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1. (WO2015089683) MÉTODO PARA LA DETERMINACIÓN MICROBIOLÓGICA DE TRAZAS DE ANTIBIÓTICOS EN MUESTRAS BIOLÓGICAS DE BAJO VOLUMEN
Datos bibliográficos más recientes de la Oficina Internacional   

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Nº de publicación:    WO/2015/089683    Nº de la solicitud internacional:    PCT/CL2014/000072
Fecha de publicación: 25.06.2015 Fecha de presentación de la solicitud internacional: 11.12.2014
CIP:
C12Q 1/02 (2006.01), C12Q 1/18 (2006.01), C12R 1/445 (2006.01)
Solicitantes: UNIVERSIDAD DE SANTIAGO DE CHILE [CL/CL]; Av. Libertador Bernardo O'Higgins 3363 Estación Central, Santiago (CL)
Personas inventoras: SANHUEZA CHAVEZ, Loreto; (CL).
WILKENS ANWANDTER, Marcela Andrea; (CL).
LAURIDO FUENZALIDA, Claudio Aurelio; (CL)
Mandataria/o: MOLINA VILLASECA, Eduardo; Estudio Federico Villaseca y Cia. Av. Alonso de Cordova 5151, Piso 8, Las Condes 7560873 Santiago (CL)
Datos de prioridad:
3628-2013 18.12.2013 CL
Título (EN) METHOD FOR THE MICROBIOLOGICAL DETERMINATION OF TRACES OF ANTIBIOTICS IN LOW VOLUME BIOLOGICAL SAMPLES
(ES) MÉTODO PARA LA DETERMINACIÓN MICROBIOLÓGICA DE TRAZAS DE ANTIBIÓTICOS EN MUESTRAS BIOLÓGICAS DE BAJO VOLUMEN
(FR) PROCÉDÉ DE DÉTERMINATION MICROBIOLOGIQUE DE TRACES D'ANTIBIOTIQUES DANS DES ÉCHANTILLONS BIOLOGIQUES DE FAIBLE VOLUME
Resumen: front page image
(EN)Method for the microbiological determination of traces of antibiotics in low volume biological samples, which comprises determining the minimum inhibitory concentration (MIC) of an antibiotic selected from among minocycline, ciprofloxacin, kanamycin, tetracycline and oxacillin against Staphylococcus aureus. The bacteria are grown in Mueller-Hinton broth (MHB) overnight, said cultures subsequently being diluted to 0.5 McFarland standard (1.5 x 108 cells/mL). Said antibiotics are subsequently added to 96-well plates in a final volume of 200 µL and incubated at 37°C for 18 hours. Absorbency is determined and the results are expressed as the percentage of inhibition relative to the control containing the biological sample, in turn selected from urine, blood, synovial fluid, aqueous humour of the eye or cerebro spinal fluid (CSF), and the bacterial culture. The curve representing the percentage of inhibition of bacterial growth versus concentration of antibiotic is obtained, and is adjusted by the "Four Parameter Logistic Curve (4PL)", yielding the concentration values ​​of the antibiotics in the biological sample. The method determines amounts of antibiotic in the biological sample even at ng/mL level.
(ES)Método para la determinación microbiológica de trazas de antibióticos en muestras biológicas de bajo volumen que comprende determinar la concentración inhibitoria mínima (CIM) de un antibiótico seleccionado de minociclina, ciprofloxacina, kanamicina, tetraciclina y oxacilina contra Staphylococcus aureus. Se cultiva la bacteria, en caldo de Mueller-Hinton (MHB) durante toda la noche, para luego diluir dichos cultivos a 0,5 Mc Farland (1,5 x108 células/mL). Se agrega posteriormente, dichos antibióticos a placas de 96 pocillos en un volumen final de 200 μL y se incubaron a 37 °C durante 18 horas. Se determinó la absorbencia y se expresaron los resultados como porcentaje de inhibición en relación al control que contenía la muestra biológica a su vez seleccionada de orina, sangre, líquido sinovial, humor acuoso del ojo o líquido céfalo raquídeo (LCR), y el cultivo bacteriano. Se obtiene la curva que representa el porcentaje de inhibición del crecimiento bacteriano versus la concentración de antibiótico, y se ajusta mediante la curva "Four Parameter Logistic Curve (4PL)" obteniéndose los valores de la concentración de los antibióticos de la muestra biológica. El método permite determinar cantidades de antibiótico en la muestra biológica incluso en el nivel de ng/mL
(FR)La présente invention concerne un procédé de détermination microbiologique de traces d'antibiotiques dans des échantillons biologiques de faible volume qui consiste à déterminer la concentration minimale inhibitrice (CMI) d'un antibiotique sélectionné parmi la minocycline, la ciprofloxacine, la kanamycine, la tétracycline et l'oxacilline contre le Staphylococcus aureus. On cultive la bactérie, dans un bouillon de Mueller-Hinton (MHB) pendant tout la nuit puis on dilue les cultures à 0,5 sur l'échelle de Mc Farland (1,5 x108 cellules/mL). On ajoute ensuite lesdits antibiotiques sur des plaques de 96 puits pour un volume total de 200 μL et on les laisse incuber à 37 °C pendant 18 heures. On détermine la capacité d'absorption et on exprime les résultats sous forme de pourcentage d'inhibition par rapport à un témoin qui contenait l'échantillon biologique lui-même sélectionné parmi l'urine, le sang, le liquide synovial, l'humeur aqueuse de l'oeil ou le liquide céphalo-rachidien (LCR) et la culture bactérienne. On obtient la courbe qui représente le pourcentage d'inhibition de la croissance bactérienne par rapport à la concentration d'antibiotique et on ajuste au moyen de la "Four Parameter Logistic Curve (4PL)" appelée courbe logistique à quatre paramètres, en produisant les valeurs de la concentration des antibiotiques de l'échantillon biologique. Ce procédé permet de déterminer les quantités d'antibiotiques dans l'échantillon biologique y compris a niveau des ng/mL.
Estados designados: AE, AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BH, BN, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CL, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DK, DM, DO, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, GT, HN, HR, HU, ID, IL, IN, IR, IS, JP, KE, KG, KN, KP, KR, KZ, LA, LC, LK, LR, LS, LU, LY, MA, MD, ME, MG, MK, MN, MW, MX, MY, MZ, NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PA, PE, PG, PH, PL, PT, QA, RO, RS, RU, RW, SA, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, ST, SV, SY, TH, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, ZA, ZM, ZW.
Organización Regional Africana de la Propiedad Intelectual (ORAPI) (BW, GH, GM, KE, LR, LS, MW, MZ, NA, RW, SD, SL, ST, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
Organización Eurasiática de Patentes (OEAP) (AM, AZ, BY, KG, KZ, RU, TJ, TM)
Oficina Europea de Patentes (OEP) (AL, AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HR, HU, IE, IS, IT, LT, LU, LV, MC, MK, MT, NL, NO, PL, PT, RO, RS, SE, SI, SK, SM, TR)
Organización Africana de la Propiedad Intelectual (OAPI) (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, KM, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Idioma de publicación: español (ES)
Idioma de la solicitud: español (ES)