(EN) The invention is directed to methods for synthesizing a plurality of oligonucleotides in the same reaction vessel, and in some embodiments, using the synthesized oligonucleotides in an oligonucleotide-based assay in such reaction vessel. In some embodiments, methods of the invention are implemented by steps of (a) providing a plurality of different initiators attached to one or more supports, each different initiator having a terminal nucleotide with a different 3'-O-blocking group; (b) for each different initiator, synthesizing a polynucleotide by repeated cycles of template-free enzymatic additions of 3'-O-blocked nucleoside triphosphates, wherein the blocking group of the 3'-O-blocked nucleoside triphosphate is removable under deblocking conditions orthogonal to the deblocking conditions for removing blocking groups of the other initiators; and (c) releasing the oligonucleotides from the polynucleotides and the one or more solid supports.
(FR) L'invention concerne des procédés de synthèse d'une pluralité d'oligonucléotides dans la même cuve de réaction, et dans certains modes de réalisation, l'utilisation des oligonucléotides synthétisés dans un dosage à base d'oligonucléotides dans un tel récipient de réaction. Dans certains modes de réalisation, les procédés de l'invention sont mis en oeuvre par les étapes consistant à (a) fournir une pluralité d'initiateurs différents attachés à un ou plusieurs Supports, chaque initiateur différent ayant un nucléotide terminal avec un groupe 3 '-O-bloquant différent; (b) pour chaque initiateur différent, synthétiser un polynucléotide par cycles répétés d'additions enzymatiques sans matrice de nucléosides triphosphates 3 '-O-bloqués, le groupe de blocage du triphosphate de nucléoside 3 '-O-bloqué pouvant être retiré dans des conditions de déblocage orthogonales aux conditions de déblocage pour éliminer les groupes de blocage des autres initiateurs; et (c) libérer les oligonucléotides des polynucléotides et l'ou les supports solides.