本发明提供了对于免疫球蛋白分子的每个结合位点具有不同特异性的新型双特异性单克隆抗体，和用于产生对于免疫球蛋白分子的每个结合位点具有不同特异性的新型双特异性单克隆抗体的方法。该抗体由单一重链和两条不同轻链组成，一条含有κ恒定结构域和另一条具有λ恒定结构域。本发明提供了用于分离具有不同特异性但共享共同重链的抗体的方法。本发明还提供了用于两条轻链和单一重链的控制共表达的方法，所述控制共表达导致单特异性和双特异性抗体的装配。本发明提供了产生完全人双特异性和二价抗体以及两种单特异性抗体和一种双特异性抗体的抗体混合物的方法，所述完全人双特异性和二价抗体在序列中是未改变的并且不涉及接头或其他非人序列的使用。本发明还提供了有效纯化所述双特异性抗体的方法。