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1. (WO1990006363) PROCEDE D'EXPRESSION D'UNE PROTEINE PAR INDUCTION GRACE AU GENE MUTANT DIHYDROFOLATE REDUCTASE (DHFR)
Dernières données bibliographiques dont dispose le Bureau international

N° de publication : WO/1990/006363 N° de la demande internationale : PCT/US1989/005412
Date de publication : 14.06.1990 Date de dépôt international : 30.11.1989
Demande présentée en vertu du Chapitre 2 : 06.07.1990
CIB :
C12N 9/06 (2006.01) ,C12N 9/72 (2006.01) ,C12N 15/85 (2006.01)
C CHIMIE; MÉTALLURGIE
12
BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
N
MICRO-ORGANISMES OU ENZYMES; COMPOSITIONS LES CONTENANT; CULTURE OU CONSERVATION DE MICRO-ORGANISMES; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE; MILIEUX DE CULTURE
9
Enzymes, p.ex. ligases (6.); Proenzymes; Compositions les contenant; Procédés pour préparer, activer, inhiber, séparer ou purifier des enzymes
02
Oxydoréductases (1.), p.ex. luciférase
06
agissant sur des composés contenant de l'azote comme donneurs (1.4, 1.5, 1.7)
C CHIMIE; MÉTALLURGIE
12
BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
N
MICRO-ORGANISMES OU ENZYMES; COMPOSITIONS LES CONTENANT; CULTURE OU CONSERVATION DE MICRO-ORGANISMES; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE; MILIEUX DE CULTURE
9
Enzymes, p.ex. ligases (6.); Proenzymes; Compositions les contenant; Procédés pour préparer, activer, inhiber, séparer ou purifier des enzymes
14
Hydrolases (3.)
48
agissant sur les liaisons peptidiques, p.ex. thromboplastine, aminopeptidase de la leucine (3.4)
72
Urokinase
C CHIMIE; MÉTALLURGIE
12
BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
N
MICRO-ORGANISMES OU ENZYMES; COMPOSITIONS LES CONTENANT; CULTURE OU CONSERVATION DE MICRO-ORGANISMES; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE; MILIEUX DE CULTURE
15
Techniques de mutation ou génie génétique; ADN ou ARN concernant le génie génétique, vecteurs, p.ex. plasmides, ou leur isolement, leur préparation ou leur purification; Utilisation d'hôtes pour ceux-ci
09
Technologie d'ADN recombinant
63
Introduction de matériel génétique étranger utilisant des vecteurs; Vecteurs: Utilisation d'hôtes pour ceux-ci; Régulation de l'expression
79
Vecteurs ou systèmes d'expression spécialement adaptés aux hôtes eucaryotes
85
pour cellules animales
Déposants :
DAMON BIOTECH, INC. [US/US]; 119 Fourth Avenue Needham Heights, MA 02194, US
Inventeurs :
LO, Kin-Ming; US
GILLIES, Stephen, D.; US
Mandataire :
PITCHER, Edmund, R. ; Lahive & Cockfield 60 State Street Boston, MA 02109, US
SMURZYNSKI, Thomas, V.; Lahive & Cockfield 60 State Street Boston, MA 02109, US
Données relatives à la priorité :
281,83308.12.1988US
Titre (EN) EXPRESSION INDUCTION METHOD EMPLOYING MUTANT DHFR GENE
(FR) PROCEDE D'EXPRESSION D'UNE PROTEINE PAR INDUCTION GRACE AU GENE MUTANT DIHYDROFOLATE REDUCTASE (DHFR)
Abrégé :
(EN) Disclosed is a method of producing increased amounts of a protein of interest in a cell by induction. The method includes transfecting a cell with multiple copies of an expression vector, each copy of which includes an expressible gene encoding an enzymatically functional dihydrofolate reductase (DHFR) and an expressible gene encoding a protein of interest. Transfected cells are cultured in the presence of methotrexate (MTX) to produce a plurality of clones. A clone containing plural copy number of the vectors which co-express DHFR and the protein of interest is then selected and cultured. The cultured clone is treated with MTX to enhance the expression of the protein of interest by inducing an increase in transcription without substantially amplifying the genes encoding the protein of interest and DHFR.
(FR) Procédé permettant d'accroître par induction la production d'une protéine donnée dans une cellule, qui consiste à introduire dans la cellule plusieurs copies d'un vecteur d'expression, chaque copie comprenant un gène exprimable codant pour dihydrofolate réductase (DHFR) fonctionnel et un gène exprimable codant pour une protéine particulière. On fait la culture de ces cellules en présence de méthotrexate (MTX) pour produire plusieurs clones. On sélectionne ensuite un clone contenant plusieurs copies des vecteurs qui co-expriment le DHFR ainsi que la protéine en question, et on en fait la culture. Ledit clone cultivé est ensuite traité au MTX pour accroître l'expression de ladite protéine en augmentant la transcription sans pour autant amplifier notablement les gènes codant pour ladite protéine et le DHFR.
États désignés : AU, JP
Office européen des brevets (OEB) (AT, BE, CH, DE, ES, FR, GB, IT, LU, NL, SE)
Langue de publication : Anglais (EN)
Langue de dépôt : Anglais (EN)
Également publié sous:
EP0555203JPH04502254AU1990047410