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1. WO2020092748 - SYSTEM FOR PROTEIN INACTIVATION AND RECOMBINANT PHAGES FOR TARGETED BACTERIAL KILLING, INFECTION, BIODETECTION, AND AS A MEANS OF PROTEIN EXTRACTION

Publication Number WO/2020/092748
Publication Date 07.05.2020
International Application No. PCT/US2019/059133
International Filing Date 31.10.2019
IPC
C12N 15/70 2006.01
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
15Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
09Recombinant DNA-technology
63Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
70Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
C12N 15/73 2006.01
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
15Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
09Recombinant DNA-technology
63Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
70Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
73Expression systems using phage lambda regulatory sequences
C12N 15/74 2006.01
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
15Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
09Recombinant DNA-technology
63Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
74Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
Applicants
  • THE TRUSTEES OF PRINCETON UNIVERSITY
Inventors
  • SILPE, Justin, E.
  • BASSLER, Bonnie, L.
Agents
  • PATTILLO, Alan, C.
Priority Data
62/754,14301.11.2018US
Publication Language English (EN)
Filing Language English (EN)
Designated States
Title
(EN) SYSTEM FOR PROTEIN INACTIVATION AND RECOMBINANT PHAGES FOR TARGETED BACTERIAL KILLING, INFECTION, BIODETECTION, AND AS A MEANS OF PROTEIN EXTRACTION
(FR) SYSTÈME D'INACTIVATION DE PROTÉINES ET DE PHAGES RECOMBINANTS POUR LA DESTRUCTION BACTÉRIENNE CIBLÉE, L'INFECTION, LA BIODÉTECTION ET COMME MOYEN D'EXTRACTION DE PROTÉINES
Abstract
(EN)
Disclosed are recombinant phages that infect and kill bacterial hosts in response to user-defined inputs. The components that encode the user-defined inputs can be combined, such that multiple inputs are maintained on a single recombinant phage, enabling precise control over the targeting strategy. The phages can be engineered to kill a specific bacterial species or multiple species simultaneously. Recombinant phages can also be engineered to harbor fluorescent and bioluminescent reporter genes that enable them to be used for tracking, detection, and in biosensing applications. Recombinant phages can also be used to lyse bacterial cells that produce recombinant proteins, as a rapid method to enable extraction and high-level purification of potentially valuable and/or industrially important proteins. Also disclosed is a system that can also be used to control the activity of a protein of interest, by taking advantage of an interaction between Qtip and a phage repressor protein; a phage repressor protein can be fused to a protein-of-interest, and by controlling the expression of qtip, the phage repressor protein fused to a protein-of-interest will be inactivated when Qtip is expressed and interacts with the phage repressor protein.
(FR)
L'invention porte sur des phages recombinants qui infectent et tuent des hôtes bactériens en réponse à des entrées définies par l'utilisateur. Les composants qui codent pour les entrées définies par l'utilisateur peuvent être combinés, de telle sorte que de multiples entrées sont maintenues sur un seul phage recombinant, ce qui permet une commande précise sur la stratégie de ciblage. Les phages peuvent être modifiés pour tuer simultanément une espèce bactérienne spécifique ou de multiples espèces simultanément. Les phages recombinants peuvent également être modifiés pour abriter des gènes rapporteurs fluorescents et bioluminescents leur permettant d'être utilisés pour le suivi, la détection et dans des applications de biodétection. Des phages recombinants peuvent également être utilisés pour lyser des cellules bactériennes qui produisent des protéines recombinantes, en tant que procédé rapide pour permettre l'extraction et la purification à haut degré de protéines potentiellement valorisables et/ou industriellement importantes. L'invention concerne en outre un système qui peut également être utilisé pour contrôler l'activité d'une protéine d'intérêt, en tirant parti d'une interaction entre Qtip et une protéine répresseur de phage; une protéine répresseur de phage peut être fusionnée à une protéine d'intérêt, et en régulant l'expression de Qtip, la protéine répresseur de phage fusionnée à une protéine d'intérêt sera inactivée lorsque Qtip est exprimée et interagit avec la protéine répresseur de phage.
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