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1. WO2016095087 - UTILISATION DE L'ACIDE CHLOROGÉNIQUE DANS LA PRÉPARATION D'UN MÉDICAMENT INDIQUÉ POUR LE TRAITEMENT DU VITILIGO

Document

说明书

发明名称 0001   0002   0003   0004   0005   0006   0007   0008   0009   0010   0011   0012   0013   0014   0015   0016   0017   0018   0019   0020   0021   0022   0023   0024   0025   0026   0027   0028   0029   0030   0031   0032   0033   0034   0035   0036   0037   0038   0039   0040   0041   0042   0043   0044   0045   0046   0047   0048   0049   0050   0051   0052   0053   0054   0055   0056   0057   0058   0059   0060   0061   0062   0063   0064   0065   0066   0067   0068   0069   0070   0071   0072   0073   0074   0075   0076   0077   0078   0079   0080   0081   0082   0083   0084   0085   0086   0087  

权利要求书

1   2   3   4   5   6   7  

说明书

发明名称 : 绿原酸在制备治疗白癜风的药物中的用途

技术领域

[0001]
本发明涉及绿原酸在制备治疗白癜风的药物中的用途。

背景技术

[0002]
绿原酸(Chlorogenic acid,CGA),又名咖啡单宁酸,化学名为3-0-咖啡酰奎尼酸(3-0-caffeoylquinic acid),是由咖啡酸(Caffeic acid)与奎尼酸(Quinic acid)组成的羧酚酸。
[0003]
绿原酸是植物体有氧呼吸代谢的产物,是许多中药材以及水果蔬菜中的主要有效成分,具有多种生物活性,如:心血管保护作用、抗氧化作用、抗紫外及抗辐射作用、抗诱变及抗癌作用、抗菌作用、抗病毒作用、降脂降糖作用、免疫调节作用等。在医药化工和食品等领域都具有广泛的应用。
[0004]
发明内容
[0005]
本发明的技术方案是提供了绿原酸在制备治疗白癜风的药物中的用途。
[0006]
本发明提供了绿原酸在制备治疗白癜风的药物中的用途。
[0007]
其中,所述的药物是降低皮损处TNF-α和IL-4的表达的药物。
[0008]
其中,所述的药物是促进黑素细胞生成的药物。
[0009]
其中,所述的药物是由绿原酸为有效成分,加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。
[0010]
其中,所述的制剂是口服制剂、注射制剂或外用透皮给药制剂。
[0011]
其中,所述的制剂的使用剂量为:1-100mg/kg。进一步优选地,所述的制剂的使用剂量为:1-30mg/kg。
[0012]
本发明试验表明,绿原酸能改善白癜风模型的病理变化,降低皮损处TNF-α和IL-4的表达,促进黑素细胞的生成,为其临床治疗白癜风提供了理论依据。

具体实施方式

[0013]
实例1:绿原酸治疗白癜风的体内药效学试验研究
[0014]
1.材料
[0015]
1)动物
[0016]
黑色豚鼠,体重300~350g,雌雄各半。
[0017]
2)试剂与试验药物
[0018]
对苯二酚、甲氧沙林片、绿原酸;酪氨酸酶、胆碱酯酶(CHE)、单胺 氧化酶(MAO)、丙二醛(MDA)测定试剂盒
[0019]
2.实验方法
[0020]
1)模型制备及分组给药
[0021]
取黑色豚鼠,用电动剃毛刀剃取背部毛面积5cm×5cm,按体重随机分组,每组10只,即空白对照组(等容量生理盐水)、模型组(等容量生理盐水)、阳性对照组(甲氧沙林片2.8mg/kg)、绿原酸小剂量组(15mg/kg)、绿原酸中剂量组(30mgkg)、绿原酸大剂量组(60mg/kg)。其中空白对照组在脱毛区涂抹生理盐水0.05ml,其余各组均在脱毛区涂抹5%氢醌0.5ml,每天2次,连续涂抹11天,制备白癜风豚鼠模型。第11天开始各组分别每天在涂抹氢醌过后1小时按剂量分别给药,每天1次,连续给药50天。
[0022]
2)观察指标及测定
[0023]
①疗效判定
[0024]
实验结束后,肉眼观察豚鼠背部皮肤色素分布。疗效判断标准(以豚鼠用药部位中心3cm 2为一观察单位):优为受试区(3cm 2)色素基本恢复正常;良为受试区出现色素面积>50%;中为受试区出现色素面积<50%;差为受试区皮肤呈苍白或白斑状,总有效率以优加良计。
[0025]
②血液流变学测定
[0026]
末次给药后40min,于腹部主动脉取血,离心得血浆,用于CHE、MAO、MDA、TYR活性的测定,测血液流变学指标(采用YDA-IU血液流变仪测定)。
[0027]
③皮肤黑色素的测定
[0028]
将各组豚鼠取皮肤1cm×1cm,用10%甲醛固定,常规石蜡包埋切片,用硫酸亚铁(Lillie法)进行黑色素染色,观察表皮基底细胞和棘细胞黑色素分布和毛囊有黑色素的豚鼠个数。每个标本观察10个高倍视野,计算每100个表皮基底细胞中含黑素颗粒的基底细胞的平均数量。程度分级:“-”表示无黑色素;“±”表示偶见黑色素;“+”表示30%~50%有黑色素;“++”表示51%~85%有黑色素;“+++”表示85%以上有黑色素。
[0029]
3.统计学方法
[0030]
所有数据均用SPSS 19.0统计软件处理。
[0031]
4.结果
[0032]
1)疗效观察
[0033]
肉眼观察模型组豚鼠表皮颜色均明显苍白,部分毛发也发白,与正常组比较差异有显著性,经绿原酸各剂量组治疗后,疗效明显,肉眼观察豚鼠皮肤也逐渐黑化,绿原酸各给药组颜色呈棕黑色,比较接近正常组,并有少量色素沉着,与阳性对照组比较有显著性差异,结果见表1。
[0034]
表1 绿原酸对白癜风豚鼠模型的疗效观察(3cm 2,n=10)
[0035]


[0036]
注:与模型组比较*P<0.05,**P<0.01
[0037]
2)绿原酸对模型豚鼠血液流变学各指标的影响
[0038]
造模后,模型组豚鼠全血粘度和血浆粘度明显升高,绿原酸15mg/kg,30mg/kg,60mg/kg能明显降低模型豚鼠的全血粘度和血浆粘度。绿原酸各给药组降低模型豚鼠的全血粘度和血浆粘度明显优于阳性组,结果见表2
[0039]
表2 绿原酸对白癜风豚鼠模型的血液流变学各指标的影响



[0040]


[0041]
注:与模型组比较*P<0.05,**P<0.01
[0042]
3)绿原酸对模型豚鼠血浆中MAO、CHE、MDA、TYR指标的影响
[0043]
造模后,模型组豚鼠血浆MAO、CHE及MDA含量明显增加,酪氨酸酶含量明显减少,绿原酸15mg/kg、30mg/kg、60mg/kg豚鼠血浆中MAO、CHE及MDA的含量均明显降低,绿原酸15mg/kg、30mg/kg、60mg/kg能明显增加皮肤黑色素中酪氨酸酶的含量。结果见表3。
[0044]
表3 绿原酸对白癜风豚鼠模型的血浆中MAO、CHE、MDA、TYR水平的影响

[0045]


[0046]
注:与模型组比较*P<0.05,**P<0.01
[0047]
4)绿原酸对模型豚鼠皮肤黑色素的影响
[0048]
造模后,模型组基底层和棘层的黑色明显缺失,绿原酸15mg/kg、30mg/kg、60mg/kg能明显增加模型豚鼠的皮肤黑色素,明显增加皮肤表皮基底细胞和棘细胞黑色素分布和皮肤毛囊中黑色素。结果见表4。
[0049]
表4 绿原酸对模型豚鼠皮肤黑色素的影响

[0050]


[0051]
5.结论
[0052]
上述实验结果表明,绿原酸可明显增加实验性白癜风模型豚鼠的皮肤黑色素,明显增加皮肤表皮基底细胞和棘细胞黑色素分布,能使皮肤毛囊中黑色素显著增加,血液中酪氨酸酶含量也显著性增加,并且显著性改善血液流变学各项指标;说明绿原酸能增加实验性白癜风模型豚鼠皮肤黑色素生成,减少皮肤黑色素分解和改善血液循环,对白癜风起到较好的治疗作用。
[0053]
实例2:绿原酸对白癜风豚鼠模型免疫器官脏器系数及皮损区TNF-α、 IL-10、IL-4、IFN-γ表达的影响
[0054]
1.材料
[0055]
1)动物
[0056]
黑色豚鼠,体重300~350g,雌雄各半。
[0057]
2)试剂与试验药物
[0058]
对苯二酚、甲氧沙林片、绿原酸
[0059]
2.实验方法
[0060]
1)实验性白癜风豚鼠模型制备
[0061]
采用对苯二酚(氢醌)制备实验性白癜风豚鼠模型。取健康黑色豚鼠,雌雄各半,用电动剃毛刀剃取背部毛面积5cm×5cm,每天在脱毛区涂抹5%的氢醌0.5ml,每天2次,连续涂抹50天,制备白癜风豚鼠模型。
[0062]
2)动物分组及给药
[0063]
将上述模型豚鼠随机分为5组,分别为模型组、阳性组、绿原酸小剂量组(15mg/kg)、绿原酸中剂量组(30mg/kg)、绿原酸大剂量组(60mg/kg),每组10只;另取10只未造模豚鼠作为空白对照组。各药物组豚鼠分别于造模第10日起开始给药,空白对照组和模型组豚鼠分别给予等容量的生理盐水,连续给药50天。
[0064]
3)动物处理
[0065]
治疗结束后,处死豚鼠,取用药部位中心1cm×1cm皮肤,中性甲醛固定,常规石蜡包埋、切片。并取豚鼠胸腺、脾脏称重,计算胸腺系数。
[0066]
4)免疫组化法观察IL-4、TNF-α
[0067]
切片常规脱蜡至水。热修复抗原:0.01M枸橼酸盐缓冲液(pH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电,切片浸入,冷却后PBS洗涤1-2次。30%H2O21份+蒸馏水10份混合,室温10分钟以灭活内源性酶。PBS洗5分钟×3次。正常山羊免疫血清封闭,室温孵育15分钟,倾去血清,不洗。滴加按1:100稀释的HMB45抗体,4℃过夜。PBS洗2分钟×3次。滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液,37℃孵育10分钟。PBS洗5分钟×3次。DAB显色,镜下控制反应时间,20s-80s,至显色满意。蒸馏水洗涤,终止显色。苏木素轻度复染,盐酸酒精分化,流水冲洗返蓝1分钟。脱水,透明,封片。显微镜观察。
[0068]
3.统计学方法及分析
[0069]
所有数据均用SPSS 19.0统计软件处理。
[0070]
IL-4、TNF-α的表达:
[0071]
根据染色程度以及着色细胞的百分比进行半定量评分。每个切片随机选取5处高倍视野(200×),根据阳性细胞数进行评分,评分标准为:0分, <25%着色细胞;1分,25%-50%着色细胞;2分,50%-75%着色细胞;3分,>75%着色细胞。染色程度评分标准为:0分,无染色;1分,浅黄色;2分,棕黄色;3分棕褐色。将染色程度分加上着色细胞百分比分得出总积分,按照积分分为4个等级:0分,阴性(-);2分,弱阳性(+);3-4分,阳性(++);5-6分,强阳性(+++)。统计学采用秩和检验方法(Kruskal-Wallis法)。
[0072]
4.结果
[0073]
1)绿原酸对模型豚鼠免疫器官脏器系数的影响
[0074]
模型组豚鼠胸腺和脾脏的脏器系数明显减小,与空白对照组比较差异显著,用药后,绿原酸各剂量组能增加模型豚鼠胸腺和脾脏和脏器系数,与模型组比较差异显著。表明,绿原酸能够增强模型豚鼠的免疫的功能。见表5。
[0075]
表5 绿原酸对模型豚鼠免疫器官脏器系数的影响

[0076]


[0077]
注:与正常对照组比较,*P<0.05,**P<0.01;与模型组比较,#P<0.05,##P<0.01
[0078]
2)绿原酸对白癜风豚鼠模型皮损区TNF-α、IL-10、IL-4、IFN-γ表达的影响
[0079]
TNF-α阳性细胞主要分布于表皮基底层、棘层、颗粒层,少数阳性细胞分布在真皮浅层;IL-4阳性细胞主要分布于表皮基底层、棘层,对照组呈弱阳性表达。模型组皮损区TNF-α和IL-4表达水平明显高于正常对照组,差异有显著性(P<0.01);治疗组皮损区TNF-α和IL-4表达水平明显低于模型组,差异有显著性(P<0.01)。
[0080]
表6 绿原酸对皮损区TNF-α表达的影响(阳性例数)(秩和检验)
[0081]
[表0001]
组别 例数 - + ++ +++
空白对照组 10 4 5 1 0
模型组 10 0 0 2 8
绿原酸组 10 4 4 2 0

[0082]
注:模型组与正常对照组比较差异有显著性(P<0.01);治疗组与模型 组比较差异有显著性(P<0.01)
[0083]
表7 绿原酸对皮损区IL-4表达的影响(阳性例数)(秩和检验)
[0084]
[表0002]
组别 例数 - + ++ +++
空白对照组 10 4 4 2 0
模型组 10 0 0 3 7
绿原酸组 10 3 5 2 0

[0085]
注:模型组与正常对照组比较差异有显著性(P<0.01);治疗组与模型组比较差异有显著性(P<0.01)
[0086]
5.结论
[0087]
绿原酸能改善白癜风模型的病理变化,降低皮损处TNF-α和IL-4的表达,促进黑素细胞的生成,为其临床治疗白癜风提供了理论依据。

权利要求书

[权利要求 1]
绿原酸在制备治疗白癜风的药物中的用途。
[权利要求 2]
根据权利要求1所述的用途,其特征在于:所述的药物是降低皮损处TNF-α和IL-4的表达的药物。
[权利要求 3]
根据权利要求1所述的用途,其特征在于:所述的药物是促进黑素细胞生成的药物。
[权利要求 4]
根据权利要求1-3任意一项所述的用途,其特征在于:所述的药物是由绿原酸为有效成分,加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。
[权利要求 5]
根据权利要求4所述的用途,其特征在于:所述的制剂是口服制剂、注射制剂或外用透皮给药制剂。
[权利要求 6]
根据权利要求5所述的用途,其特征在于:所述的制剂的使用剂量为:1-100mg/kg。
[权利要求 7]
根据权利要求6所述的用途,其特征在于:所述的制剂的使用剂量为:1-30mg/kg。