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Paramétrages

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1. EP1707638 - PROCEDE DE DETECTION MULTIPLEX DE MICRO-ORGANISMES

Office Office européen des brevets (OEB)
Numéro de la demande 04807697
Date de la demande 24.12.2004
Numéro de publication 1707638
Date de publication 04.10.2006
Type de publication B1
CIB
C CHIMIE; MÉTALLURGIE
12
BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
Q
PROCÉDÉS DE MESURE, DE RECHERCHE OU D'ANALYSE FAISANT INTERVENIR DES ENZYMES OU DES MICRO-ORGANISMES; COMPOSITIONS OU PAPIERS RÉACTIFS À CET EFFET; PROCÉDÉS POUR PRÉPARER CES COMPOSITIONS; PROCÉDÉS DE COMMANDE SENSIBLES AUX CONDITIONS DU MILIEU DANS LES PROCÉDÉS MICROBIOLOGIQUES OU ENZYMOLOGIQUES
1
Procédés de mesure, de recherche ou d'analyse faisant intervenir des enzymes ou des micro-organismes; Compositions à cet effet; Procédés pour préparer ces compositions
68
faisant intervenir des acides nucléiques
C CHIMIE; MÉTALLURGIE
12
BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
N
MICRO-ORGANISMES OU ENZYMES; COMPOSITIONS LES CONTENANT; CULTURE OU CONSERVATION DE MICRO-ORGANISMES; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE; MILIEUX DE CULTURE
15
Techniques de mutation ou génie génétique; ADN ou ARN concernant le génie génétique, vecteurs, p.ex. plasmides, ou leur isolement, leur préparation ou leur purification; Utilisation d'hôtes pour ceux-ci
G PHYSIQUE
01
MÉTROLOGIE; ESSAIS
N
RECHERCHE OU ANALYSE DES MATÉRIAUX PAR DÉTERMINATION DE LEURS PROPRIÉTÉS CHIMIQUES OU PHYSIQUES
33
Recherche ou analyse des matériaux par des méthodes spécifiques non couvertes par les groupes G01N1/-G01N31/146
48
Matériau biologique, p.ex. sang, urine; Hémocytomètres
C12Q 1/68
C12N 15/00
G01N 33/48
CPC
C12Q 1/686
C12Q 1/689
Y02A 50/451
Déposants PRIMA MEAT PACKERS LTD
NAT AGRICULTURE & FOOD RES ORGANIZATION
Inventeurs HORIKOSHI NAOKO
KAWASAKI SUSUMU
OKADA YUKIO
TAKESHITA KAZUKO
SAMESHIMA TAKASHI
KAWAMOTO SHINICHI
ISSHIKI KENJI
États désignés
Données relatives à la priorité 2003435943 26.12.2003 JP
2004019340 24.12.2004 JP
Titre
(DE) VERFAHREN ZUM NACHWEIS VON MIKROORGANISMEN MITTELS MULTIPLEX-ANALYSE
(EN) METHOD OF MULTIPLEX MICROORGANISM DETECTION
(FR) PROCEDE DE DETECTION MULTIPLEX DE MICRO-ORGANISMES
Abrégé
(EN)
The present invention is to provide a multiple detection method that can detect contaminating microorganisms existing in foods, including pathogenic Escherichia coli O157, Listeria monocytogenes and Salmonella spp., with high sensitivity comparable or even superior to official methods, comprising the steps of amplifying a plural number of target genes with a single PCR reaction tube and analyzing the same. The following steps are performed consecutively: (A) a step of extracting DNA of the target microorganisms to be detected by treating with at least a lytic enzyme such as Achromopepidase and Lyzocyme and/or bacteriocin having lytic activity such as Enterolysine, a surfactant and a protein denaturing agent; and (B) a step of mixing a specific primer to the target microorganisms to be detected to perform multiplex PCR. Further, it is preferable to add a step of culturing with a culture condition where 1 CFU/100 g microorganisms becomes 10 3 CFU/ml or more after 18 to 48 h of culture, for example that the pH after culture becomes 5.1 or more, before the step of extracting DNA of the target microorganisms to be detected.

(FR)
La présente invention concerne un procédé de détection multiplex permettant de détection des micro-organismes contaminants dans des aliments (par exemple, les agents pathogènes, E. Coli 0157, Listeria monocytogene et les salmonelles) avec une sensibilité élevée comparable, voire supérieur à la sensibilité obtenue dans un procédé classique. Le procédé décrit dans cette invention consiste à amplifier plusieurs gènes cibles dans un seul tube PCR puis à les analyser. Le procédé susmentionné comprend les étapes qui consistent (A) à traiter une enzyme lytique, telle qu'une achromopeptidase ou une lysozyme et/ou une bactériocine présentant une activité lytique, telle que l'entérolysine avec un tensioactif et avec un agent de dénaturation des protéines afin d'extraire les ADN de micro-organismes cibles devant être détectés ; et (B) à mélanger des amorces spécifiques avec les micro-organismes devant être détectés et à procéder à une PCR multiplex. Selon le mode de réalisation décrit dans cette invention, il est avantageux d'effectuer l'étape de culture des micro-organismes dans des conditions de culture qui permettent la prolifération de 1 CFU/100g de micro-organismes avant la culture de manière à obtenir un niveau égal ou supérieur à 103 CFU/ml après culture pendant 18 à 48 heures (par exemple, dans des conditions qui permettent d'obtenir une valeur de pH égale ou supérieure à 5.1 après achèvement de la culture), avant l'étape (A) qui consiste à extraire les ADN des micro-organismes devant être détectés.

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