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1. WO2022001149 - ENZYME REACTION SOLUTION FOR CONSTRUCTING SEQUENCING LIBRARY AND USE THEREOF

Publication Number WO/2022/001149
Publication Date 06.01.2022
International Application No. PCT/CN2021/078865
International Filing Date 03.03.2021
IPC
C12N 9/16 2006.1
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
9Enzymes, e.g. ligases (6.); Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating, or purifying enzymes
14Hydrolases (3.)
16acting on ester bonds (3.1)
C12N 9/12 2006.1
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
9Enzymes, e.g. ligases (6.); Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating, or purifying enzymes
10Transferases (2.)
12transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
C40B 50/06 2006.1
CCHEMISTRY; METALLURGY
40COMBINATORIAL TECHNOLOGY
BCOMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES, IN SILICO LIBRARIES
50Methods of creating libraries, e.g. combinatorial synthesis
06Biochemical methods, e.g. using enzymes or whole viable microorganisms
Applicants
  • 江苏康科斯医疗科技有限公司 JIANGSU CONQUERS MEDICAL TECHNOLOGY CO., LTD. [CN]/[CN]
  • 南京诺唯赞生物科技股份有限公司 NANJING VAZYME BIOTECH CO., LTD. [CN]/[CN]
Inventors
  • 聂俊伟 NIE, Junwei
  • 瞿志鹏 QU, Zhipeng
  • 张力军 ZHANG, Lijun
  • 韩锦雄 HAN, Jinxiong
  • 江明扬 JIANG, Mingyang
  • 邱翠 QIU, Cui
Agents
  • 北京品源专利代理有限公司 BEYOND ATTORNEYS AT LAW
Priority Data
202010599034.228.06.2020CN
Publication Language Chinese (zh)
Filing Language Chinese (ZH)
Designated States
Title
(EN) ENZYME REACTION SOLUTION FOR CONSTRUCTING SEQUENCING LIBRARY AND USE THEREOF
(FR) SOLUTION DE RÉACTION ENZYMATIQUE POUR CONSTRUIRE UNE BIBLIOTHÈQUE DE SÉQUENÇAGE ET UTILISATION ASSOCIÉE
(ZH) 一种用于构建测序文库的酶反应液及其应用
Abstract
(EN) Provided in the present invention is an enzyme reaction solution for constructing a sequencing library and the use thereof. The enzyme reaction solution comprises an enzyme composition and a reaction buffer, wherein the enzyme composition comprises a nucleic acid endonuclease, a DNA polymerase, and a polynucleotide kinase; and the reaction buffer comprises a metal salt, a substrate, and a buffer medium aqueous solution. The present application aims to optimize the formulation of an enzyme reaction solution. The cleavage, terminal repair and addition of A to the terminal of a nucleic acid sample is achieved by a one-step reaction. In a suitable buffer system, the enzyme digestion reaction rate and the terminal repair reaction rate reach a balance. In the case where the initial amount of the sample is 100 pg to 1 μg and the processing time is the same, a sequencing library with a consistent length distribution is obtained.
(FR) La présente invention concerne une solution de réaction enzymatique pour construire une bibliothèque de séquençage et une utilisation associée. La solution de réaction enzymatique comprend une composition d'enzyme et un tampon de réaction, la composition d'enzyme comprenant une endonucléase d'acide nucléique, une ADN polymérase et une kinase de polynucléotide ; et le tampon de réaction comprend un sel métallique, un substrat et une solution aqueuse de milieu tampon. La présente demande vise à optimiser la formulation d'une solution de réaction enzymatique. Le clivage, la réparation de terminaison et l'ajout de A à la terminaison d'un échantillon d'acide nucléique sont obtenus au moyen d'une réaction en une étape. Dans un système tampon approprié, le taux de réaction de digestion enzymatique et le taux de réaction de réparation de terminaison atteignent un équilibre. Dans le cas où la quantité initiale de l'échantillon est de 100 pg à 1 μg et le temps de traitement est le même, une bibliothèque de séquençage ayant une distribution de longueur constante est obtenue.
(ZH) 本申请提供了一种用于构建测序文库的酶反应液及其应用。所述酶反应液包括酶组合物和反应缓冲液;其中酶组合物包括核酸内切酶、DNA聚合酶和多聚核苷酸激酶;其中反应缓冲液包括金属盐、底物和缓冲介质水溶液。本申请通过优化酶反应液的配方,通过一步反应实现对核酸样本的切割、末端修复和加A尾处理,在适宜的缓冲体系中,酶切反应速率和末端修复反应速率达到平衡,在样本起始量为100pg-1μg、处理时间相同的情况下,获得了长度分布一致的测序文库。
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