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1. (WO1998038297) REUNION, EN UNE SEULE OPERATION, DE PLUSIEURS FRAGMENTS D'ADN
Dernières données bibliographiques dont dispose le Bureau international   

N° de publication :    WO/1998/038297    N° de la demande internationale :    PCT/IL1998/000095
Date de publication : 03.09.1998 Date de dépôt international : 26.02.1998
Demande présentée en vertu du Chapitre 2 :    17.09.1998    
CIB :
C12N 15/10 (2006.01), C12Q 1/68 (2006.01)
Déposants : GESHER - ISRAEL ADVANCED BIOTECS (1996) LTD. [IL/IL]; P.O. Box 98, 90830 Bet Neqofa (IL) (Tous Sauf US).
SHARON, Gil [IL/IL]; (IL) (US Seulement)
Inventeurs : SHARON, Gil; (IL)
Mandataire : LUZZATTO, Kfir; Luzzatto & Luzzatto, P.O. Box 5352, 84152 Beer-Sheva (IL)
Données relatives à la priorité :
120338 27.02.1997 IL
Titre (EN) SINGLE STEP ASSEMBLY OF MULTIPLE DNA FRAGMENTS
(FR) REUNION, EN UNE SEULE OPERATION, DE PLUSIEURS FRAGMENTS D'ADN
Abrégé : front page image
(EN)A method is described for the efficient single step directional assembly of two or more DNA fragments into a construct whereby fragments with complementary ends of at least 15 nucleotides are amplified by PCR or obtained by restriction cleavage, single-stranded overhangs are generated utilizing exonucleolitic activity of exonuclease III or T4 DNA polymerase or a functional equivalent thereof; after expose of the overhangs, the fragments are subjected to conditions facilitating annealing of the complementary overhangs, thus creating a single functional construct, then, the gaps which may have been created by the prior action of the exonuclease treatment, in the adjoining regions of the said construct are filled-in by T4 DNA polymerase or T7 DNA polymerase or by a functional equivalent thereof, and the construct is transformed and/or transfected into host cells with or without a prior ligation step.
(FR)La présente invention concerne un procédé efficace de réunion directionnelle en une seule opération portant sur au moins deux fragments d'ADN permettant de former une construction. Ce procédé consiste à prendre des fragments portant des extrémités complémentaires d'au moins 15 nucléotides, à les amplifier par amplification en chaîne par polymérase, ou à les obtenir par restriction clivage, et à générer des porte-à-faux d'un seul brin en utilisant l'activité exonucléolitique de l'exonucléase III, de la polymérase T4 d'ADN, ou de l'un de leurs équivalents fonctionnels. Après exposition aux porte-à-faux, les fragments sont soumis à des conditions favorisant l'annelage des porte-à-faux complémentaires, créant ainsi une construction fonctionnelle unique. Il est alors possible de prendre les intervalles qui ont été créés par l'action antérieure du traitement à l'exonucléase, au niveau des régions de jonction avec la construction considérée, et de les remplir de polymérase T4 d'ADN, de polymérase T7 d'ADN, ou de l'un de leurs équivalents fonctionnels. La construction se transforme ou se transfecte en cellules hôtes avec ou sans phase antérieure de ligation.
États désignés : AL, AM, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BR, BY, CA, CH, CN, CU, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, GB, GE, GH, GM, GW, HU, ID, IL, IS, JP, KE, KG, KP, KR, KZ, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LV, MD, MG, MK, MN, MW, MX, NO, NZ, PL, PT, RO, RU, SD, SE, SG, SI, SK, SL, TJ, TM, TR, TT, UA, UG, US, UZ, VN, YU, ZW.
Organisation régionale africaine de la propriété intellectuelle (ARIPO) (GH, GM, KE, LS, MW, SD, SZ, UG, ZW)
Office eurasien des brevets (OEAB) (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM)
Office européen des brevets (OEB) (AT, BE, CH, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE)
Organisation africaine de la propriété intellectuelle (OAPI) (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Langue de publication : anglais (EN)
Langue de dépôt : anglais (EN)