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1. WO2020200414 - PROTEIN PRODUCTION IN MUT-METHYLOTROPHIC YEAST

Publication Number WO/2020/200414
Publication Date 08.10.2020
International Application No. PCT/EP2019/058190
International Filing Date 01.04.2019
IPC
C12N 15/81 2006.01
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
15Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
09Recombinant DNA-technology
63Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
79Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
80for fungi
81for yeasts
CPC
C12N 15/815
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
15Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
09Recombinant DNA-technology
63Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
79Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
80for fungi
81for yeasts
815for yeasts other than Saccharomyces
Applicants
  • LONZA LTD [CH]/[CH]
Inventors
  • ZAVEC, Domen
  • GASSER, Brigitte
  • MATTANOVICH, Diethard
Agents
  • REDL, Gerda
  • LOIDL, Manuela
  • GASSNER, Birgitta
Priority Data
Publication Language English (EN)
Filing Language English (EN)
Designated States
Title
(EN) PROTEIN PRODUCTION IN MUT-METHYLOTROPHIC YEAST
(FR) PRODUCTION DE PROTÉINES DANS DE LA LEVURE MUT-MÉTHYLOTROPHE
Abstract
(EN)
A method of producing a protein of interest (POI) comprising culturing a recombinant methanol utilization pathway deficient methylotrophic yeast (Mut-) host cell using methanol as a carbon source to produce the POI, which Mut- host cell comprises a heterologous gene of interest expression cassette (GOIEC) comprising an expression cassette promoter (ECP) operably linked to a gene of interest (GOI) encoding a protein of interest (POI), wherein the Mut- host cell is engineered by one or more genetic modifications to reduce expression of a first and a second endogenous gene compared to the host cell prior to said one or more genetic modifications, wherein a) the first endogenous gene encodes alcohol oxidase 1 (AOX1) comprising the amino acid sequence identified as SEQ ID NO:1 or a homologue thereof, and b) the second endogenous gene encodes alcohol oxidase 2 (AOX2) comprising the amino acid sequence identified as SEQ ID NO:3 or a homologue thereof.
(FR)
L'invention concerne un procédé de production d'une protéine d'intérêt (POI) comprenant la culture d'une cellule hôte de levure méthylotrophe à voie d'utilisation de méthanol déficiente recombimée (Mut-) à l'aide de méthanol en tant que source de carbone pour produire la POI, ladite cellule Mut-hôte comprenant un gène hétérologue d'une cassette d'expression d'intérêt (GOIEC) qui comprend un promoteur de cassette d'expression (ECP) fonctionnellement lié à un gène d'intérêt (GOI) codant pour une protéine d'intérêt (POI), la cellule Mut-hôte étant modifiée par une ou plusieurs modifications génétiques pour réduire l'expression d'un premier et d'un second gène endogène par rapport à la cellule hôte avant ladite ou lesdites modifications génétiques, dans ledit procédé a) le premier gène endogène codant pour l'alcool oxydase 1 (AOX1) comprenant la séquence d'acides aminés identifiée par la SEQ ID NO : 1 ou un de ses homologues, et b) le second gène endogène codant pour l'alcool oxydase 2 (AOX2) comprenant la séquence d'acides aminés identifiée par la SEQ ID NO : 3 ou un de ses homologues.
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