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1. (WO2019047812) PHARMACEUTICAL COMPOSITION OF DOCETAXEL CONJUGATE AND PREPARATION METHOD
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说明书

发明名称 0001   0002   0003   0004   0005   0006   0007   0008   0009   0010   0011   0012   0013   0014   0015   0016   0017   0018   0019   0020   0021   0022   0023   0024   0025   0026   0027   0028   0029   0030   0031   0032   0033   0034   0035   0036   0037   0038   0039   0040   0041   0042   0043   0044   0045   0046   0047   0048   0049   0050   0051   0052   0053   0054   0055   0056   0057   0058   0059   0060   0061   0062   0063   0064   0065   0066   0067   0068   0069   0070   0071   0072   0073   0074   0075   0076   0077   0078   0079   0080   0081   0082   0083   0084   0085   0086   0087   0088   0089   0090   0091   0092   0093   0094   0095   0096   0097   0098   0099   0100   0101   0102   0103   0104   0105   0106   0107   0108   0109   0110   0111   0112   0113   0114   0115   0116   0117   0118   0119   0120   0121   0122   0123   0124   0125   0126   0127   0128   0129   0130   0131   0132   0133   0134   0135   0136   0137   0138   0139   0140   0141   0142   0143   0144   0145   0146   0147   0148   0149   0150   0151   0152   0153   0154   0155   0156   0157  

权利要求书

1   2   3   4   5   6   7   8   9   10  

附图

1 (R26)   2 (R26)   3 (R26)   4 (R26)   5 (R26)  

说明书

发明名称 : 多西他赛共缀物的药物组合物及制备方法

技术领域

[0001]
本发明属于医药制备技术领域,特别涉及一种多西他赛共缀物的药物组合物及制备方法。

背景技术

[0002]
恶性肿瘤是当今危害人类生命健康的重要杀手,肿瘤转移是恶性肿瘤的本质特征之一,也是肿瘤治疗失败的最根本原因,临床肿瘤患者约有80%以上死于恶性肿瘤转移。紫杉烷类药物包括紫杉醇、多西他赛,具有口服生物利用度较低的特点,主要原因在于其易被胃肠道上皮的P-糖蛋白外排泵出,易被细胞色素P450代谢,且水溶性差。由于紫杉烷类药物目前依然是其治疗领域的一线药物,因此围绕该类化合物的各种研究是药物化学家的研究热点。自提出将天然抗肿瘤药物分子与免疫增强剂进行化学共缀以来,希望通过化学治疗与免疫治疗相结合,寻找具有抗肿瘤转移的药物分子的研究不断取得新的进展。
[0003]
为了临床使用需要药物组合物可以制备成各种给药形式,其中,通过非胃肠道给药的新形式包注射液及注射用粉针等。市售的紫杉烷类抗肿瘤药多采用表面活性剂增溶,其中,紫杉醇注射液多采用药物和聚氧乙烯蓖麻油溶解于无水乙醇溶液中,临床使用前采用输液稀释溶解,紫杉醇注射液中聚氧乙烯蓖麻油与药物的比值约为88:1。而多西他赛注射液多采用多西他赛溶于吐温中,临床使用时采用含乙醇的水溶液使溶解,多西他赛注射液中吐温与药物的比例为27:1。安全研究表明,非离子表面活性剂注射使用具有一定的过敏性和溶血性,大量使用的表面活性剂可造成严重的副反应,限制了药物的临床使用。由于紫杉烷类药物和非离子表面活性剂的副反应,紫杉醇和多西他赛注射液使用前均需服用皮质激素和抗组胺类药物脱敏。此外,输液中存在高浓度表面活性剂时会对塑料输液瓶(特别是PVC输液瓶)中的增塑剂具有溶出作用,导致增塑剂进入输液和输液中微粒增加。另外,上市的多西他赛注射液和紫杉醇注射液均加入乙醇促进药物复溶,注射给药后增加了有机溶剂的毒副反应。还有,对于不同的具体药物,保证其储存稳定性是实现临床用药安全的基本保证。
[0004]
多西他赛是目前临床应用效果较好的紫杉烷类药物,是由法国Rhone-Poulenc Rorer公司开发的半合成抗肿瘤药物,在1995年首次上市,由于多西他赛在水中不溶,所以为了提高多西他赛溶解度,采用加入表面活性剂、有机溶剂等方法。
[0005]
中国专利申请02147245.9、93119653.1和法国申请专利9108527中描述了一种可注射组合物,所述组合物将紫杉烷类化合物如多西他赛等、乙醇等稀释剂、表面活性剂混溶,减压除去乙醇,得到稳定的含药溶液。将溶液采用水或含有山梨醇、葡萄糖、丙二醇、氯化钠等的水溶液稀释,二者混合后的液体作为配制临床输注使用时的药物溶液。
[0006]
美国专利US5698582和US5714512公开了制备多西他赛母液的方法,将多西他赛溶解在无水乙醇中,加入吐温80,减压旋转蒸发将乙醇除去,得到母液是稳定的,母液用5%的葡萄糖输液稀释到浓度为0.1、0.3和0.5mg/ml时,所得稀释液也是稳定的。
[0007]
中国专利CN200610032942公布了在处方中加入抗氧化剂可提高制剂的稳定性。将柠檬酸、聚山梨酯80和处方量的多西他赛溶于适量的无水乙醇中,搅拌混合至澄明均一溶液,减压挥去乙醇后分装于西林瓶中。稳定性留样结果表明,制剂稳定性良好,有效期延长至1.5年不变质。中国专利CN200710162304.8提供了一种液体组合物,所述组合物为溶解有紫杉烷类化合物的表面活性剂溶液,该溶液的pH值在5以下,优选pH值为3-5。该液体组合物特别适合用作注射制剂,并在存放过程中不易降解,更安全有效。
[0008]
以上制备方法均将紫杉烷类药物和吐温80互溶,由于药物以溶解状态存在,增加了药物的不稳定性,此外,表面活性剂使用量大,含药物的溶液或者其复溶媒中使用到乙醇水溶液,降低了药物的临床使用安全性。
[0009]
现有技术解决稳定性和溶解性的方案对于本发明的多肽共缀药物难以解决相应问题,且由于现有表面活性剂的使用量大可能导致安全性的问题,是一直困扰的难题。
[0010]
本发明要解决的技术问题是提供一种具有较高稳定性的紫杉烷类药物组合物,提高药物的稳定性,降低表面活性剂和有机溶剂的使用,显著提高用药安全性。
[0011]
发明内容
[0012]
本发明要解决的技术问题是提供一种具有较高稳定性的紫杉烷类药物组合物,提高药物的稳定性,降低表面活性剂和有机溶剂的使用,显著提高用药安全性。
[0013]
本发明将多西他赛共缀物(多肽衍生物)和含表面活性剂的复溶媒分开制备,多西他赛共缀物冻干粉针以固体形式存在,而不是溶于表面活性剂的溶液形式,明显提高了药物的稳定性。由于多西他赛共缀物在弱酸性条件下稳定但溶解度差,在中性或弱碱性条件下药物易降解但溶解度高,本发明同时考虑了药物的稳定性和溶解性,在冻干粉针中加入缓冲液调节pH值为弱酸性(3.0-7.0,特别优选4.5-5.5),药物稳定性提高。同时采用少量的表面活性剂的水溶液作为复溶媒,临床使用前将复溶媒加入到冻干粉针中,药物可快速复溶。复溶溶液采用5%葡萄糖输液、0.9%氯化钠输液或乳酸钠林格输液进一步稀释到临床使用的药物浓度后进行输液。
[0014]
本发明未加入有机溶剂,仅加入≤药物5倍量的表面活性剂对药物增溶,对比上市多西他赛注射液中加入的27倍药物重量的吐温80,以及上市紫杉醇注射液中加入的88倍药物重量的聚氧乙烯蓖麻油,且二者均加入乙醇增溶,本研究表面活性剂的使用量较低,提高了临床给药的安全性。
[0015]
所述多西他赛共缀物是通过将多西他赛与优选的强效免疫增强剂胞壁酰二肽简化物相连,实现 了化学治疗与免疫治疗相结合的抗肿瘤与抗肿瘤转移的双重功效,具有比多西他赛更强的抗肿瘤活性。
[0016]
所述多西他赛共缀物,可通过干扰细胞有丝分裂和分裂期间细胞功能所必须的微管网络而起抗肿瘤作用。所述衍生物由于分子结构组成,既具有紫杉烷类化合物性质,又具有小分子免疫增强剂的一定特性,在水中几乎不溶。
[0017]
具体的,所述多西他赛共缀物分子式如下:
[0018]
[0019]
其中,R 1选自苯环或者一个以上的卤素取代的苯环,卤素选自氟、氯、溴、碘,n为2至5的自然数,选自2、3、4或5。
[0020]
所述的多西他赛共缀物选自如下群组:
[0021]
[0022]
[0023]
[0024]
具体的,本发明所述的多西他赛共缀物组合物,包括:(1)多西他赛共缀物组合物,和含有一种以上药学上可接受的载体,该载体不含表面活性剂,组合物的pH值范围为3.0-7.0;(2)和另一种分至于不同腔室的复溶媒,所述复溶媒包含一种以上的表面活性剂,以多西他赛共缀物的重量份为1份计,表面活性剂的重量份为0.1-15份。所述不同腔室可以是同一容器的两个分隔部分,也可以是两个不同的容器等等相互分离的部分。
[0025]
所述药学上可接受的载体选自填充剂、pH值调节剂中的一种或几种。
[0026]
优选方案之一为药学上可接受的载体选自一种以上的填充剂,多西他赛共缀物重量份按1份计,填充剂重量份为1-100份,优选3-20份。
[0027]
所述填充剂选自甘露醇、蔗糖、葡萄糖、海藻糖、右旋糖苷、乳糖、羟乙基淀粉、磺丁基-β-环 糊精、β-环糊精、聚乙烯吡咯烷酮、组氨酸、缬氨酸、苏氨酸、甘氨酸、精氨酸、木糖醇、山梨醇、果糖、泊洛沙姆、明胶、壳聚糖、氯化钠、白蛋白中的一种或几种;优选甘露醇。
[0028]
另一优选方案之一为药学上可接受的载体选自一种以上的pH值调节剂,所述pH值调节剂选自氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、盐酸、柠檬酸、酒石酸、醋酸、苹果酸、磷酸、硝酸、硫酸中的一种或几种。在一个优选的实施方案中,前述碱性pH值调节剂和酸性pH值调节剂组成的缓冲体现,如所述的酸碱调节剂是磷酸二氢钠和氢氧化钠。组合物的pH值范围优选为4.5-5.5。
[0029]
通过上述原辅料的选择,在不含有表面活性剂的情况下,尽可能的保证了药物组合物的溶解度和稳定性。其中,当组合物的pH值大于7.0,其稳定性明显变差,难以满足药品长期储存的要求,而当组合物的pH值小于3.0,药物组合物相对于pH为5的药物组合物的溶解性降低到1/20以下,增加复溶时间,复溶效果较差。优选药物组合物的pH值为4.5-5.5,具有更优异的复溶和储存稳定效果。
[0030]
在本发明大量的实验研究中发现如果将药物与表面活性剂等增溶剂混合后制备,增溶剂会使所述多西他赛共缀物在制剂中处于液体或半液态,难以将水分除尽,药物在储存过程中易发生水解等降解反应,稳定性明显变差。
[0031]
为了临床需要,使得所述组合物具有更为适宜的溶解效果,将复溶媒与存在于不含表面活性剂的载体中的多西共缀物组合物,在注射前与前述组合物混合,避免了复溶媒对药物组合物的储存影响,复溶媒包括一种以上的较少量的表面活性剂和注射用水,其中,表面活性剂的使用量为较少量。
[0032]
前述包含一种以上的表面活性剂的复溶媒,以多西他赛共缀物1份计,表面活性剂的重量份优选为3-10倍,可尽可能减少使用表面活性剂所引起的过敏和溶血等不良反应,提高了病人对药物的耐受性,可提高临床给药剂量,并可减少针对药物毒副作用而进行的给药前的预处理。由于上述组合物原辅料组成和复溶媒的选择,避免了乙醇等不良有机溶剂的使用,最大限度的降低乙醇可能带来的毒副反应。
[0033]
复溶媒中的表面活性剂选自两性表面活性剂、非离子表面活性剂中的一种或几种。其中两性表面活性剂选自豆磷脂、蛋黄磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、丝氨酸磷脂、肌醇磷脂、磷脂酸、脑磷脂或氢化磷脂中的一种或几种:非离子表面活性剂选自吐温类、司盘类、蔗糖脂肪酸酯类(如蔗糖酯)、聚氧乙烯脂肪酸酯(如卖泽Myrij)、聚氧乙烯脂肪醇醚类(如苄泽Brij)或泊洛沙姆类中的一种或几种。
[0034]
通过大量实验优选自吐温(聚山梨醇酯-80)、聚氧乙烯蓖麻油EL35、聚乙二醇硬脂酸酯15、泊洛沙姆188。所述组合物在采用上述复溶媒进行复溶得到一种复溶液,提高药物在注射溶媒中的溶 解度,复溶液可在常规的输液媒介中溶解使用,如药物溶解后可溶于5%葡萄糖水溶液、0.9%氯化钠输液或乳酸钠林格等输液后静脉滴注。
[0035]
本发明的目的还在于提供一种制备毒性小、具有良好水溶性、稳定性提高的多西他赛共缀物组合物的可工业化实施的方法,所述组合物优选为冻干粉末制剂或者注射液。
[0036]
具体,所述制备方法包括:采用上述组成(1)的原辅料采用溶剂进行溶解,调节pH值到所述范围,冻干制备得到。
[0037]
优选复溶媒(2)的制备方法包括:称取处方量的表面活性剂,加入处方量的水,搅拌至溶解,灌装,灌装时充氮气,使顶空氧含量≤7%,加塞、轧盖,灭菌。
[0038]
所述组合物中复溶媒采取分开制备,不仅使得组合物中表面活性剂使用量降低,且提高了药物稳定性。而且,为了提高原辅料的快速溶解,保证所述组合物冻干后的状态,如色泽和外观等,尽可能的降低水分残留对组合物稳定性的影响。
[0039]
本发明进一步提供一种前述组合物的制备方法,所述组份(1)的制备方法包括:取一定量的溶剂,加入填充剂搅拌使溶解,再加入多西他赛共缀物,搅拌,待多西他赛共缀物均匀分散后,进一步加入或者不加入前述溶剂相同或者不同的适宜溶剂使药物完全溶解,冷冻工艺除去溶剂,即得。
[0040]
所述溶剂选自水、叔丁醇、乙醇、丙二醇、聚乙二醇、环己烷中的一种或几种,优选叔丁醇。
[0041]
所述溶剂进一步优选水和叔丁醇、乙醇、丙二醇、聚乙二醇中一种以上按照一定比例的组合。其中所述溶剂的选择用量可以根据冻干工艺做适宜调整,优选含水溶剂中水和叔丁醇、乙醇、丙二醇、聚乙二醇中一种以上的重量比范围为水为1份时,溶剂为0.1份-98份;优选水和叔丁醇的混合溶剂,配比为1:0.1-1:5,特别优选1:0.5,所述适宜溶剂在冻干后基本无残留,尽可能的降低了其对临床使用安全性的影响。
[0042]
经大量实验研究发现,将多西他赛共缀物与填充剂一起制成冻干粉组合物,复溶媒分开制备,临床使用前混合使药物溶解。冻干粉组合物是一种保存药物的有效方法。将需干燥的制品在低温下使其所含水分冻结,然后在真空的环境下干燥,让有机溶剂和/或水分由固体状态直接升华为蒸气并从制品中排除而使制品活性干燥,即冷冻干燥过程。该方法有效地防止了制品理化及生物特性的改变,有效保护热敏性药物有效成分的稳定性:制品在干燥后形态疏松、颜色基本不发生改变,加复溶媒后能够快速溶解并恢复原有水溶液的理化性质和生物活性。冷冻干燥过程可以将冻干粉中溶剂残留控制到很低,对于易水解的药物可提高稳定性,并降低了药物染菌的可能性。干燥在真空条件下进行,冷冻干燥过程结束后可以充惰性气体,对于一些易氧化药物有很好的保护作用。药物制备成冻干粉针可延长制品的保存期限或放宽保存条件,更加方便运输。
[0043]
本发明优选方案中采用水和叔丁醇等适宜溶剂组成含水溶剂用于冻干前溶液的制备,提高了药 物的溶解度。所选择适宜溶剂具有与水混溶、毒性低的特点,是很好的冻干溶剂。
[0044]
本发明的有益效果主要表现在:
[0045]
(1)本发明组合物中尽可能减少了表面活性剂的使用,并减少有机溶剂的使用,降低了给药的不良反应。
[0046]
(2)本发明的多西他赛共缀物冻干粉组合物和复溶媒分开制备,临床使用前将两瓶混合均匀,使药物溶解。由于药物与含增溶剂的复溶媒分开制备和储存,提高了药物的稳定性,临床使用更加安全。
[0047]
(3)本发明的冻干粉组合物在制备中采用水和叔丁醇等混合溶剂对药物增溶,然后冻干制备。采用混合溶剂增溶可解决难溶性药物在冻干时的溶解问题,且叔丁醇等溶剂用于冷冻干燥性能好、毒性低等特点。

附图说明

[0048]
图1为多西他赛共缀物IA1对MDA-MB-231人乳腺癌小鼠的抑瘤作用效果图。
[0049]
图2为多西他赛共缀物IA1冻干粉针对BALB/c小鼠的4T1乳腺癌肺转移抑制效果图。
[0050]
图3为本专利IA1、MDC-405及多西他赛小鼠乳腺癌4T1肺转移模型试验对比结果,其中,3A为乳腺瘤重对比结果,3B为肺表面转移结节数对比结果,其中10mg IA1和10mg MDC-405,与5.7mg多西他赛为等摩尔。
[0051]
图4为本专利IA1、多西他赛、多西他赛+MDA-1及多西他赛+MDA-1-linker小鼠乳腺癌4T1肺转移模型试验对比结果,其中,4A为乳腺瘤重对比结果,4B为肺表面转移结节数对比结果,其中10mg IA1与5.7mg多西他赛为等摩尔。
[0052]
图5:IA1、多西他赛、多西他赛+MDA-1及多西他赛+MDA-1-linker小鼠乳腺癌4T1肺转移模型试验,其中,5A为瘤体积对比结果,5B为瘤重对比结果,其中DTX代表多西他赛,5mg IA1与2.85mg多西他赛为等摩尔。

具体实施方式

[0053]
以下通过优选实施例和附图对本发明作进一步解释阐明,但本发明并不只限于下述保护范围,下述实施例中除另有说明外,多西他赛共缀物选自前述化合物IA1为代表。
[0054]
其中,下述实施例中杂质含量侧测定方法如下,参照《中国药典》2015年版四部通则0512液相色谱法检测。取系统适用性溶液和对照品、供试品溶液各20μl,注入液相色谱仪,记录色谱图。计算公式:
[0055]
其中:A T为供试品溶液中各杂质的峰面积;A S为对照品溶液中主峰的平均峰面积;C T为供试品 溶液的浓度(mg/ml);C S为对照品溶液中多西他赛共缀物的浓度(mg/ml);F为各杂质的校正因子。
[0056]
采用十八烷基键合硅胶色谱柱(C18,4.6×150mm,3.5μm),以乙腈:0.1%磷酸=45:55作为A相,乙腈作为B相进行梯度洗脱,检测波长:225nm;流速:1.0ml/min;柱温:40℃。
[0057]
实施例1
[0058]
IA1在不同pH值环境下的稳定性以及在不同pH值溶剂中的溶解度实验,具体如表1和表2。
[0059]
表1:IA1在不同pH值条件下的稳定性
[0060]
[0061]
有上述结果可见,当pH值>7.0时,药物杂质极具增加,难以满足有效成分药用所需含量的需求;当pH值<6.0时,药物杂质增加量非常明显的减少。
[0062]
表2:IA1在水、不同pH值磷酸盐缓冲液中的溶解度
[0063]
[0064]
然而,当组合物的酸碱度pH3.0以下的溶液中,溶解性明显变低,已基本和物质本身的溶解性一致。从前述结果综合可见,在pH 4.5-5.5有较为优异的溶解度和稳定性。
[0065]
实施例2
[0066]
参照实施例1的实验结果,选取聚山梨酯80、甘露醇、葡萄糖、乳糖、蔗糖、磺丁基-β环糊精作为冻干填充剂,如下表3。
[0067]
所制备的多西他赛共缀物IA1(25mg规格)填充剂种类筛选处方(单位mg/支)
[0068]
表3:
[0069]
[0070]
[0071]
取上述量的注射用水,加入对应填充剂,搅拌使溶解,加入多西他赛共缀物IA1,搅拌使均匀分散,待IA1均匀分散后,加入叔丁醇溶解,溶液通过0.22μm滤膜过滤除菌,滤液分装至15ml西林瓶中,冻干,轧盖。
[0072]
总杂变化%指的是各处方组合物冻干后相对于原料药总杂变化的量,由此可见,采用表面活性剂聚山梨酯80作为填充剂制备后,总杂增加明显,明显影响后续使用稳定性。且在处方1未加填充剂的情况下,复溶速度非常慢,无法达到预期的理想临床使用要求。
[0073]
实施例3
[0074]
在实施例2处方3的基础上,选择乙醇、丙二醇、聚乙二醇代替叔丁醇作为制备溶解溶剂。
[0075]
表4:
[0076]
[0077]
制备方法:同实施例2,结果发现,采用单一溶剂叔丁醇的复溶和杂质稳定性优于其他复溶媒,部分溶剂在冻干后还会出现不均匀或者难以完全冻干的结果。
[0078]
注:所述溶解溶剂在冻干后基本全部蒸发,不会对药物后续使用构成安全影响。
[0079]
实施例4
[0080]
依据实施例3的结果,根据溶剂成本,选择不同比例的水和叔丁醇作为制备溶剂,考察制备效果。注射用多西他赛共缀物IA1(25mg规格)中间体溶液中叔丁醇与水的比例。
[0081]
表5:
[0082]
[0083]
注:叔丁醇醇密度为0.78g/cm 3
[0084]
采用上述处方,对形状,复溶及水分和溶剂残留量,以及稳定性考察,优选选用处方11中制备溶剂叔丁醇与水体积比为1:2。经综合考虑,选择处方11,即25mg规格中间体溶液总体积为3ml。
[0085]
实施例5
[0086]
通过前述实验,对调节酸碱度的缓冲物质进行选择,考察如磷酸二氢钠/氢氧化钠、醋酸/氢氧化钠等对复溶效果的影响,以及进一步考察了组合物溶液在pH4.0、4.5、5.0、5.5时样品的性质,具体如下表6。
[0087]
表6:注射用多西他赛共缀物IA1(25mg规格)不同pH值的筛选处方(单位mg/支)
[0088]
[0089]
实施方案14-20制备方法:取上述量的注射用水,加入甘露醇,搅拌使甘露醇溶解,加入多西他赛共缀物,搅拌使均匀分散,待多西他赛共缀物均匀分散后,加入叔丁醇搅拌使药物完全溶解,加入或者不加入一定量的缓冲物质测定pH值,应与所述pH值相符,溶液通过0.22μm滤膜过滤除菌,滤液分装至15ml西林瓶中,冻干,轧盖。
[0090]
从上述结果可见,加入填充剂和适宜的酸碱调节剂,复溶时间有明显的改善,并且,采用磷酸二氢钠和氢氧化钠作为酸碱调节剂,在4.5-5.5具有明显更优的稳定性和复溶效果。所以,综合稳定性和溶解度情况,药物组合物的pH值优选为磷酸二氢钠和氢氧化钠,pH至范围为4.5-5.5。
[0091]
实施例6
[0092]
为了使前述制剂实验方案在具体临床使用中更为方便,在前述实施例组合物的基础进一步包含一种可以得到快速复溶、且溶解效果优异的复溶媒,优选发现聚山梨酯80(TW80)、聚乙二醇15羟硬脂酸酯(HS 15)、聚氧乙烯蓖麻油(EL35)均能对前述制剂具有良好的增溶效果。
[0093]
优选复溶媒的制备方法包括:称取处方量的表面活性剂,如聚山梨酯80于烧杯中,再加入处方量的水,磁力搅拌至溶解,根据单位处方量灌装到西林瓶中。灌装时充氮气,使顶空氧含量≤7%,加塞、轧盖,样品于121℃湿热灭菌。
[0094]
通过大量实验发现,使药物浓度有1.5mg/mL-15mg/mL,增溶溶剂的使用倍数仅为1.5-5倍,可见,即使使用表面活性剂增溶,由于前述处方的选择,可以大幅的降低表面活性剂的使用。
[0095]
其中,以药物浓度为1.7mg/mL为例,使用聚山梨酯80(TW80)、聚乙二醇15羟硬脂酸酯(HS15)、聚氧乙烯蓖麻油(EL35)的倍数分别为3.9倍,4.2倍和4.4倍,由此可见,采用聚山梨酯80复溶效果略好于其复溶媒,所以,优选聚山梨酯80作为本发明注射用多西他赛共缀物的复溶媒。
[0096]
实施例7
[0097]
实施例5中的处方17稳定性留样(加速留样试验)结果见下表7:
[0098]
表7:
[0099]
[0100]
规格:25mg包装:中性硼硅玻璃管制注射剂瓶放置条件:25℃±2℃,60%RH±5%RH
[0101]
由上述结果可见,药物在加速条件下留样6个月,比较稳定,杂质也在限度内。有效期拟定为在2-8℃储存2年。
[0102]
实施例8 药效实验(MDA-MB-231乳腺癌细胞模型)
[0103]
采用MDA-MB-231乳腺癌细胞模型,多西他赛共缀物IA1冻干粉末1支(实施例5中的处方17,25mg规格),采用实施例6的聚山梨酯80为复溶媒复溶,输注溶液采用5%葡萄糖输液稀释到 0.5mg/ml,实验结果如下表所示。
[0104]
表8 多西他赛共缀物IA1对MDA-MB-231人乳腺癌小鼠的抑瘤作用
[0105]
[0106]
结果可见如图3所示,MDA-MB-231乳腺癌细胞模型中,制剂相对于对照均具有显著治疗意义。
[0107]
实施例9 药效实验(4T1乳腺癌细胞模型)
[0108]
采用BALB/c小鼠的4T1乳腺癌细胞转移模型,多西他赛共缀物IA1冻干粉末1支(实施例5中的处方17,25mg规格),采用实施例6的聚山梨酯80为复溶媒复溶,输注溶液采用5%葡萄糖输液稀释到0.5mg/ml,实验结果如下表所示。
[0109]
表9 多西他赛共缀物IA1对4T1小鼠乳腺癌细胞模型小鼠的抑瘤作用考察
[0110]
[0111]
结果可见,4T1小鼠乳腺癌细胞模型中,注射用多西他赛共缀物IA1组小鼠乳腺癌瘤重明显小于对照组,相对于对照均具有显著治疗意义。
[0112]
实施例10 药效实验(BALB/c小鼠的4T1乳腺癌肺转移)
[0113]
采用BALB/c小鼠中4T1乳腺癌细胞转移模型,多西他赛共缀物IA1冻干粉末1支(实施例5中的处方17,25mg规格),采用实施例6的聚山梨酯80为复溶媒复溶,输注溶液采用5%葡萄糖输液稀释到0.5mg/ml,取肺组织,统计肺中结节数量。
[0114]
表10 多西他赛共缀物IA1冻干粉针抑制BALB/c小鼠的4T1乳腺癌肺转移
[0115]
[0116]
p<0.001
[0117]
表11:
[0118]
[表0001]
I II III IV
>5mm 3-5mm 1-2.9mm <1mm

[0119]
Score=I×4+II×3+III×2+IV×1
[0120]
结果可见,多西他赛共缀物IA1冻干粉针对BALB/c小鼠的4T1乳腺癌肺转移有明显抑制作用。
[0121]
体内活性测试部分
[0122]
实施例11,采用小鼠乳腺癌4T1肺转移模型:
[0123]
(1)细胞培养与肿瘤接种:4T1细胞培养在含有10%胎牛血清(Hyclone Corp,USA)、1%谷氨酰胺与1%青-链霉素的1640培养基(Gibco)中。收集对数生长期的4T1细胞,调节细胞浓度为1.5×10 6/mL。取雌性BALB/c小鼠,于第4乳腺脂肪垫内接种4T1细胞,接种体积为0.1mL,即1.5×10 5/只。
[0124]
分组与给药:BALB/c小鼠乳腺脂肪垫内接种4T1乳腺癌细胞,设接种当天为D0,接种后第4天分组给药,试验设四组:
[0125]
①溶媒对照组(空白对照组),
[0126]
②IA1 10mg/kg组,
[0127]
③DTX(多西他赛)5.7mg/kg组,
[0128]
④MDC 10mg/kg组。
[0129]
③和④为阳性对照组。
[0130]
每组10只动物。小鼠每周一次尾静脉注射给药,连续4周。给药过程中监测动物体重及瘤体积。每2-3天称量动物体重,游标卡尺测量乳腺肿瘤的长、短径,以公式:(1/2)×长径×(短径) 2计算肿瘤大小。接瘤后第28天(D28)结束实验,眼球采血后颈椎脱臼法处死小鼠,称乳腺瘤重、肺重,计数肺表面转移结节数。瘤重实验结果如图3A所示,肺表面转移结节数实验结果如图3B所示。
[0131]
如图3A和3B所示,IA1、MDC-405及多西他赛相对于空白对照组显著抑制乳腺瘤重和肺表面转移结节数,更为重要的是,IA1相对于阳性对照组多西他赛的抑制具有显著差异,而MDC-405相对于多西他赛的抑制未表现显著差异,由此可见IA1相对于MDC-405及多西他赛均具有更好的抑制瘤和癌转移作用。
[0132]
(2)细胞培养与肿瘤接种:4T1细胞培养在含有10%胎牛血清(Hyclone Corp,USA)、1%谷氨酰胺与1%青-链霉素的1640培养基(Gibco)中。收集对数生长期的4T1细胞,调节细胞浓度为 1.5×10 6/mL。取雌性BALB/c小鼠,于第4乳腺脂肪垫内接种4T1细胞,接种体积为0.1mL,即1.5×10 5/只。
[0133]
分组与给药:BALB/c小鼠乳腺脂肪垫内接种4T1乳腺癌细胞,设接种当天为D0,接种后第4天分组给药,试验设五组:
[0134]
①溶媒对照组(空白对照组),
[0135]
②IA1 10mg/kg组,
[0136]
③DTX(多西他赛)5.7mg/kg组,
[0137]
④DTX(5.7mg/kg)+MDA-1(4.53mg/kg)组,
[0138]
⑤DTX(5.7mg/kg)+MDA-1-linker(4.43mg/kg)组。
[0139]
③、④和⑤为阳性对照组。
[0140]
每组10只动物。小鼠每周一次尾静脉注射给药,连续4周。给药过程中监测动物体重及瘤体积。每2-3天称量动物体重,游标卡尺测量乳腺肿瘤的长、短径,以公式:(1/2)×长径×(短径) 2计算肿瘤大小。接瘤后第28天(D28)结束实验,眼球采血后颈椎脱臼法处死小鼠,称乳腺瘤重、肺重,计数肺表面转移结节数。瘤重实验结果如图4A所示,肺表面转移结节数实验结果如图4B所示。
[0141]
如图4A所示,IA1、多西他赛、多西他赛+MDA-1及多西他赛+MDA-1-linker相对于空白对照组显著抑制乳腺瘤重增加,更为重要的是,IA1相对于阳性对照组多西他赛、多西他赛+MDA-1及多西他赛+MDA-1-linker的抑制均具有显著差异,说明IA1相对于阳性对照组均具有更好的抑瘤作用。
[0142]
如图4B所示,IA1、多西他赛、多西他赛+MDA-1及多西他赛+MDA-1-linker相对于空白对照组显著抑制肺表面转移结节数增加,更为重要的是,IA1相对于阳性对照组多西他赛的抑制具有显著差异,相对于多西他赛+MDA-1及多西他赛+MDA-1+linker抑制效果分别增加了27.9%和18.6%,说明IA1相对于阳性对照组均具有更好的抑制癌转移作用。
[0143]
(3)细胞培养与肿瘤接种:4T1细胞培养在含有10%胎牛血清(Hyclone Corp,USA)、1%谷氨酰胺与1%青-链霉素的1640培养基(Gibco)中。收集对数生长期的4T1细胞,调节细胞浓度为1.5×10 6/mL。取雌性BALB/c小鼠,于第4乳腺脂肪垫内接种4T1细胞,接种体积为0.1mL,即1.5×10 5/只。
[0144]
分组与给药:BALB/c小鼠乳腺脂肪垫内接种4T1乳腺癌细胞,设接种当天为D0,接种后第4天分组给药,试验设六组:
[0145]
①溶媒对照组(空白对照组),
[0146]
②IA1 5mg/kg组,
[0147]
③IA1 10mg/kg组,
[0148]
④DTX(多西他赛)2.85mg/kg组,
[0149]
⑤DTX(2.85mg/kg)+MDA-1(2.26mg/kg)组,
[0150]
⑥DTX(2.85mg/kg)+MDA-1-linker(2.21mg/kg)组。
[0151]
④、⑤和⑥为阳性对照组。
[0152]
每组10只动物。小鼠每周一次尾静脉注射给药,连续4周。给药过程中监测动物体重及瘤体积。每2-3天称量动物体重,游标卡尺测量乳腺肿瘤的长、短径,以公式:(1/2)×长径×(短径) 2计算肿瘤大小。接瘤后第28天(D28)结束实验,眼球采血后颈椎脱臼法处死小鼠,称乳腺瘤重、肺重,计数肺表面转移结节数。瘤体积实验结果如图5A所示,瘤重实验结果如图5B所示。
[0153]
如图5A和5B所示,IA1、多西他赛、多西他赛+MDA-1及多西他赛+MDA-1-linker相对于空白对照组显著抑制瘤体积和瘤重增加,更为重要的是,IA1相对于阳性对照组多西他赛、多西他赛+MDA-1及多西他赛+MDA-1-linker的抑制均具有显著差异,说明IA1相对于阳性对照组均具有更好的抑制瘤作用。
[0154]
通过同样的实验发现,本发明其他优选的化合物具有IA1类似的抑瘤效果和抑瘤转移效果,但以IA1最为优异,从而可以推论,本发明优选的化合物均相对于MDC-405及多西他赛、有更好的抑瘤效果和抑瘤转移效果。
[0155]
注,上述实验中,MDA-1-linker的结构如下:
[0156]
[0157]
上述实施例为本发明较佳的实施方式,但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制,其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化,均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围之内。

权利要求书

[权利要求 1]
一种多西他赛共缀物组合物,其特征在于,包括:(1)多西他赛共缀物组合物,和含有一种以上药学上可接受的载体,该载体不含表面活性剂,组合物的pH值范围为3.0-7.0;(2)和另一种分至于不同腔室的复溶媒,所述复溶媒包含一种以上的表面活性剂,以多西他赛共缀物的重量份为1份计,表面活性剂的重量份为0.1-15份,所述化合物的结构如下: 其中,R 1选自苯环或者含一个以上的卤素取代的苯环,卤素选自氟、氯、溴、碘,n为2至5的自然数。
[权利要求 2]
根据权利要求1所述的多西他赛共缀物组合物,其特征在于,药学上可接受的载体选自一种以上的填充剂,多西他赛共缀物重量份按1份计,填充剂重量份为1-100份,优选3-20份,所述填充剂选自甘露醇、蔗糖、葡萄糖、海藻糖、右旋糖苷、乳糖、羟乙基淀粉、磺丁基-β-环糊精、β-环糊精、聚乙烯吡咯烷酮、组氨酸、缬氨酸、苏氨酸、甘氨酸、精氨酸、木糖醇、山梨醇、果糖、泊洛沙姆、明胶、壳聚糖、氯化钠、白蛋白中的一种或几种。
[权利要求 3]
根据权利要求1或2所述的多西他赛共缀物组合物,其特征在于,所述药学上可接受的载体选自pH调节剂,pH调节剂选自氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、盐酸、柠檬酸、酒石酸、醋酸、苹果酸、磷酸、硝酸、硫酸中的一种或几种。在一个优选的实施方案中,所述的酸碱调节剂是磷酸二氢钠和氢氧化钠;组合物酸碱度优选为4.5-5.5。
[权利要求 4]
根据权利要求1—3任一权利要求所述的多西他赛共缀物组合物,其特征在于,所述组合物中,以多西他赛共缀物1份计,表面活性剂的重量份为3-10倍。
[权利要求 5]
根据权利要求1—3任一权利要求所述的多西他赛共缀物组合物,其特征在于,复溶媒中的表面活性剂选自两性表面活性剂、非离子表面活性剂中的一种或几种,其中两性表面活性剂选自豆磷脂、蛋黄磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、丝氨酸磷脂、肌醇磷脂、磷脂酸、脑磷脂或氢化磷脂中的一种或几种:非离子表面活性剂选自吐温类、司盘类、蔗糖脂肪酸酯类(如蔗糖酯)、聚氧乙烯脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪醇醚类或泊洛沙姆类中的一种或几种;特别优选自吐温(聚山梨醇酯-80)、 聚氧乙烯蓖麻油EL35、聚乙二醇硬脂酸酯15、泊洛沙姆188。
[权利要求 6]
根据权利要求1所述的多西他赛共缀物组合物,其特征在于,所述多西他赛共缀物选自:
[权利要求 7]
根据权利要求1-3任一权利要求所述的多西他赛共缀物组合物的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括:采用上述组成(1)的原辅料采用溶剂进行溶解,调节pH值到所述范围,冻干制备得到;复溶媒(2)的制备方法包括:称取处方量的表面活性剂,加入处方量的水,搅拌至溶解, 灌装,灌装时充氮气,使顶空氧含量≤7%,加塞、轧盖,灭菌。
[权利要求 8]
根据权利要求7所述的方法,其特征在于,所述溶剂选自水、叔丁醇、乙醇、丙二醇、聚乙二醇、环己烷中的一种或几种,优选叔丁醇。
[权利要求 9]
根据权利要求7所述的方法,其特征在于,进一步优选水和叔丁醇、乙醇、丙二醇、聚乙二醇中一种或一种以上按照一定比例的组合,优选含水溶剂中水和叔丁醇、乙醇、丙二醇、聚乙二醇中一种或一种以上的重量比范围为水为1份时,非水溶剂为0.1份-98份。
[权利要求 10]
根据权利要求7所述的方法,其特征在于,优选水和叔丁醇的混合溶剂,配比为1:0.2-1:5,特别优选1:0.5。

附图

[ 图 1]   [根据细则26改正 13.11.2018] 
[ 图 2]   [根据细则26改正 13.11.2018] 
[ 图 3]   [根据细则26改正 13.11.2018] 
[ 图 4]   [根据细则26改正 13.11.2018] 
[ 图 5]   [根据细则26改正 13.11.2018]