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1. (WO1988003169) AMPLIFICATION DE GENES UTILISANT DE RETROTRANSPOSONS
Dernières données bibliographiques dont dispose le Bureau international

N° de publication : WO/1988/003169 N° de la demande internationale : PCT/US1987/002788
Date de publication : 05.05.1988 Date de dépôt international : 26.10.1987
Demande présentée en vertu du Chapitre 2 : 10.06.1988
CIB :
C12N 15/62 (2006.01) ,C12N 15/81 (2006.01) ,C12N 15/90 (2006.01)
C CHIMIE; MÉTALLURGIE
12
BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
N
MICRO-ORGANISMES OU ENZYMES; COMPOSITIONS LES CONTENANT; CULTURE OU CONSERVATION DE MICRO-ORGANISMES; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE; MILIEUX DE CULTURE
15
Techniques de mutation ou génie génétique; ADN ou ARN concernant le génie génétique, vecteurs, p.ex. plasmides, ou leur isolement, leur préparation ou leur purification; Utilisation d'hôtes pour ceux-ci
09
Technologie d'ADN recombinant
11
Fragments d'ADN ou d'ARN; Leurs formes modifiées
62
Séquences d'ADN codant pour des protéines de fusion
C CHIMIE; MÉTALLURGIE
12
BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
N
MICRO-ORGANISMES OU ENZYMES; COMPOSITIONS LES CONTENANT; CULTURE OU CONSERVATION DE MICRO-ORGANISMES; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE; MILIEUX DE CULTURE
15
Techniques de mutation ou génie génétique; ADN ou ARN concernant le génie génétique, vecteurs, p.ex. plasmides, ou leur isolement, leur préparation ou leur purification; Utilisation d'hôtes pour ceux-ci
09
Technologie d'ADN recombinant
63
Introduction de matériel génétique étranger utilisant des vecteurs; Vecteurs: Utilisation d'hôtes pour ceux-ci; Régulation de l'expression
79
Vecteurs ou systèmes d'expression spécialement adaptés aux hôtes eucaryotes
80
pour fongi
81
pour levures
C CHIMIE; MÉTALLURGIE
12
BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
N
MICRO-ORGANISMES OU ENZYMES; COMPOSITIONS LES CONTENANT; CULTURE OU CONSERVATION DE MICRO-ORGANISMES; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE; MILIEUX DE CULTURE
15
Techniques de mutation ou génie génétique; ADN ou ARN concernant le génie génétique, vecteurs, p.ex. plasmides, ou leur isolement, leur préparation ou leur purification; Utilisation d'hôtes pour ceux-ci
09
Technologie d'ADN recombinant
87
Introduction de matériel génétique étranger utilisant des procédés non prévus ailleurs, p.ex. co-transformation
90
Introduction stable d'ADN étranger dans le chromosome
Déposants :
WHITEHEAD INSTITUTE FOR BIOMEDICAL RESEARCH [US/US]; Nine Cambridge Center Cambridge, MA 02142, US
Inventeurs :
BOEKE, Jef, D.; US
FINK, Gerald, R.; US
GARFINKEL, David, J.; US
Mandataire :
GRANAHAN, Patricia @; Hamilton, Brook, Smith & Reynolds Two Militia Drive Lexington, MA 02173, US
Données relatives à la priorité :
923,84027.10.1986US
Titre (EN) GENE AMPLIFICATION USING RETROTRANSPOSONS
(FR) AMPLIFICATION DE GENES UTILISANT DE RETROTRANSPOSONS
Abrégé :
(EN) A method of amplifying a gene of interest in eukaryotic cells, as well as cells in which amplification can be carried out. According to the present invention, a gene of interest is inserted into a functional retrotransposon, whose transposition or movement in host cell genomic DNA can be controlled by an inducible promoter, to form an amplification cassette. The amplification cassette is introduced into appropriate host cells under non-inducing conditions. Induction of the promoter results in abundant transcription of the amplification cassette, which is accompanied by frequent transposition of the cassette to multiple sites in host genomic DNA. In a preferred embodiment, a gene of interest is inserted into a yeast transposon, or Ty element. The resulting gene-Ty cassette is inserted into a plasmid also carrying the inducible promoter $i(GAL1), a 2 micron origin of replication fragment and a $i(URA3) gene. Yeast cells are transformed with the plasmid under non-inducing conditions (i.e., in glucose-containing media). Cells containing the plasmid are cultured in galactose-containing media, which results in induction of the $i(GAL1) promoter, abundant transcription of the gene-Ty cassette and its frequent transposition in yeast cell genomic DNA. This results in amplification of the gene of interest. Expression of the increased copy number results in increased production of the encoded protein.
(FR) Procédé d'amplification d'un gène intéressant dans des cellules eukaryotiques, et cellules dans lesquelles l'amplification peut être effectuée. Selon la présente invention, un gène intéressant est introduit dans un rétrotransposon fonctionnel, dont la transposition ou le mouvement dans l'ADN génomique des cellules hôtes peut être contrôlé par un promoteur inductible, pour former une cassette d'amplification. Celle-ci est introduite dans des cellules hôtes appropriées dans des conditions de non-induction. L'induction du promoteur se traduit par une abondante transcription de la cassette d'amplification, ce qui s'accompagne de la transposition fréquente de la cassette dans des sites multiples de l'ADN génomique hôte. Dans une forme préférée d'exécution, un gène intéressant est introduit dans un transposon de levure, ou élément Ty. La cassette résultante gène-Ty est introduite dans un plasmide contenant également le promoteur inductible $i(GAL1), un fragment d'origine de réplication d'une longueur de 2 microns et un gène $i(URA3). Les cellules de levure sont transformées avec le plasmide dans des conditions de non-induction (c'est-à-dire dans des milieux contenant du glucose). Les cellules contenant le plasmide sont cultivées dans des milieux contenant du galactose, ce qui provoque l'induction du promoteur $i(GAL1), une abondante transcription de la cassette gène-Ty et sa fréquente transposition dans l'ADN génomique des cellules de levure. Il en résulte une amplification du gène intéressant. L'expression du nombre accru de copies se traduit par un accroissement de production de la protéine codée.
États désignés : AU, DK, JP
Office européen des brevets (OEB) (AT, BE, CH, DE, FR, GB, IT, LU, NL, SE)
Langue de publication : Anglais (EN)
Langue de dépôt : Anglais (EN)
Également publié sous:
AU1987081710