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1. WO1997043421 - PROCEDE DE BIOSYNTHESE PERMETTANT LA PREPARATION DE COBALAMINES

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[ FR ]

REVENDICATIONS.

1. Procédé de biosynthèse de cobalamines par fermentation d'un microorganisme procaryote producteur de cobalamine, caractérisé en ce que :

- on utilise un microorganisme transformé par au moins un fragment d'ADN codant pour un enzyme impliqué dans une voie de biosynthèse de la O-phospho-L-thréonine et l'on cultive ledit microorganisme dans des conditions permettant l'expression dudit enzyme et la production de cobalamine ; et/ou

- on ajoute dans le milieu de culture dudit microorganisme de la O-phospho-L-thréonine ; ou

- on utilise un microorganisme aérobie transformé par au moins un fragment d'ADN codant pour un enzyme implique dans une voie de biosynthèse du 5,6 diméthylbenzimidazole et l'on cultive ledit microorganisme en aérobiose, dans des conditions permettant l'expression dudit enzyme et la production de cobalamine.

2. Procédé selon la revendication 1 dans lequel on utilise un microorganisme transformé par un fragment d'ADN codant pour un polypeptide impliqué dans une voie de biosynthèse de la O-phospho-L-thréonine comprenant les gènes bluE et bluF de Rhodobacter capsulatus. ou un fragment homologue et/ou s'hybridant avec lesdits gènes bluE et bluF et ayant la fonction de coder pour un enzyme impliqué dans une voie de biosynthèse de la O-phospho-L-thréonine.

3. Procédé selon la revendication 1 dans lequel on utilise un microorganisme transformé par un fragment d'ADN codant pour un enzyme impliqué dans une voie de biosynthèse du 5,6-dimethylbenzimidazole comprenant le gène bluB de Rhodobacter capsulatus. ou un fragment homologue et/ou s'hybridant avec ledit gène bluB et ayant la même fonction de coder pour un enzyme impliqué dans une voie de biosynthèse du 5,6-dimethybenzimidazole que ledit gène.

4. Procédé selon l'une des revendications 2 à 3, caractérisé en ce que ledit fragment d'ADN comprend un fragment BamHI de 6,8 kb du plasmide pERl.

5. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que ledit fragment d'ADN comprend le fragment EcoRI/Clal de 2,1 kb du plasmide pER2.

6. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que ledit fragment d'ADN comprend le fragment EcoRI/EcoRV de 1,6 kb du plasmide pAHW25 ou du plasmide pER2.

7. Procédé de préparation de la vitamine B12 selon l'une des revendications 1 à 5.

8. Procédé selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisé en ce que ledit microorganisme est une souche de Pseudomonas denitrificans ou de Agrobacterium radiobacter.

9. Procédé de préparation de souches recombinantes de microorganisme procaryote producteur de cobalamine, caractérisé en ce qu'on transforme ledit microorganisme par les techniques de génie génétique par au moins un fragment d'ADN codant pour un enzyme impliqué dans une voie de biosynthèse de la O-phospho- L-thréonine ou du 5,6 diméthylbenzimidazole tel que défini dans les revendications 1 à 6.

10. Microorganisme recombinant obtenu par le procédé selon la revendication 9.

11. Microorganisme selon la revendication 10, caractérisé en ce qu'il s'agit d'une souche de Pseudomonas denitrificans ou Agrobacterium radiobacter.