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1. WO2020088207 - METHOD FOR SEPARATING AND PURIFYING LOW-IRON SATURATION RECOMBINANT HUMAN LACTOFERRIN FROM GENETICALLY ENGINEERED RICE SEEDS

Publication Number WO/2020/088207
Publication Date 07.05.2020
International Application No. PCT/CN2019/110384
International Filing Date 10.10.2019
IPC
C07K 1/18 2006.01
CCHEMISTRY; METALLURGY
07ORGANIC CHEMISTRY
KPEPTIDES
1General processes for the preparation of peptides
14Extraction; Separation; Purification
16by chromatography
18Ion-exchange chromatography
C07K 14/79 2006.01
CCHEMISTRY; METALLURGY
07ORGANIC CHEMISTRY
KPEPTIDES
14Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
435from animals; from humans
79Transferrins, e.g. lactoferrins, ovotransferrins
Applicants
  • 武汉禾元生物科技股份有限公司 WUHAN HEALTHGEN BIOTECHNOLOGY CORP [CN]/[CN]
Inventors
  • 杨代常 YANG, Daichang
  • 董亮亮 DONG, Liangliang
Agents
  • 北京律诚同业知识产权代理有限公司 LECOME INTELLECTUAL PROPERTY AGENT LTD.
Priority Data
201811299207.802.11.2018CN
Publication Language Chinese (ZH)
Filing Language Chinese (ZH)
Designated States
Title
(EN) METHOD FOR SEPARATING AND PURIFYING LOW-IRON SATURATION RECOMBINANT HUMAN LACTOFERRIN FROM GENETICALLY ENGINEERED RICE SEEDS
(FR) PROCÉDÉ DE SÉPARATION ET DE PURIFICATION DE LACTOFERRINE HUMAINE DE RECOMBINAISON À FAIBLE SATURATION EN FER À PARTIR DE GRAINES DE RIZ GÉNÉTIQUEMENT MODIFIÉES
(ZH) 一种从基因工程水稻种子中分离纯化低铁饱和度的重组人乳铁蛋白的方法
Abstract
(EN)
Provided by the present invention is a method for separating and purifying low-iron saturation recombinant human lactoferrin from genetically engineered rice seeds: first, extracting a crude extract containing recombinant lactoferrin from a recombinant human lactoferrin genetically engineered rice seed, wherein an extraction buffer solution contains 50-100 mM citric acid-trisodium citrate, 100-200 mM NaCl, 1-10 mM EDTA-2Na, and the pH thereof is 3.8-5.0; next, performing cation chromatography on the obtained crude extract containing the recombinant human lactoferrin to obtain a low-iron saturation lactoferrin product having a purity>95%. Further provided by the present invention is a method for extracting low-iron saturation recombinant human lactoferrin from genetically engineered rice seeds, wherein the used extraction solution contains citric acid-trisodium citrate and EDTA-2Na, which may significantly reduce the iron saturation of the recombinant human lactoferrin.
(FR)
La présente invention concerne un procédé de séparation et de purification de lactoferrine humaine de recombinaison à faible saturation en fer à partir de graines de riz génétiquement modifiées, le procédé consiste à : extraire d'abord un extrait brut contenant une lactoferrine de recombinaison à partir d'une lactoferrine humaine de recombinaison de graines de riz génétiquement modifiée, une solution tampon d'extraction contenant de 50 à 100 mM d'acide citrique-citrate trisodique, de 100 à 200 mM de NaCl, de 1 à 10 mM d'EDTA-2Na, le pH de celle-ci étant de 3,8 à 5,0 ; réaliser ensuite une chromatographie par cations sur l'extrait brut obtenu contenant la lactoferrine humaine de recombinaison pour obtenir un produit de lactoferrine à faible saturation en fer ayant une pureté > 95 %. La présente invention concerne en outre un procédé d'extraction de lactoferrine humaine de recombinaison à faible saturation en fer à partir de graines de riz génétiquement modifiées, la solution d'extraction utilisée contenant de l'acide citrique-citrate trisodique et de l'EDTA-2Na, qui peut réduire de manière significative la saturation en fer de la lactoferrine humaine de recombinaison.
(ZH)
本发明提供一种从基因工程水稻种子中分离纯化低铁饱和度的重组人乳铁蛋白的方法。首先从重组人乳铁蛋白基因工程水稻种子中提取含有重组乳铁蛋白的粗提取物,提取缓冲液包含50~100mM柠檬酸-柠檬酸三钠、100~200mMNaCl,1~10mM EDTA-2Na,pH为3.8~5.0;再将所得含有重组人乳铁蛋白的粗提取物经阳离子层析,获得纯度>95%的低铁饱和度乳铁蛋白产品。本发明也提供一种从基因工程水稻中种子中提取低铁饱和度的重组人乳铁蛋白的方法,使用的提取液含有柠檬酸-柠檬酸三钠和EDTA-2Na,可显著降低提取重组人乳铁蛋白的铁饱和度。
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