucléotide de non-extension ou élément de blocage de type nucléique, complémentaire du polynucléotide de contrôle interne, est ajouté au mélange d'amplification pour empêcher l'amplification du polynucléotide de contrôle interne et fonctionner en tant qu'élément de contrôle négatif interne. Les réactifs de contrôle d'amplification, kits et procédés selon la présente invention fournissent des tests de contrôle positif et négatif qui sont effectués dans la chambre de réaction et dont les mesures peuvent être effectuées à l'intérieur de ladite chambre.
États désignés : AU, CA, JP.
Office européen des brevets (OEB) (AT, BE, CH, CY, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE).
Langue de publication : anglais (EN)
Langue de dépôt : anglais (EN)