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1. (WO1989012692) METHODE POUR PURIFIER SUR UNE GRANDE ECHELLE DE L'HEPARINASE DE GRANDE PURETE
Dernières données bibliographiques dont dispose le Bureau international   

N° de publication : WO/1989/012692 N° de la demande internationale : PCT/US1989/002434
Date de publication : 28.12.1989 Date de dépôt international : 02.06.1989
Demande présentée en vertu du Chapitre 2 : 30.01.1990
CIB :
C07K 16/40 (2006.01) ,C12N 15/00 (2006.01) ,C12N 9/88 (2006.01)
C CHIMIE; MÉTALLURGIE
07
CHIMIE ORGANIQUE
K
PEPTIDES
16
Immunoglobulines, p.ex. anticorps monoclonaux ou polyclonaux
40
contre des enzymes
C CHIMIE; MÉTALLURGIE
12
BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
N
MICRO-ORGANISMES OU ENZYMES; COMPOSITIONS LES CONTENANT; CULTURE OU CONSERVATION DE MICRO-ORGANISMES; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE; MILIEUX DE CULTURE
15
Techniques de mutation ou génie génétique; ADN ou ARN concernant le génie génétique, vecteurs, p.ex. plasmides, ou leur isolement, leur préparation ou leur purification; Utilisation d'hôtes pour ceux-ci
C CHIMIE; MÉTALLURGIE
12
BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
N
MICRO-ORGANISMES OU ENZYMES; COMPOSITIONS LES CONTENANT; CULTURE OU CONSERVATION DE MICRO-ORGANISMES; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE; MILIEUX DE CULTURE
9
Enzymes, p.ex. ligases (6.); Proenzymes; Compositions les contenant; Procédés pour préparer, activer, inhiber, séparer ou purifier des enzymes
88
Lyases (4.)
Déposants : MASSACHUSETTS INSTITUTE OF TECHNOLOGY[US/US]; 77 Massachusetts Avenue Cambridge, MA 02139, US
Inventeurs : ZIMMERMAN, Joseph, J.; US
COONEY, Charles, L.; US
Mandataire : PABST, Patrea, L. @; Kilpatrick & Cody 100 Peachtree Street Suite 3100 Atlanta, GA 30303, US
Données relatives à la priorité :
203,23506.06.1988US
Titre (EN) LARGE SCALE METHOD FOR PURIFICATION OF HIGH PURITY HEPARINASE
(FR) METHODE POUR PURIFIER SUR UNE GRANDE ECHELLE DE L'HEPARINASE DE GRANDE PURETE
Abrégé :
(EN) The present invention is an improved process for purification of active heparinase and heparinase like enzymes from Gram negative organisms, in particular, $i(Flavobacterium heparinum). The primary advantage of the process is the fact that is allows large scale processing and high yield of heparinase. The heparinase is released from the pariplasmic space of the organism by osmotic shock treatment, first into an osmotically stabilized medium, secondly into a non-stabilized medium having a pH of approximately pH 6.0 and 8.6 with subsequent release into a second non-stabilized medium containing approximately 0.15 M sodium chloride, followed by fractionation by cation exchange chromatography, and, optionally, electrophoresis or gel filtration chromatography. Two proteins having heparinase activity have been isolated, one having a molecular weight of approximately 42,000 Daltons and the other having a molecular weight of 65,000 to 75,000 Daltons. Also described is the construction of a library for screening for the genes encoding the proteins having heparinase activity and two assays for detecting organisms producing heparinase, either $i(F. heparinum) or genetically engineered organisms.
(FR) Procédé de purification d'héparinase active et d'héparinase telle que les enzymes provenant d'organismes Gram négatifs, en particulier $i(Flavobacterium heparinum). L'avantage principal dudit procédé est qu'il permet des opérations à grande échelle produisant de grandes quantités d'héparinase. L'héparinase est libérée de l'espace périplasmatique de l'organisme par choc osmotique, d'abord dans un milieu osmotiquement stabilisé puis dans un milieu non stabilisé dont le pH est compris entre environ 6,0 et 8,6; elle est ensuite libérée dans un second milieu non stabilisé contenant environ 0,15 M de chlorure de sodium, puis fractionnée par chromatographie à échange cationique et, si on le désire, par chromatographie par électrophorèse ou par filtration du gel. On a isolé deux protéines contenant de l'héparinase active, dont l'une a un poids moléculaire d'environ 42.000 daltons et l'autre un poids moléculaire compris entre 65.000 et 75.000 daltons. La présente invention décrit en outre la construction d'une librairie pour le dépistage des gènes encodant les protéines à héparinase active, ainsi que deux essais pour détecter les organismes produisant de l'héparinase, soit $i(F. heparinum), soit des organismes génétiquement manipulés.
États désignés : JP
Office européen des brevets (OEB (AT, BE, CH, DE, FR, GB, IT, LU, NL, SE)
Langue de publication : anglais (EN)
Langue de dépôt : anglais (EN)