Traitement en cours

Veuillez attendre...

Paramétrages

Paramétrages

Aller à Demande

1. EA201071272 - НОВЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ АМИНОКИСЛОТ, СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЕ

Note: Texte fondé sur des processus automatiques de reconnaissance optique de caractères. Seule la version PDF a une valeur juridique

[ RU ]

НОВЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ АМИНОКИСЛОТ, СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И

ПРИМЕНЕНИЕ

Изобретение относится к новым смешанным ингибиторам неприлизина и аминопептидазы N с пролонгированным действием.

Известно, что энкефалины -Tyr-Gly-Gly-Phe-Met и Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu- являются эндогенными лигандами рецепторов μ и δ опиоидов, локализации которых (Waksman et al. (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 83, 1523-1527) и функции которых различны: μ рецепторы по существу вовлечены в передачу ноцицептивных импульсов, а δ рецепторы - в регуляцию настроения и адаптационное поведение, в частности, при стрессе (обзор приведен в Noble et Roques, 2007, Expert Opin. Ther. Targets, 11 , 145-159), (Jutkiewicz et al., 2006, Eur. J. Pharmacol., 531 , 151-159).

Интрацеребровентрикулярное введение экзогенных энкефалинов индуцирует временный анальгезирующий ответ в связи с очень быстрым катаболизмом этих пептидов двумя ферментами, неприлизином (NEP, Е.С. 3.4.24.11), который расщепляет связь Gly3-Phe4 энкефалинов, и аминопептидазой N (APN, Е.С. 3.4.11.2), которая высвобождает Ν-концевой тирозин (обзор приведен в Roques et al., 1993, Pharmacol. Rev. 45, 88-146).

Известны смешанные ингибиторы этих двух ферментов, которые посредством полной защиты эндогенных энкефалинов от их ферментативного расщепления выявляют фармакологические, в частности, анальгетические и антидепрессивные активности энкефалинов. Смешанные ингибиторы этих обеих ферментативных активностей, как описано на предшествующем уровне техники, представляют собой соединения с функциональной группой гидроксамата (FR 2518088 и FR 2605004), соединения аминофосфина (FR 2755135 и FR 2777780) и производные аминокислот (FR 2651229 и WO2007/048787). В случае соединений с

функциональной группой гидроксамата наблюдали хорошую активность in vitro и in vivo после введения посредством интрацеребровентрикулярного пути (Eur. J. Pharmacol. 102, (1984), 525-528; Eur. J. Pharmacol., 165, (1989), 199-207; Eur. J. Pharmacol., 192, (1991), 253-262); значительную активность можно было также продемонстрировать после внутривенного введения (iv) в модели артритных крыс (Brain Research, 497, (1989), 94-101). В случае производных фосфина и производных аминокислот, описанных в заявке FR 2651229, хорошая активность in vivo была продемонстрирована после введения посредством iv пути, когда исследуемые молекулы растворяли в смеси масла, этанола и воды (J. Med. Chem., 43, (2000), 1398-1408; J. Med. Chem., 44, (2001 ), 3523-3530; J. Pharm. Exp. Ther., 261 , (1992), 181-190). Производные аминокислот, описанные в заявке WO2007/048787, являются смешанными ингибиторами, растворимыми в водной среде, которые обладают анальгезирующими свойствами после введения посредством iv пути и посредством перорального пути лабораторным животным в дозах, совместимых с введением людям. К сожалению, эти молекулы в животных моделях боли обладают коротким периодом действия (примерно 40 мин) с максимумом около 10 мин и возвращаются к обычному состоянию после 15-30 мин, что может представлять значительное препятствие для терапевтических применений, если период действия имеет такой же порядок у людей.

Следует напомнить, что период действия представляет собой время, в течение которого активный ингредиент, содержащийся в лекарстве, в сайте его действия производит свой терапевтический или превентивный эффект. Затем он выводится организмом.

В целях улучшения периода действия этих молекул были сделаны модификации в их структурах.

Одним из объектов изобретения является разработка новых водорастворимых соединений, способных к совместному ингибированию

обеих ферментативных активностей, ответственных за расщепление энкефалинов, и к проявлению их фармакологических свойств в центральных и периферических тестах после введения, предпочтительно посредством внутривенного пути или посредством перорального пути, и для которых период действия на лабораторном животном равен 120 мин или более.

Следовательно, новые соединения обладают свойствами морфиновых веществ, в частности, анальгезией, полезными эффектами на поведение (уменьшением эмоциональной компоненты боли и антидепрессивными ответами) и периферическими (антидиарейными, противокашлевыми, противовоспалительными) эффектами, не обладая их основными недостатками (переносимостью, физическими и психическими привыканиями, угнетением дыхания, констипацией, тошнотой и т.д.).

Кроме того, воспалительные, нейрогенные и невропатические боли, для которых значима периферическая компонента, и ноцицептивные боли уменьшаются или даже устраняются соединениями по изобретению, предпочтительно вводимыми посредством перорального пути, и это происходит без форсирования достижения последними центральной нервной системы. Этот очень интересный, но неожиданный результат был ранее продемонстрирован применением антагониста, метилналоксония, неспособного к поступлению в головной мозг (Milne R.J. et al. (1990) Neuroscience Lett. 1 14, 259-264). Оно полностью снижает все эффекты вследствие стимуляции церебральных опиоидных рецепторов соединениями по изобретению без изменения анальгезирующих эффектов соединений на эти боли, в частности, на нейрогенные, невропатические, нервно-воспалительные и ноцицептивные боли.

Другим объектом изобретения является предложение комбинаций известных соединений в связи с их антиноцицептивными свойствами, но обладающими вредными вторичными эффектами при сильных дозах, и

соединений, заявленных в настоящем изобретении. Эти комбинации более конкретно относятся к морфину и его производным, Л9-тетрагидроканнабинолу (А9 ТНС) и его производным, а также производным ГАМК, таким как габапентин или прегабалин. Действительно, было возможно доказать сильное потенцирование антиноцицептивных ответов, полученное за счет комбинации субактивных доз одного из соединений, заявленных в настоящей заявке, и одного из вышеупомянутых анальгетиков (морфина, Л9ТНС, габапентина).

Более конкретно, объектом изобретения являются соединения, имеющие приведенную ниже формулу (I):

R1NH-CH(R2)-CH2-S-S-CH2-C(R3)(R4)-CONH-C-(R5)(R6)-COOR7 где:

Ri представляет собой (ацилокси)алкилкарбаматную группу

-(CO)-O-C(R8)(R9)-OC(O)-R10, где

R8 и R9 независимо друг от друга представляют собой атом водорода, алкильную, арильную, арилалкильную, циклоалкильную, циклогетероалкильную, гетероалкильную, гетероарильную или гетероарилалкильную группу; или

взятые вместе, R8 и R9 могут образовать циклоалкил с 5 или

6 членами;

Rio представляет собой алкильную, арильную, арилалкильную, циклоалкильную, циклогетероалкильную, гетероалкильную, гетероарильную или гетероарилалкильную группу;

R2 представляет собой:

нормальную или разветвленную насыщенную углеводородную цепь, имеющую от 1 до 6 атомов углерода, необязательно замещенную:

> радикалом ОН, СЖц, SH, SRn или S(0)Rn, где в каждом из этих радикалов R представляет собой нормальную или разветвленную углеводородную цепь с 1-4 атомами углерода, фенильный радикал или бензильный радикал,

*> фенильный или бензильный радикал, необязательно замещенный:

• 1-5 атомами галогена, предпочтительно атомами фтора,

• радикалом ОН, ORn, SH, SRn или S(0)Rn, где Rn имеет такое же значение, как указано выше,

метиленовый радикал, замещенный 5- или 6-членным ароматическим или насыщенным гетероциклом, имеющим в качестве гетероатома атом азота или серы, необязательно окисленный в виде N-оксида или S-оксида,

когда R4 представляет собой атом водорода, R3 представляет собой: фенильный или бензильный радикал, необязательно замещенный:

> 1-5 атомами галогена;

> радикалом SRn, S(0)Rn или ORn, где Rn имеет такое же значение, как указано выше;

> аминогруппой, необязательно одно- или двузамещенной циклической или нормальной алифатической группой, имеющей от 1 до 6 атомов углерода;

гетероарил с 5 или 6 членами, где гетероатом представляет собой атом кислорода, серы или азота;

метиленовую группу, замещенную 5- или 6-членным ароматическим или насыщенным гетероциклом, где гетероатом

представляет собой атом кислорода, серы или азота, где атомы азота и серы могут быть окислены в виде Ν-оксида или S-оксида;

когда R4 отличен от Н, R3 и R4, взятые вместе, образуют насыщенный цикл с 5 или 6 членами;

R5 и R6 независимо друг от друга представляют собой:

атом водорода,

нормальную или разветвленную насыщенную углеводородную цепь, имеющую от 1 до 6 атомов углерода, необязательно замещенную радикалом ОН, ORn, SH или SRU, СООН или СОС ц, в каждом из этих радикалов R-и имеет такое же значение, как указано выше, фенильный или бензильный радикал, необязательно замещенный:

> нормальной или разветвленной алкильной цепью, имеющей от 1 до 4 атомов углерода;

> 1-5 атомами галогена, предпочтительно атомами фтора или брома;

> радикалом ОН, OR^, SH или SR^, где R-и имеет такое же определение, как указано выше;

или, взятые вместе, R5 и R6 образуют насыщенный цикл с 5 или 6 членами;

R7 представляет собой

атом водорода;

фенильный или бензильный радикал, необязательно замещенный 1-5 атомами галогена, предпочтительно атомами фтора;

группу формулы CR12(Ri3)C(0)OR 4;

группу 0CR12(R13)0C(0)R14;

группу OCR12(Ri3)OC(0)OR14;

R12 и R13 независимо друг от друга представляют собой атом водорода, алкильную, арильную, арилалкильную, циклоалкильную,

циклогетероалкильную, гетероалкильную, гетероарильную или гетероарилалкильную группу;

взятые вместе, Ri2 и R13 могут образовать циклоалкил с 5 или 6 членами.

R представляет собой алкильную, арильную, арилалкильную, циклоалкильную, циклогетероалкильную, гетероалкильную, гетероарильную или гетероарилалкильную группу;

а также соли присоединения указанного соединения (I) с фармацевтически приемлемыми минеральными или органическими основаниями и каждый из его изомеров, в частности, его оптических изомеров (энантиомеров и диастереоизомеров).

Для "лекарственной" части молекулы, то есть части формулы -NH-C*H(R2)-CH2-S-S-CH2-C*(R3)(R4)-CONH-C*(R5)(R6)-COO-, соединения в соответствии с изобретением потенциально имеют максимум 3 асимметрических атома углерода, отмеченных звездочкой, и которые сокращаются до единственного центра асимметрии, когда (R3XR4) и (R5)(R6) образуют кольца без какой-либо асимметрии. Эти центры являются оптически чистыми с абсолютной конфигурацией, подобной конфигурации природной аминокислоты, то есть S конфигурацией. Возможные центры асимметрии "пролекарственных" частей, то есть для заместителей R-i и R7, не разделяются: эти потенциальные центры симметрии могут, следовательно, в равной степени находиться в R или S конфигурации.

Объектом изобретения также являются соли присоединения соединений формулы (I), полученные с фармацевтически приемлемыми органическими или минеральными основаниями.

В настоящем изобретении "фармацевтически приемлемый" подразумевают как относящийся к тому, что применимо при получении фармацевтической композиции, которая является в целом безопасной, нетоксичной и ни биологически, ни иначе нежелательной, и которая

приемлема как для ветеринарного применения, так и для фармацевтического применения у людей.

Кроме того, "фармацевтически приемлемые соли" соединения подразумевают как относящиеся к солям, которые обладают желаемой фармакологической активностью исходного соединения. Такие соли включают соли, образованные, когда протон кислоты, присутствующий в исходном соединении, либо замещается ионом металла, например, ионом щелочного металла, ионом щелочноземельного металла; либо координируется с органическим или неорганическим основанием. Приемлемые органические основания включают диэтаноламин, этаноламин, Ν-метилглюкамин, триэтаноламин, трометамин и тому подобное, либо природные основные аминокислоты (например, лизин, аргинин, аланин, аспарагин, аспарагиновую кислоту, цистеин, глутамин, глутаминовую кислоту, глицин, гистидин, изолейцин, лейцин, метионин, фенилаланин, пролин, серии, треонин, триптофан, тирозин и валин) или неприродные основные аминокислоты (такие как псевдолизин). Приемлемые неорганические основания, в частности, включают гидроксид алюминия, гидроксид кальция, гидроксид калия, гидроксид лития, карбонат натрия и гидроксид натрия. Предпочтительно протон кислоты вытесняется ионом Na+, предпочтительно путем использования гидроксида натрия.

В объеме настоящего изобретения выражение "углеводородная цепь" относится к нормальным или разветвленным алканам, алкенам или алкинам. В частности, выражение "насыщенная углеводородная цепь" относится либо к нормальным, либо к разветвленным алкильным радикалам, включающим от 1 до 6 атомов углерода (С С6) или от 1 до 4 атомов углерода (С С4). В качестве примеров алкильных радикалов, включающих от 1 до 4 атомов углерода, можно упомянуть радикалы метил, этил, пропил, бутил, изопропил, 1-метилэтил, 1-метилпропил, 2-метилпропил. В качестве примеров алкильных радикалов, включающих от 1 до 6 атомов углерода, можно дополнительно упомянуть радикалы пентил, гексил, 1-метилбутил, 1-метилпентил, 2-метилбутил, 2-метилпентил, 3-метилбутил, 3-метилпентил, 4-метилпентил или 1-этилпропил, либо 1-этилбутил, 2-этилбутил.

Выражение "ненасыщенная углеводородная цепь" относится к нормальным или разветвленным алкенильным радикалам (по меньшей мере одна двойная связь), например, к радикалам винил, аллил или тому подобное, или к алкинильным радикалам (по меньшей мере одна тройная связь), включающим от 2 до 6 атомов углерода или от 2 до 4 атомов углерода.

Под термином "гетероалкил" в контексте настоящего изобретения понимают любую углеводородную цепь, как определено выше, содержащую один или несколько гетероатомов, таких как, например, атомы серы, азота или кислорода.

Под термином "циклоалкил" в контексте настоящего изобретения понимают любое углеводородное кольцо, либо насыщенное, либо ненасыщенное, но не ароматическое, с 3-7 членами, в частности, с 5 или 6 членами, такое как цикпопентил и циклогексил.

Под термином "циклогетероалкил" в контексте настоящего изобретения понимают любое углеводородное кольцо, либо насыщенное, либо ненасыщенное, но не ароматическое, с 5-7 членами, содержащее один или более чем один гетероатом, такой как, например, атом серы, азота или кислорода.

Под выражением "алифатическая, циклическая или линейная группа" подразумевают "углеводородную цепь" или "циклоалкил", как определено выше.

Под термином "арил" в контексте настоящего изобретения понимают одно или более чем одно ароматическое кольцо, имеющее от 5 до 10 атомов углерода, где эти кольца могут быть конденсированы друг с другом.

В частности, арильные группы могут представлять собой моноциклические или бициклические группы, такие как, например, фенильная или нафтильная группа. Предпочтительно арильная группа представляет собой фенил.

Под термином "гетероарил" в контексте настоящего изобретения понимают любую ароматическую группу, содержащую от 5 до 10 циклических атомов, которые представляют собой атомы углерода или один или более чем один гетероатом, такой как, например, атом серы, азота или кислорода. Гетероарил согласно настоящему изобретению может быть образован одним или двумя конденсированными кольцами. Примерами гетероарильных групп являются группы хинолил, изохинолил, имидазолил, индолил, пиридил, триазинил, тиазолил и тиофенил.

Термин "аралкил" в объеме настоящего изобретения обозначает арильные радикалы (как определено выше), связанные с алкильными радикалами (как определено выше), такие как, например, бензил или фенетил.

Термин "гетероаралкил" в объеме настоящего изобретения относится к гетероарильным радикалам (как определено выше), связанным с алкильными радикалами (как определено выше).

Под термином "гетероцикл" подразумевают "циклогетероалкил" или "гетероарил", как определено выше. В качестве примера ароматических или насыщенных гетероциклических колец с 5 или 6 атомами, имеющих в качестве гетероатома атом азота или серы, можно упомянуть без какого-либо ограничения следующие радикалы: тиенил, пирролил, имидазолил, пиразолил, изотиазолил, пиридил, пиразинил, пиримидинил, пиридазинил, пирролидинил, пирролинил, имидазолидинил, пиразолидинил, пиразолинил, пиперидил, пиперазинил, тиадиазолил, где атомы азота и серы необязательно окислены в виде Ν-оксида или S-оксида. В качестве примера ароматических или насыщенных гетероциклических колец с 5 или 6

атомами, имеющих в качестве гетероатома атомы кислорода, можно упомянуть без какого-либо ограничения следующие радикалы: фурил, пиранил, изоксазолил, морфолинил, фуразанил, оксазолил, оксазолидинил, оксазолинил.

Термин "галоген", используемый в данной заявке, относится к атому хлора, брома, йода и фтора.

Радикал R-i предпочтительно представляет собой (ацилокси)алкилкарбаматную группу

-(CO)-O-C(R8)(R9)-OC(O)-R10, где

R8 и R9 независимо друг от друга представляют собой атом водорода или алкильную группу; и

R10 представляет собой алкильную группу, в частности, изопропил.

Радикал R2 предпочтительно представляет собой алкильный радикал, имеющий от 1 до 4 атомов углерода, необязательно замещенный радикалом ORn, SRn или S(0)R4i, где в каждом из этих радикалов R имеет такое же значение, как указано выше. R2 еще более предпочтительно представляет собой алкильный радикал, имеющий от 1 до 4 атомов углерода, замещенный радикалом SRn или S(0)Rn, где радикал Rn имеет такое же значение, как указано выше, в частности, R-и представляет собой нормальную или разветвленную насыщенную углеводородную цепь с 1-4 атомами углерода и более предпочтительно метильную группу.

В соответствии с предпочтительной альтернативой изобретения радикал R4 представляет собой атом водорода. В объеме данной альтернативы радикал R3 предпочтительно представляет собой:

бензильный или фенильный радикал,

метиленовый радикал, замещенный ароматическим или насыщенным гетероциклом с 5 или 6 атомами, имеющим в качестве

гетероатома атом азота или серы, необязательно окисленный в виде N-оксида или S-оксида.

В частности, радикал R4 представляет собой атом водорода, и радикал R3 представляет собой бензильный радикал или метиленовый радикал, замещенный ароматическим или насыщенным гетероциклом с 5 или 6 атомами, имеющим в качестве гетероатома атом азота или серы, необязательно окисленный в виде Ν-оксида или S-оксида, даже более предпочтительно бензильным радикалом.

В соответствии с другой предпочтительной альтернативой изобретения радикалы R4 и R3 образуют вместе с несущим их атомом углерода циклоалкил с 5 или 6 членами, в частности, циклопентан или циклогексан.

Радикал R5 предпочтительно представляет собой атом водорода. Радикал R6 предпочтительно представляет собой атом водорода или алкильный радикал, имеющий от 1 до 6 атомов углерода, даже более предпочтительно от 1 до 4 атомов углерода, необязательно замещенный радикалом ОН, ORn, SH или SRn, СООН или COORn, где в каждом из этих радикалов R^ имеет такое же значение, как указано выше. Радикал R6 еще более предпочтительно представляет собой атом водорода или алкильный радикал, имеющий от 1 до 6 атомов углерода, еще более предпочтительно от 1 до 4 атомов углерода, замещенный радикалом ОН, SH, СООН или COORn, где Rn имеет такое же значение, как указано выше.

Радикал R7 предпочтительно представляет собой:

атом водорода;

- фенильный или бензильный радикал;

алкильный радикал, имеющий от 1 до 4 атомов углерода; группу CR12(Ri3)0(CO)OR14, где Ri2, R13 и RM имеют такое же значение, как указано выше, в частности, R12 представляет собой атом водорода, и R 3 и R14 независимо друг от друга представляют собой С С4 алкильную группу, необязательно замещенную метоксигруппой или С56 циклоалкильной группой.

В частности, радикал R7 представляет собой атом водорода или бензильный радикал.

Изобретение, в частности, относится к приведенным ниже соединениям:

1-(1-{2-[(1-этоксикарбонилоксиэтоксикарбонилметил)-карбамоил]-3-фенилпропилдисульфанилметил}-3-метил-сульфанилпропилкарбамоилокси)-этиловый эфир изомасляной кислоты.

1-{1-[2-(бензилоксикарбонилметилкарбамоил)-3-фенилпропилдисульфанилметил]-3-метилсульфанилпропилкарбамоилокси}-этиловый эфир изомасляной кислоты.

1 -{1 -[2-(карбоксиметил карбамоил)-3-фенилпропилдисульфанилметил]-3-метилсульфанилпропилкарбамоилокси}-этиловый эфир изомасляной кислоты.

1-(1-{2-[(1-этоксикарбонилоксиэтоксикарбонилметил)-карбамоил]-3-фенилпропилдисульфанилметил}-3-метансульфинилпропилкарбамоилокси)-этиловый эфир изомасляной кислоты.

1 -{1 -[2-бензилоксикарбонил метил карбамоил )-3-фенилпропилдисульфанилметил]-3-метансульфинилпропилкарбамоилокси}-этиловый эфир изомасляной кислоты.

1-{1-2-[2-(карбоксиметилкарбамоил)-3-фенилпропилдисульфанилметил]-3-метансульфинилпропилкарбамоилокси}-этиловый эфир изомасляной ислоты.

2-({1-[2-(1-изобутирилоксиэтоксикарбонила ино)-4-метилсульфинилбутилдисульфанилметил]-циклопентанкарбонил}-амино)-янтарная кислота.

2-({1-[2-(1-изобутирилоксиэтоксикарбониламино)-4-метилсульфанилбутилдисульфанилметил]-циклопентанкарбонил}-амино)-янтарная кислота.

Бензиловый эфир 2-({1-[2-(1-изобутирилоксиэтоксикарбониламино)-4-метансульфинилбутилдисульфанилметил]-циклопентанкарбонил}-амино)-янтарной кислоты.

Бензиловый эфир 2-({1-[2-(1-изобутирилоксиэтоксикарбонила ино)-4-метилсульфанилбутилдисульфанилметил]-циклопентанкарбонил}-амино)-янтарной кислоты.

В соответствии с предпочтительной альтернативой изобретения предпочтительны приведенные ниже соединения:

1 -{1 -[2-(карбоксиметил карбамоил )-3-фенилпропилдисульфанилметил]-3-метилсульфанилпропилкарба оилокси}-этиловый эфир изомасляной кислоты.

1-{1-[2-бензилоксикарбонил метил карбамоил )-3-фенилпропилдисульфанилметил]-3-метансульфинилпропилкарбамоилокси}-этиловый эфир изомасляной кислоты.

1- {1-2-[2-(карбоксиметилкарбамоил)-3-фенилпропилдисульфанилметил]-3-метансульфинилпропилкарбамоилокси}-этиловый эфир изомасляной кислоты.

2- ({1-[2-(1-изобутирилоксиэтоксикарбониламино)-4-метансульфинилбутилдисульфанилметил]- иклопентанкарбонил}-амино)-янтарная кислота.

2-({1-[2-(1-изобутирилоксиэтоксикарбониламино)-4-метилсульфанилбутилдисульфанилметил]-циклопентанкарбонил}-амино)-янтарная кислота.

Бензиловый эфир 2-({1 -[2-(1 -изобутирилоксиэтоксикарбониламино)-4-метансульфинилбутилдисульфанилметил]-циклопентанкарбонил}-амино)-янтарной кислоты.

Бензиловый эфир 2-({1-[2-(1-изобутирилоксиэтоксикарбониламино)-4-метилсульфанилбутилдисульфанилметил]-циклопентанкарбонил}-амино)-янтарной кислоты.

Соединения формулы (I) получают:

- путем конденсации β-аминотиола, защищенного на аминной функциональной группе mpem-бутилоксикарбонильной группой (Вое) (II), с меркаптоалкановой кислотой (III) посредством метоксикарбонилсульфенилхлорида.


11 Ш IV

Полученный таким образом дисульфид IV подвергают сочетанию в условиях стандартного пептидного сочетания, предпочтительно под действием TBTU (0-(бензотиазол-1-ил)-Ы,Ы,1\Г,Ы'-тетраметилурония тетрафторбората) в присутствии DIEA (Ν,Ν-диизопропилэтиламина) с аминоэфиром V с получением соединения VI.


IV

V!

Удаление защитной группы Вое соединения VI проводят под действием муравьиной кислоты, и образовавшееся таким путем соединение VII подвергают взаимодействию на активированном эфире карбамата VIII (RrO-(p.N02)Ph или R-i-O-сукцинимид) с получением соединения формулы

(I).


VII 1

Вос-р-аминотиол (II) получают в три стадии из соответствующей имеющейся в продаже Вос-а-аминокислоты абсолютной S конфигурации с сохранением конфигурации в соответствии со способом, хорошо известным специалистам в данной области техники (J. Med. Chem., 35, 1992, 1259).


II

Два различных способа используют для синтеза меркаптоалкановой кислоты (III) в зависимости от природы групп R3 и R4.

Если R4=H, соединение (III) получают из соответствующей малоновой кислоты, которую, в соответствии со способом, хорошо известным специалистам в данной области техники (Вег. 57, (1924), 1 116), преобразуют в акрилат (IX). Присоединение тиоуксусной кислоты к акрилату (IX) приводит к рацемическому производному (X), которое, например, подвергают этерификации метанолом МеОН в присутствии EDCI (1 -(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида) и DMAP (4-диметиламинопиридина) или метанолом в присутствии тионилхлорида. Путем разделения α-химотрипсином возможно выделить тиоацетат с S

конфигурацией (XII) (Bioorg. Med. Chem. Lett., 3, 1993, 2681). Щелочной гидролиз тиоэфира приводит к соединению (III).


IX x xi

OOCH, , lr,^-\ .COOCH3

^ HjCOCS *~ Γ

R3 R3

XII III

Если R4 H, соединение (III) получают из соответствующей карбоновой кислоты (XIII). Из последней, обработанной этилхлорформиатом в присутствии LDA (диизопропиламида лития) в ТГФ (тетрагидрофуране), получают соединение (XIV). Функциональную группу карбоновой кислоты (XIV) преобразуют в смешанный ангидрид и восстанавливают NaBH4 в спирте (XV). Активация спирта до мезилата, а затем замещение тиоацетатом калия приводит к (XVI), из которого путем щелочного гидролиза получают (III).

DA_ D _ *> R R CO S RXR W R R4

xi 11 xi v X ™ 111

Может быть предложен другой путь синтеза для соединения III из кислоты XIII. Последнюю преобразуют в mpem-бутиловый эфир XVII, и путем обработки LDA в ТГФ с последующим образованием карбоната под действием С02 получают производное XVIII. Затем кислотную функциональную группу XVIII восстанавливают до спирта, чтобы получить соединение XIX. Последовательность реакций идентична той, которая предложена в предшествующем пути синтеза.


xvn VJl XIX

Другим объектом изобретения является применение в качестве лекарства соединений, как определено выше, или полученных способом, как определено выше. Объектом изобретения также являются фармацевтические композиции, содержащие в качестве активного ингредиента по меньшей мере одно из соединений общей формулы (I) или одну из его солей или гидратов этих солей в комбинации с одним или более чем одним инертным носителем или другими фармацевтически приемлемыми носителями.

Эти соединения обладают свойствами морфиновых веществ, в частности, анальгезии, и, в частности, в ее периферических компонентах (воспалении, нейрогенной и невропатической компонентах), полезными эффектами на поведение, в частности, в случае депрессии и/или тревоги, не обладая основными недостатками последних (переносимость, привыкание, угнетение дыхания, констипация и т.д.). Таким образом, в противоположность экзогенным агонистам опиоидов, взаимодействующим с дельта-рецепторами, смешанные ингибиторы в соответствии с изобретением обладают антидепрессивными эффектами, не вызывая какого-либо риска запуска эпилептиформных припадков или судорог, и действуют быстро (Baamonde A. et al., 1992, Jutkiewicz Е.М. et al., 2005). Эти соединения действуют на периферии при ноцицепторах (Stein С. et al. (1993) Lancet 342 321-324 (2003) Nature Med., 9, 119-124). Предпочтительно соединения в соответствии с изобретением, вводимые перорально, не проникают в центральную нервную систему в значительных концентрациях; это подтверждено наблюдением, что предварительное введение антагониста, метилналоксония, неспособного пересекать

гематоэнцефалический барьер, блокирует анальгезирующее действие соединений в соответствии с изобретением.

Основное применение соединений в соответствии с изобретением, таким образом, находится в области анальгезии, антидепрессантов и лечения привыканий. Эти композиции можно, в частности, применять в качестве эффективного анальгетика при нервно-воспалительных, нейрогенных, невропатических и ноцицептивных болях, а также в качестве антидепрессивного агента. Кроме того, соединения в соответствии с изобретением формулы (I) после перорального введения показали достаточно интересные эффекты на животных моделях, предсказывающих активности у людей, при:

различных невропатических болях, диабетической невропатии, невропатии, запускаемой предшествующим введением противоракового агента, противовирусного агента (ВИЧ-1), опоясывающим лишаем и т.д.;

гипералгезии и аллодинии: невропатической и нервно-воспалительной аллодинии и гипералгезии, боли, вызванной введением формалина, каррагенина, адъюванта Фрейнда, гипералгезии и аллодинии, вызванных частичным и односторонним сдавливанием седалищного нерва, введением опухолевых клеток в костный мозг и т.д.

Анальгетические лекарства относят к лекарствам, которые облегчают или подавляют боль, не вызывая потерю чувствительности или сознания.

Как вывод, настоящее изобретение нацелено на лечение симптомов, соответствующих не только болям в результате избыточной ноцицептивной стимуляции, но также невропатическим или нейрогенным болям, которые больше не имеют физиологической роли, например, в форме сигнала, но которые стали действительно патологическими или хроническими.

Среди невропатических и нейрогенных хронических болей, потенциально чувствительных к действию соединений формулы (I), в качестве не ограничивающих примеров можно упомянуть боли периферических или центральных невропатий, являющиеся результатом повреждения нерва травматического происхождения (например, плечевого нервного сцепления), метаболического происхождения (например, диабета, алкогольной невропатии), инфекционного происхождения (например, опоясывающего лишая, простого герпеса), токсического происхождения (например, мышьяка, свинца), инвазивного происхождения (раковой боли) или врожденного происхождения, радикулопатического (например, пояснично-крестцового или шейного) происхождения, невралгии (тройничного нерва); боли фантомных конечностей; не воспалительные боли суставов (например, артроз); фибромиалгии; позвоночные боли; послеоперационные боли; боли, обусловленные лекарствами (например, противоопухолевыми агентами, антивирусными агентами).

Соединения в соответствии с изобретением можно также применять при лечении рассеянного склероза, который является воспалительным заболеванием центральной нервной системы.

Весьма интересно, что соединения в соответствии с изобретением обладают длительным периодом действия, в частности, равным или большим, чем 120 минут, более предпочтительно равным или большим, чем 150 минут, еще более предпочтительно равным или большим, чем 180 минут.

Фармацевтические композиции в соответствии с изобретением могут, например, представлять собой композиции, которые можно вводить пероральным, назальным (введение с аэрозолем), подъязычным (введение путем подъязычной диффузии), ректальным, парентеральным, внутривенным и чрескожным путем. В качестве примера композиций, которые можно вводить перорально, можно упомянуть таблетки,

желатиновые капсулы, гранулы, микросферы, порошки и пероральные растворы или суспензии.

Что также весьма интересно, доказано, что соединения в соответствии с изобретением особенно пригодны для перорального введения.

Этот путь введения, таким образом, дает возможность действия композиции в соответствии с изобретением без проникновения в центральную нервную систему. Это представляет особый интерес для подавления всех нежелательных эффектов в результате активации опиоидных рецепторов в головном мозге и/или спинном мозге. То же применимо, когда композиция содержит дополнительные соединения, которые могут обладать нежелательными эффектами на центральную нервную систему, таких как, например, природные каннабиноиды или синтетические производные. Это также дает возможность повысить церебральную биодоступность компонентов этих комбинаций.

В соответствии с предпочтительной альтернативой изобретения соединения формулы (I) применяют в комбинации с каннабиноидами.

В контексте настоящего изобретения выражение "каннабиноиды" относится к Δ9 ТНС, синтетическим агонистам рецептора СВ1 или ингибиторам расщепления анандамина. Каннабиноидами, вводимыми в композициях в соответствии с изобретением, предпочтительно являются Δ9 ТНС.

Объектом изобретения также является комбинация новых соединений в соответствии с изобретением с морфином или с одним из его производных.

Объектом изобретения также более конкретно является комбинация новых соединений в соответствии с изобретением с производными ГАМК, такими как габапентин или прегабалин.

Объектом изобретения также является фармацевтическая композиция, содержащая по меньшей мере одно соединение формулы (I), как определено выше, по меньшей мере:

одно производное каннабиноида, в частности, Δ9 ТНС, или протектор его метаболизма (обзор Piomelli et al., TIPS, 2000) и/или

морфин или одно из его производных и/или

производное ГАМК, такое как габапентин или прегабалин, и фармацевтически пригодный эксципиент, в частности, пригодный эксципиент для введения пероральным, назальным, внутривенным или чрескожным путем.

Изобретение также относится к применению по меньшей мере одного производного каннабиноидов, в частности, Δ9 ТНС, и/или морфина или одного из его производных, и/или производного ГАМК, такого как габапентин или прегабалин, в фармацевтической композиции с целью потенцирования анальгезирующего и/или антидепрессивного эффекта соединений формулы (I), как определено выше.

Изобретение также относится к применению комбинации по меньшей мере одного соединения формулы (I), как определено выше, и по меньшей мере одного производного каннабиноидов, в частности, Δ9 ТНС, и/или морфина или одного из его производных, и/или производного ГАМК, такого как габапентин или прегабалин, для получения лекарства, предназначенного для лечения депрессии и боли, в частности, острой боли, воспалительной боли, нейрогенной боли, невропатической боли, психогенной боли, аллодинии.

Другим объектом изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая:

i) по меньшей мере одно соединение формулы (I), как определено выше

ii) по меньшей мере одно производное каннабиноидов и/или iii) морфин или одно из его производных и/или

iv) по меньшей мере одно производное ГАМК, такое как габапентин или прегабалин,

в виде комбинированного продукта для одновременного, отдельного или распределенного по времени применения.

Эффективная доза соединения по изобретению варьирует в соответствии со многими параметрами, такими как, например, выбранный путь введения, масса, возраст, пол, стадия прогрессирования патологии, подлежащей лечению, и восприимчивость индивидуума к лечению. Соответственно, оптимальную дозировку следует определять в зависимости от параметров, оцениваемых как релевантные специалистом в данной области техники.

Объектом изобретения также является способ лечения любого из заболеваний, упомянутых выше, включающий введение пациенту, которому требуется такое лечение, по меньшей мере одного из соединений в соответствии с изобретением или композиции, содержащей по меньшей мере одно из этих соединений. Соединения в соответствии с изобретением можно применять при данном способе либо отдельно, либо комбинированно, предпочтительно по меньшей мере с одним из соединений, описанных выше.

Далее изобретение проиллюстрировано, но никоим образом не ограничено, приведенными ниже примерами. Перечень полученных соединений приведен в таблице 1. Для всех соединений, описанных в этих примерах 6, 8, 10, 12, 14, 16, 19 и 22,

*> Ri представляет собой

радикал -C(0)-0-CH(CH3)-OC(0)-iPr.

> R6 представляет собой атом водорода.

Пример R2 R3 R4 R5 7

6 -CH2-CH2-S-CH3 бензил Н н -СН(СН3)-ОС(0)-0-С2Н5

8 -CH2-CH2-S-CH3 бензил Н н бензил

10 -CH2-CH2-S-CH3 бензил Н н Н

12 -CH2-CH2-SO-CH3 бензил Н н -СН(СН3)-ОС(0)-0-С2Н5

14 -CH2-CH2-SO-CH3 бензил Н н бензил

16 -CH2-CH2-SO-CH3 бензил Н н Н

19 -CH2-CH2-S-CH3 -(СН2)4- -сн2- Н

соон

22 -CH2-CH2-SO-CH3 -(СН2)4- -сн2- Н

соон

Таблица 1 : радикалы примеров

Пример 1 : Синтез трет-бутилового эфира (1-меркаптометил-З- метилсульфанилпропил)-карбаминовой кислоты

Это соединение получают, следуя методике, описанной в J. Med. Chem., 35, 1992, 2473. Белое твердое вещество; точка плавления 37°С; Rf (циклогексан(СНех)/этилацетат (AcOEt)) 1/1 =0,73).

ВЭЖХ (Kromasil С18, CH3CN (0,1 % ТФУ) 50%/Н2О (0,1 % ТФУ) 50%) Rt = 15,7 мин.

ЯМР (CDCI3) δ (млн 1) 1.30 (1 Н, t), 1.52 (9Н, s), 1.80-1.90 (2Н, т), 2.10 (ЗН, s), 2.55 (2Н, t), 2.80 (2Н, t), 3.88 (1 Н, т), 4.80 (1 Н, d).

Пример 2: Синтез (23)-2-бензил-3-меркаптопропановой кислоты

Стадия 1 : Метиловый эфир З-ацетилсульфанил-2-бензилпропановой кислоты, полученный путем этерификации соответствующей кислоты, обрабатывают α-химотрипсином в соответствии с методикой, описанной в Bioorg. Med. Chem. Lett., 3, (1993), 2681. Выход 71%; энантиомерный избыток эи 88% aD20°c-42,7°.

Стадия 2: (28)-2-Бензил-3-меркаптопропановая кислота

Соединение стадии 1 растворяют в дегазированном метаноле при 0°С. В инертной атмосфере добавляют 3 эквивалента NaOH (соды) 1 н., и смесь перемешивают в течение 30 мин при комнатной температуре. Смесь подкисляют HCI 6 н., и МеОН выпаривают при пониженном давлении. Водную фазу экстрагируют ЕЮАс. Органическую фазу промывают насыщенным раствором NaCI, высушивают на Na2S04 и выпаривают до сухости. Получают желтое масло. Количественный выход.

ВЭЖХ (Kromasil С18 (CH3CN (0,1 % ТФУ) 60%/Н2О (0,1 % ТФУ) 40%) Rt = 4,96 мин.

ЯМР (CDCI3) δ (млн 1) 1.5 (1 Н, t), 2.7-3.2 (5Н, т), 7.25 (5Н, т), 12 (1 Н, s).

Пример 3: Синтез 2-(2-трет-бутоксикарбониламино-4-метилсульфанилбутилдисульфанилметил)-3-фенилпропановой кислоты Смесь 23 мл МеОН и 23 мл ТГФ охлаждают при 0°С в атмосфере азота и добавляют хлоркарбонилсульфенилхлорид (1 ,3 мл, 1 ,1 эквивалента). Смесь перемешивают в течение 15 мин при 0°С с получением метоксикарбонилсульфенилхлорида. Соединение Примера 1 (1 ,06 эквивалента) в 16 мл ТГФ добавляют все сразу. Смесь доводят до комнатной температуры и перемешивают в течение 30 мин. Этот раствор добавляют по каплям к раствору соединения Примера 2 (1 эквивалент) в 100 мл дегазированного CHCI3 в присутствии Et3N (1 эквивалент). Смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре, а затем растворитель выпаривают до сухости. Остаток растворяют в CH2CI2, и органическую фазу промывают 10% раствором лимонной кислоты, насыщенным раствором NaCI, высушивают на Na2S04. После фильтрования и выпаривания до сухости получают бледно-желтое масло, которое используют как токовое в последующих реакциях. Выход 98%.

ВЭЖХ (Kromasil С18 (CH3CN (0, 1 % ТФУ) 70%/H2O (0,1 % ТФУ) 30%) Rt=7,71 мин.

ЯМР (ДМСО d6) δ (млн 1): 1.35 (9Н, s), 1.7 (2Н, т), 2.0 (ЗН, s), 2.4 (2Н, t), 2.7- 3.0 (5Н, т), 3.70 (1 Н, s), 6.80 (1 Н, d), 7.20 (5Н, т).

Пример 4: Синтез 1 -этоксикарбонилоксиэтиламиноуксусной кислоты эфира трифторацетата

Boc-Gly (4,88 г) и Et3N (триэтиламин) (4,65 мл, 1 ,2 эквивалента) растворяют в 25 мл этилацетата. Добавляют этил-1-хлорэтилкарбамат (полученный в соответствии с Barcelo et al., Synthesis, 1986, 627) (4,68 г, 1 ,1 эквивалента) и Nal (1 ,64 г, 0,4 эквивалента), и смесь кипятят с обратным холодильником в течение 16 ч. Осадок фильтруют, и к фильтрату добавляют 15 мл этилацетата и 20 мл воды. Органическую фазу отделяют, и водную фазу экстрагируют три раза этилацетатом. Объединенные органические фазы промывают 10% раствором лимонной кислоты, 10% раствором NaHC03, насыщенным раствором NaCI, высушивают на Na2S04, фильтруют и выпаривают до сухости. Получают 7,8 г оранжевого масла. Выход 95%. Rf (циклогексан/AcOEt: 8/2) 0,40.

Маслянистый продукт стадии 1 помещают в раствор в 24 мл CH2CI2 и 21 ,3 мл ТФУ. После перемешивания в течение 1 ч при комнатной температуре реакционную смесь выпаривают до сухости. Полученное желтое масло растворяют в смеси эфир/гексан. Образовавшийся осадок промывают три раза смесью эфир/гексан, а затем высушивают. Белое твердое вещество 7,2 г (Выход 85%).

ЯМР (ДМСО d6) δ (млн 1): 1.2 (ЗН, q), 1.5 (ЗН, d), 3.90 (2Н, dd), 4.10 (2Н, q), 6.75 (1 Н, q), 8.37 (ЗН, s).

Пример 5: 1 -этоксикарбонилоксиэтиловый эфир [2-(2-трет-бутоксикарбониламино-4-метилсульфанилбутилдисульфанилметил)-3-фенилпропиониламино]-уксусной кислоты

Соединение Примера 3 (2 г), соединение Примера 4 (1 ,47 г, 1 ,1 эквивалент), TBTU (1 ,62 г, 2 эквивалента) и DIEA (2,57 мл) растворяют в 20 мл ДМФ. Смесь перемешивают в течение 15 мин при комнатной температуре, а затем ДМФ выпаривают при пониженном давлении. Остаток растворяют в этилацетате, и органическую фазу промывают 10% раствором лимонной кислоты, 10% раствором NaHC03 и насыщенным раствором NaCI. Раствор высушивают на Na2S0 , фильтруют и выпаривают до сухости. Сырой продукт очищают на колонке силикагеля (циклогексан/AcOEt: 6/4). Белое твердое вещество 2,06 г (Выход 75%).

ВЭЖХ Kromasil С18 (CH3CN (0,1 % ТФУ) 70%/Н2О (0,1% ТФУ) 30%) Rt=11 ,2 мин. Масса (М+Н)+=631.

Пример 6: 1-(1-{2-[(1-этоксикарбонилокси-этоксикарбонилметил)-карбамоил]-3-фенилпропилдисульфанилметил}-3-метилсульфанилпропилкарбамоилокси)-этиловый эфир изомасляной кислоты

Соединение примера 5 (1 ,7 г) растворяют в 17 мл муравьиной кислоты, и смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре. Муравьиную кислоту выпаривают в вакууме, остаток растворяют три раза циклогексаном и выпаривают до сухости. Желтое масло 1 ,5 г (Выход 97%).

Полученный формиат растворяют в 20 мл CH2CI2 и 2,4 мл DIEA (5 эквивалентов). Добавляют 1 ,15 г (1 ,5 эквивалента) 1-(2,5-диоксоциклопентилоксикарбонилокси)-этилового эфира изомасляной кислоты, и смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре. Растворитель выпаривают, и остаток растворяют этилацетатом. Органическую фазу промывают водой, 10% раствором лимонной кислоты, насыщенным раствором NaCI, высушивают на Na2S04, а затем фильтруют и выпаривают до сухости.

Очистка полупрепаративной ВЭЖХ на колонке Kromasil С18 (CH3CN (0,1% ТФУ)/Н20 (0,1 % ТФУ): 70/30). Белое твердое вещество 0,96 г (Выход 50%).

ВЭЖХ (Kromasil С18 (CH3CN (0,1% ТФУ)/Н20 (0,1% ТФУ): 70/30) Rt=10,98 мин. Масса (М+Н)+=577.

ЯМР (CDCI3) δ (млн 1): 1.10 (6Н, d), 1.25 (ЗН, t), 1.5 (2хЗН, d), 1.65-1.85 (2Н, т) 2.47 (4Н, т), 2.5 (1 Н, т), 2.5-3.00 (5Н, т), 3.90-4.00 (ЗН, т), 4.15 (2Н, q), 4.9 (1 Н, d), 6.4 (1 Н, t), 6.75 (2х1 Н, q), 7.20 (ЮН, т).

Пример 7: Бензиловый эфир [2-(2-трет-бутоксикарбониламино-4-метилсульфанилбутилдисульфанилметил)-3-фенилпропиониламино]-уксусной кислоты

Соединение примера 3 (4 г) и бензиловый эфир глицина в виде соли APTS (4,55 г, 1 ,5 эквивалента) помещают в раствор в ДМФ (20 мл). Добавляют TBTU (3,43 г, 1 ,2 эквивалента) и DIEA (5 мл). Смесь перемешивают в течение 15 мин при комнатной температуре. Затем реакционную смесь обрабатывают по методике, описанной в Примере 5. Получают белое твердое вещество, 5,3 г (Выход 99%). Масса (М+Н) =593.

ВЭЖХ (Kromasil С18, CH3CN (0,1 % ТФУ)/Н20 (0,1 % ТФУ): 70/30) Rt=12,9 мин.

ЯМР (CDCI3) δ (млн 1) 1.4 (9Н, s), 1.7-1.9 (2Н, т), 2.10 (ЗН, s), 2.5 (2Н, т), 2.8- 3.10 (7Н, т), 3.80-4.10 (ЗН, т), 4.70 (1 Н, d), 5.15 (2Н, s), 6.60 (1 Н, t),

7.20-7.40 (ЮН, т).

Пример 8: 1-{1-[2-(бензилоксикарбонилметилкарбамоил)-3-фенилпропилдисульфанилметил]-3-метилсульфанилпропилкарбамоилокси}-этиловый эфир изомасляной кислоты

Соединение примера 7 (724 мг) растворяют в 5 мл ТФУ и 5 мл CH2CI2. Смесь перемешивают в течение 3 ч при 0°С. Реакционную смесь

выпаривают при пониженном давлении, и остаток растворяют водой и лиофилизируют. Белое твердое вещество 720 мг (Выход 97%). Масса (М+Н)+ 607.

ВЭЖХ (Kromasil С18, (CH3CN (0,1 % ТФУ)/Н20 (0,1 %ТФУ): 50/50) Rt=6,2 мин.

Полученный трифторацетат (720 мг) растворяют в 10 мл CH2CI2.DIEA (1 мл, 5 эквивалентов), а затем добавляют 500 мг (1 ,5 эквивалента) 1-(2,5-диоксоциклопентилоксикарбонилокси)-этилового эфира изомасляной кислоты, и смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре. Растворитель выпаривают, и остаток растворяют этилацетатом. Органическую фазу промывают водой, насыщенным раствором NaCI и высушивают на Na2S04. После фильтрования и выпаривания до сухости получают маслянистое соединение, которое очищают полупрепаративной ВЭЖХ на колонке Kromasil С18, CH3CN (0,1 % ТФУ/Н20 (0,1 % ТФУ) 70/30. Белое твердое вещество 390 мг (Выход 48,5%). Масса (М+Н)+=651.

ВЭЖХ Kromasil С18 (CH3CN (0,1 % ТФУ) 70%/Н2О (0,1 % ТФУ) 30%) Rt=12,5 мин.

ЯМР (CDCI3) δ (млн 1): 1.1 (6Н, d), 1.5 (ЗН, d), 1.7-1.9 (2Н, т), 2 (ЗН, s), 2.5 (ЗН, т), 2.7-3.0 (7Н, т), 3.7-4.2 (ЗН, т), 4.95 (1 Н, d), 5.15 (2Н, s), 6.4 (1 Н, t), 6.7 (1 Н, q), 7.2 (ЮН, т).

Пример 9: трет-Бутиловый эфир [2-(2-трет-бутоксикарбониламино-4- метилсульфанилбутилдисульфанилметил)-3-фенилпропиониламино]-уксусной кислоты

Соединение примера 3 (1 г) и mpem-бутиловый эфир глицина (563 мг, 1 ,5 эквивалента) помещают в раствор 5 мл ДМФ в присутствии TBTU (857 мг, 1 ,2 эквивалента) и DIEA (1 ,24 мл). Смесь перемешивают в течение 15 мин при комнатной температуре, а затем реакционную смесь

обрабатывают, как описано в Примере 5. Получают белое твердое вещество 918 мг (Выход 74%).

ВЭЖХ Kromasil С18 (CH3CN (0,1 % ТФУ) 70%/Н2О (0,1 % ТФУ) 30%) Rt=13,3 мин. Масса (М+Н)+=559

Пример 10: 1-{1-[2-(карбоксиметилкарбамоил)-3-фенилпропил-дисульфанилметил]-3-метилсульфанилпропилкарбамоилокси}-этиловый эфир изомасляной кислоты

Соединение примера 9 (914 мг) растворяют в 5 мл CH2CI2 и 5 мл ТФУ, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч. После выпаривания до сухости остаток растворяют водой и лиофилизируют. Белое твердое вещество 844 мг (количественный выход). Трифторацетат (844 мг) растворяют в 10 мл CH2CI2. Добавляют 1 ,34 мл (5 эквивалентов) DIEA и 670 мг (1 ,5 эквивалента) 1-(2,5-диоксоциклопентилоксикарбонилокси)-этилового эфира изомасляной кислоты, и смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре. Затем реакционную смесь обрабатывают, как описано в Примере 6. Сырой продукт очищают полупрепаративной ВЭЖХ на колонке Kromasil С18 (CH3CN (0,1% ТФУ/Н20 (0,1% ТФУ): 55/45. Белое твердое вещество 400 мг (Выход 44%).

ВЭЖХ Kromasil С18 (CH3CN (0,1 % ТФУ) 60%/Н2О (0,1% ТФУ) 40%) Rt= 7,80 мин. Масса (М+Н)+=561.

ЯМР (CDCI3) δ (млн 1): 1.0 (6Н, dd), 1.4 (ЗН, dd), 1.6-1.75 (2Н, т), 2.0 (ЗН, s), 2.5 (ЗН, т), 2.8-3.1 (7Н, т), 3.8-4.1 (ЗН, т), 5.0 (1 Н, d), 6.7 (1 Н, q), 7.2 (5Н, т).

Натриевую соль соединения 10 получают путем растворения кислоты в ацетонитриле, а затем добавления 1 эквивалента NaHC03 в растворе в воде. Полученный таким образом раствор лиофилизируют. Белое твердое вещество (Выход 96%).

Пример 11 : 1 -этоксикарбонилоксиэтиловый эфир [2-(2-трет-бутоксикарбониламино-4-метансульфинилбутилдисульфанилметил)-3-фенилпропиониламино]-уксусной кислоты

Соединение примера 5 (2 г) растворяют в 40 мл этанола. Добавляют 32 мл 0,2 М раствора Nal0 (2 эквивалента) при 0°С, и смесь перемешивают в течение 3 ч при 0°С. Осадок фильтруют, и фильтрат выпаривают до сухости. Остаток растворяют в этилацетате, и органическую фазу промывают водой, насыщенным раствором NaCI, высушивают на Na2S04. После фильтрования и выпаривания сырой продукт очищают хроматографией.

Белое твердое вещество 1 ,5 г (Выход 70%).

ВЭЖХ (Kromasil С18 (CH3CN (0,1 % ТФУ) 60%/Н2О (0,1 % ТФУ) 40%) Rt=8,3 мин. Масса (М+Н)+= 635.

Пример 12: 1-(1-{2-[(1 -этоксикарбонилоксиэтоксикарбонилметил)-карбамоил]-3-фенилпропилдисульфанилметил}-3-метансульфинилпропил-карбамоилокси)-этиловый эфир изомасляной кислоты

Соединение примера 1 1 (1 ,5 г) растворяют в 20 мл муравьиной кислоты, и смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре. Муравьиную кислоту выпаривают в вакууме, и остаток растворяют водой и лиофилизируют.

Белое твердое вещество 1 ,38 г.

Полученный формиат (1 ,38 г) растворяют в CH2CI2 и добавляют карбамат (1 ,5 эквивалента) (1-(2,5-диоксоциклопентилоксикарбонилокси)-этиловый эфир изомасляной кислоты) и DIEA (3 эквивалента). Смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре, а затем растворитель выпаривают при пониженном давлении. Остаток растворяют этилацетатом. Органическую фазу промывают 10% раствором лимонной кислоты, насыщенным раствором NaCI, высушивают на Na2S04, фильтруют и выпаривают до сухости. Сырой продукт очищают ВЭЖХ на колонке Kromasil (полупрепаративная, CH3CN (0,1% ТФУ)/Н20 (0,1 % ТФУ): 50/50.

Выход 54%.

ВЭЖХ Kromasil С18 (CH3CN (0,1 % ТФУ) 50%/Н2О (0,1 % ТФУ) 50%) Rt=14,55 мин. Масса (М+Н)+= 693.

ЯМР (ДМСО d6) δ (млн"1): 1.0 (6Н, dd), 1.15 (ЗН, t), 1.4 (2хЗН, d), 1.65-1.90 (2Н, т), 2.4-3.0 (13Н, т), 3.75 (1 Н), 3.9 (2Н, d), 4.0 (2Н, q), 5.1 (2Н, s), 6.65 (2Н, т), 7.1-7.3 (5Н, т), 7.5 (1 Н, d), 8.5 (1 Н, t).

Пример 13: Бензиловый эфир [2-(2-трет-бутоксикарбониламино-4-метансульфинилбутилдисульфанилметил)-3-фенилпропиониламино]-уксусной кислоты

Соединение примера 7 (5,3 г) обрабатывают в условиях примера 11 с получением 5,19 г ожидаемого соединения. Выход 95%.

ВЭЖХ Kromasil С18 (CH3CN (0,1 % ТФУ) 60%/Н2О (0,1% ТФУ) 40%) Rt=7,3 мин.

Пример 14ι 1-{1-[2-бензилоксикарбонилметилкарбамоил)-3-фенилпропилдисульфанилметил]-3-метансульфинилпропилкарбамоилокси}-этиловый эфир изомасляной кислоты

Соединение примера 13 (3,1 г) обрабатывают 50 мл муравьиной кислоты, и реакционную смесь обрабатывают, как описано в Примере 12. Белое твердое вещество 2,85 г (Выход 99%).

Полученный формиат (1 ,41 г) растворяют в смеси 20 мл диоксана и 20 мл воды. Добавляют 1 ,1 г (8 эквивалентов) NaHC03 и 1 ,13 г (1 ,5 эквивалента) 1-(4-нитрофеноксикарбонилокси)-этилового эфира изомасляной кислоты, и смесь перемешивают в течение 72 ч при комнатной температуре. Диоксан выпаривают до сухости, и водную фазу экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают насыщенным раствором

NaCI, высушивают на Na2S04. После фильтрования и выпаривания до сухости продукт очищают полупрепаративной ВЭЖХ на колонке Kromasil С18 (CH3CN (0,1 % ТФУ)/Н20 (0,1 % ТФУ): 55/45. Белое твердое вещество 1 ,0 г (Выход 59%).

ВЭЖХ Kromasil С18 (CH3CN (0,1 % ТФУ) 60%/Н2О (0,1% ТФУ) 40%)

Rt=8,21 мин. Масса (М+Н)+=667.

ЯМР (ДМСО d6) δ (млн"1): 1.0 (6Н, dd), 1.4 (ЗН, d), 1.65-1.90 (2Н, т), 2.4-3.0 (13Н, т), 3.75 (1 Н), 3.9 (2Н, d), 5.1 (2Н, s), 6.65 (1 Н, т), 7.1-7.3 (ЮН, т), 7.5 (1 Н, d), 8.5 (1 Н, t).

Пример 15: трет-Бутиловый эфир [2-(2-mpem-бутоксикарбониламино-4-метансульфинилметил)-3-фенилпропиониламино]-уксусной кислоты

Соединение примера 9 (745 мг) обрабатывают в условиях примера 11 с получением 781 мг (количественный выход) ожидаемого продукта.

ВЭЖХ Kromasil С18 (CH3CN (0,1% ТФУ) 70%/Н2О (0,1% ТФУ) 30%)

Rt= 4,65 мин.

ЯМР (ДМСО d6) δ (млн 1): 1.4 (18Н, s), 1.7-1.9 (2Н, m), 2.5-3 (12Н, m), 3.7 (2Н, d + 1Н, m), 6.9 (1 H, d), 7.2 (5H, m), 8.4 (1 H, t).

Пример 16: 1 -{1 -2[2-(карбоксиметил карбамоил )-3-фенил пропил-дисульфанилметил]-3-метансульфинилпропилкарбамоилокси}-этиловый эфир изомасляной кислоты

Соединение примера 15 (760 мг) обрабатывают 5 мл ТФУ в 5 мл СН2С12, а затем реакционную смесь перемешивают в течение 3 ч при комнатной температуре. Затем растворители выпаривают при пониженном давлении, остаток растворяют в воде и лиофилизируют. Получают белый продукт (686 мг; Выход 99%).

Полученное соединение (686 мг) растворяют в 10 мл воды и 10 мл диоксана. Добавляют 572 мг (8 эквивалентов) NaHC03 и 587 мг (1 ,5

эквивалента) (1-(4-нитрофеноксикарбонилокси)-этилового эфира изомасляной кислоты. Смесь перемешивают в течение 12 ч при комнатной температуре. Диоксан выпаривают при пониженном давлении, и водную фазу экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают насыщенным раствором NaCI, высушивают на Na2S04, фильтруют и выпаривают до сухости. Сырой продукт очищают полупрепаративной ВЭЖХ на колонке Kromasil С18 (CH3CN (0,1 % ТФУ)/Н20 (0,1% ТФУ): 35/65. Белое твердое вещество 212 мг. Выход 28,1%.

ВЭЖХ Kromasil С18 (CH3CN (0,1 % ТФУ) 40%/Н2О (0,1 % ТФУ) 60%) Rt =11 ,98 мин. Масса (М+Н)+= 577.

ЯМР (ДМСО d6) δ (млн"1): 1.0 (2хЗН, d), 1.4 (ЗН, d), 1.7-1.9 (2Н, т), 2.5-3.0 (13Н, т), 3.7 (2Н, d =1 Н, т), 6.65 (1 Н, т), 7.2 (5Н, т), 7.5 (1 Н, d), 8.4 (1 Н, t).

Пример 17: трет-бутиловый эфир циклопентан-1 ,1-дикарбоновой кислоты

Tpem-бутиловый эфир циклопентандикарбоновой кислоты (полученный в соответствии с J. Med. Chem., 1994, 37, 2461-2476) (10 г) растворяют в 50 мл ТГФ в атмосфере азота. Добавляют раствор LDA (1 ,3 эквивалента), приготовленный из 10,71 мл диизопропиламина и 47,75 мл бутиллития 1 ,6 М в гексане в атмосфере азота, при -30°С. После перемешивания в течение 30 мин при -30°С С02 барботируют в течение 15 мин при той же температуре. Смесь снова доводят до -5°С и добавляют 100 мл воды. ТГФ выпаривают, водную фазу экстрагируют дважды этилацетатом, а затем подкисляют до рН 1. После экстракции три раза этилацетатом органическую фазу промывают насыщенным раствором NaCI, высушивают на Na2S0 , фильтруют и выпаривают до сухости. Белое твердое вещество 10 г (Выход 80%).

Пример 18: mpe/n-бутиловый эфир 1-меркаптометилцикло-пентанкарбоновой кислоты

Предшествующее соединение (7,9 г) растворяют в 70 мл ТГФ. При -10°С добавляют 5,13 мл (1 эквивалент) триэтиламина и 4,73 мл (1 эквивалент) изобутилхлорформиата. После 2 мин взаимодействия образовавшийся осадок фильтруют, а затем добавляют по каплям 4,88 г NaBH4 (3,5 эквивалента) и 22 мл МеОН. Раствор снова доводят до 0°С и подкисляют HCI 1 н.. После экстракции CH2CI2> промывания и высушивания органическую фазу выпаривают до сухости. Бледно-желтое масло (6,52 г, выход 88%).

Полученный спирт (5 г) растворяют в эфире (65 мл). Добавляют 2,12 мл (1 ,1 эквивалент) мезилхлорида и 4 мл триэтиламина. После перемешивания в течение 3 ч при комнатной температуре насыщенную эфиром фазу промывают, высушивают и выпаривают до сухости. Бледно-желтое масло (6,4 г, выход 92%).

Мезилат (6,4 г) растворяют в диметилформамиде (100 мл). Добавляют 3,18 г К2С03 и 3,61 мл тиоуксусной кислоты, и смесь перемешивают в течение 5 ч при 100°С. ДМФ выпаривают до сухости, и остаток растворяют этилацетатом и HCI 1 н. Органическую фазу промывают, высушивают и выпаривают до сухости.

Полученное коричневое масло обрабатывают смесью 50/50 СН2С12/ТФУ при комнатной температуре. Смесь выпаривают до сухости, растворяют три раза циклогексаном и выпаривают до сухости. Твердый продукт ржавого цвета (количественный выход). Образовавшуюся ацетилтиокислоту растворяют в 50 мл МеОН и добавляют 50 мл NaOH 1 н.. Смесь перемешивают в течение 3 ч при комнатной температуре, а затем подкисляют HCI 1 н. Метанол выпаривают, остаток растворяют ЕЮАс, и органическую фазу промывают и высушивают: бледно-желтое масло, количественный выход.

ЯМР (CDCI3) δ (млн 1): 1.6-1.8 (6Н, m+SH), 2.15 (2Н, m), 3.2 (2Н, s).

Пример 19: 1 -(2-А77рет-бутоксикарбониламино-4-метилсул ьфанил-бутилдисульфанилметил)-циклопентанкарбоновая кислота

Следуя методике примера 3 и заменяя соединение примера 1 соединением примера 18, получают ожидаемый продукт. Белое твердое вещество, 3,8 г (выход 75%). ВЭЖХ (Kromasil С18, CH3CN(0,1 % ТФУ)/Н20 (0,1% ТФУ): 50/50) Rt 31 ,6 мин. Масса (М+Н)+=410.

Пример 20: ди-тре п-бутиловый эфир 2-{[\-{2-трет-бутоксикарбониламино-4-метилсульфанилбутилдисульфанил метил )-циклопентанкарбонил]-амино}-янтарной кислоты

Следуя методике примера 5 и заменяя соединение примера 4 трет-бутиловый эфиром аспарагиновой кислоты, получают ожидаемое соединение при выходе 80%. Белое твердое вещество. Масса (М+Н)+= 637,3.

ВЭЖХ (Kromasil С18, СН3СЫ(0,1 %ТФУ)/Н2О(0,1 % ТФУ) :80/20) Rt 31 ,6 мин.

ЯМР (CDCI3) δ (млн 1): 1.4 (27 Н), 1.7-1.9 (8Н т), 2.1 (5Н т), 2.5 (2Н т) 2.8-3.1 (6Н т), 4.1 (1 Н т), 4.6 (1 Н т), 4.7 (1 Н d), 6.6 (1 Н d).

Пример 21 : ди-трет-бутиловый эфир 2-{[l-(2-mpem-бутоксикарбониламино-4-метансульфинилбутилдисульфанилметил)-циклопентанкарбонил]-амино}-янтарной кислоты

Следуя методике примера 11 , соединение примера 20 приводят к ожидаемому продукту при выходе 81%.

Масса (М+Н)+= 653,3.

Пример 22: 2-({1-[2-(1-изобутирилоксиэтоксикарбониламино)-4-метансульфинилбутилдисульфанилметил]-циклопентанкарбонил}-амино)-янтарная кислота

Следуя методике примера 12, соединение примера 21 приводят к ожидаемому конечному продукту при выходе 63%.

ВЭЖХ (Kromasil С18 CH3CN(0,1 % ТФУ)/Н20 (0,1% ТФУ): 70/30) Rt 4,3 мин. Масса (М+Н)+= 599,2

ЯМР (ДМСО d6) δ (млн 1): 1.0 (6Н d), 1.4 (ЗН d), 1.7-1.9 (8Н т), 2.1 (2Н т), 2.5-3.0 (12Н т), 3.7 (1 Н т), 4.6 (1 Н т), 6.65 (1 Н т), 7.5 (1 Н d), 8.4 (1 Н d).

Пример 23: Фармакологические результаты

Молекулы по настоящему изобретению были исследованы на их анальгезирующее действие на наиболее предсказательных животных моделях в отношении ответа у людей. Предпочтительны тесты, которые предназначены для нервно-воспалительной (NI) и невропатической (NP) боли у крыс и мышей.

Было доказано, что молекулы по настоящему изобретению активны в приведенных ниже тестах.

У крыс: i) невропатическая боль, вызванная путем внутриподошвенной инъекции каррагенина или адъюванта Фрейнда (Desmeules A. et al. Pain (1993), 53, 277-285); ii) диабетическая невропатия (NP), индуцированная предварительным введением стрептозоцина (Condore-Civiale et al., Br. J. Pharmacol. (2001), 67, 1301-1308); iii) невропатия, запускаемая предварительным введением противоракового агента винкристина (Authier et al., Neurotoxicology (2003), 4, 797-805).

У мышей: i) невропатическая и нервно-воспалительная аллодиния и гиперальгезия, индуцированная предварительным введением опухолевых клеток в костный мозг бедренной кости, модель остеосаркомы (Menendez L. et al., Brain Res. (2003), 969, 102-109); ii) боль, вызванная введением формалина в лапу, и исследование анальгезирующего ответа в первой фазе (NT); iii) гиперальгезия и аллодиния, полученная в результате

частичного и одностороннего сдавливания седалищного нерва (модель Зельтцера) (Bennett G.J. and Xie Y.K., Pain (1998) 33, 87-107).

Методы, используемые в этих тестах, подробно описаны и классифицированы журналами, такими как: M.J. Millan. The induction of pain: an integrative review, в Progress in Neurobiology (1999), 52, 1-164.

В качестве примеров несколько исследований можно найти ниже.

А/ Формалиновый тест (фаза I)

Молекулы были исследованы в двух фазах после 90 и 150 с целью наблюдения их периода действия,

Описание теста

Животных (самцов мышей OF1 ) привозили из питомника Charles River (Франция), и в начале эксперимента они весили 25-35 г. Массу каждой мыши учитывают для введения препарата.

Тест основан на методике, описанной S. HUNSKAAR et al., Formalin test in mice, a useful technique for evaluating mild analgesics, J. Neurosci. Methods (1995), 14, 69-75.

Мышей (n=8) индивидуально помещают в прозрачные клетки (50x25 см) и дают привыкнуть к окружающей среде в течение 20 минут. После этого периода 20 мкл формалина (5% НСНО) в растворе в физиологическом растворе (Н20, 0,9% NaCI) инъецируют подкожно на подошвенной стороне правой лапы животного. Используют шприц 26, соединенный с микрошприцом. Затем каждую мышь сразу помещают обратно в контрольную клетку, и болевые (ноцицептивные) ответы измеряют в течение 5 минут (ранняя фаза). Считают только облизывания лапы.

Анальгезирующую активность тестируют после принудительного кормления животных в различные интервалы времени (обычно 20 мин, 90 мин и 150 мин) после инъекции формалина:

Одним носителем (этанол, 0,5% метилцеллюлоза в воде) Носитель и соединение по изобретению (50 мг/кг).

Анальгезирующее действие препарата измеряют по снижению числа облизываний поврежденной лапы по сравнению с числом облизываний животного, которое получило только носитель.

Результаты представлены на фиг. 1 для шести соединений Примеров 6, 8, 10, 12, 14 и 16.

Шесть соединений показали сильные анальгезирующие эффекты (40-60%), характеризующиеся весьма значительным снижением числа облизываний по сравнению с носителем (контролем), и эффекты примерно постоянны в течение периода тестирования. Анальгезирующее действие блокируется предварительным введением антагониста, метилналоксония, который в используемой дозе (2 мг/кг) неспособен пересекать гематоэнцефалический барьер (Milne R.J. et al., Neurosci. Lett. (1990), 1 14, 25-32), что демонстрирует, что активность этих молекул проявляется периферически (ноцицепторы), где они повышают высвобождение энкефалинов в сайте повреждения.

Б/ Сравнительное исследование анальгезирующего эффекта соединения примера 6 и референсной молекулы (Соединения 15 международной заявки WO2007/048787)

Настоящее изобретение характеризуется разработкой молекул, обладающих анальгезирующими свойствами, по меньшей мере равными свойствам соединений, описанных в международной заявке WO2007/048787, но значительно более длительным периодом действия. Это действительно показано в формалиновом тесте (методика которого описана выше), поскольку референсная молекула:

Соединение 15 = NH2-CH(CH2CH2SCH3)-CH2-S-S-CH2-CH(CH2C6H5)- CONH-CH2-CONH-CO-CH(CH3)-0-CO-OCH2CH3 (W02007/048787) более не обладает никакой активностью через 120 минут, тогда как соединение примера 6, напротив, достигает максимума его анальгезирующей активности между 90 и 150 минутами (фиг. 2).

В/ Антиаллодинический и гипоальгезирующий эффекты соединения примера 10 после перорального введения мышам

Этот тест был подробно описан А.В. Malmberg and A.I. Basbaum, Partial sciatic nerve injury in the mouse as a model of neuropathic pain: behavioural and neuroanatomical correlates. Pain, (1998) 76, 215-222.

Тест проводили на самцах мышей OF1 (Charles River) 18-20 г, n=39, путем частичной лигатуры седалищного нерва на ипсилатеральной стороне. Животных тестируют в период (3-26 сутки) после операции.

Измерение гиперальгезии проводили в соответствии со способом, описанным К. Hargreaves et al., A new sensitive method for measuring thermal nociception in cutaneous hyperalgesia, Pain, (1988), 32, 77-88, используя в качестве нагревательного источника аппарат "Plantar test" (Bioseb, France). Интенсивность ноцицептивного стимула калибруют до 8-10 с при пороге автоматической остановки (время выключения) при 20 с. Среднее число отдергиваний лапы, индуцированных нагреванием, измеряли на ипсилатеральных лапах (на стороне поврежденного нерва) и контралатеральных лапах (интактный нерв). Это измерение проводили 3 раза на каждой лапе. Механическую аллодинию измеряют, как описано S.R. Chaplan et al., Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw, J. Neurosci. Meth. (1994), 53, 55-63. Ипсилатеральные (повреждение) и контралатеральные (контроль) лапы тестируют, как описано выше. Механический антиаллодинический эффект измеряют способом фон Фрея с нитями возрастающего размера, также оказывающими возрастающее давление.

Гипоальгезический эффект: фиг. 3

Результаты фиг. 3 показывают, что при введении р. о. соединение примера 10 дает снижение очень высокой значимости (65-100%) термической гиперальгезии, индуцированной частичной лигатурой седалищного нерва, в период от 45 до 150 мин при максимальном эффекте

100% на 80-й минуте (8,2+0,9 с против 8,3 с). Вероятно, что эффект будет все еще значительным через 180 мин.

Антиаллодинический эффект: фиг. 4

Эффект соединения примера 10 на механическую аллодинию измеряют с помощью теста фон Фрея. Результаты показывают значительный антиаллодинический эффект большой длительности при максимуме на 60-й минуте, соответствующий 75% максимального ответа (необработанный контроль).

Подписи к графическим материалам:

Во всех графических материалах статистические анализы (р, критерий Стьюдента) указаны следующим образом:

* р < 0,1 против контроля

** р < 0,01 против контроля

*** р < 0,001 против контроля

Фиг. 1 : Число облизываний (сухое облизывание) лапы против времени (минуты) после перорального введения носителя (а) или соединения в соответствии с изобретением (в).

Абсцисса: время в минутах; ордината: число сухих облизываний

1А: соединение примера 6; 1 Б: соединение примера 8; 1 В: соединение примера 10; 1 Г: соединение примера 12; 1Д: соединение примера 14; 1 Е: соединение примера 16.

Фиг. 2: число облизываний (сухое облизывание) лапы против времени (минуты) после перорального введения носителя (п) или соединения в соответствии с изобретением или референсного соединения (-).

Абсцисса: время в минутах; ордината: число сухих облизываний 2А: соединение примера 6; 2Б: соединение 15 заявки WO2007/048787;

Фиг. 3: Модель невропатической боли: частичная лигатура седалищного нерва (мыши). Ответ, генерируемый пероральным введением носителя (а) или соединения примера 10 (и): отдергивание лапы (в секундах) против времени (в минутах).

Соединение 10: 50 мг/кг

Носитель: ЕЮН/0,5% метилцеллюлоза (1 ,5/98,5)

Тесты проводили на сутки 14 после операции; ипсилатеральная лапа Абсцисса: время в минутах, ордината: отдергивание лапы в секундах Подошвенный тест: оценка термической гиперальгезии

Среднее контралатеральных лап: соединение 10 на 90 минуте = 8,3 с.

Фиг. 4: Тест фон Фрея: Давление фон Фрея (г) против времени (мин) после перорального введения носителя (а) или соединения примера 10 (и).

Соединение 10: 50 мг/кг

Носитель: ЕЮН/0,5% метилцеллюлоза (1 ,5/98,5)

Абсцисса: время в минутах, ордината: давление фон Фрея в граммах.

Тесты проводили на сутки 14 после операции.