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1. WO2020007325 - CAS9 VARIANTS AND APPLICATION THEREOF

Publication Number WO/2020/007325
Publication Date 09.01.2020
International Application No. PCT/CN2019/094585
International Filing Date 03.07.2019
IPC
C CHEMISTRY; METALLURGY
12
BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
N
MICRO-ORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICRO-ORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
15
Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
C CHEMISTRY; METALLURGY
12
BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
N
MICRO-ORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICRO-ORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
9
Enzymes, e.g. ligases (6.); Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating, or purifying enzymes
14
Hydrolases (3.)
C CHEMISTRY; METALLURGY
12
BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
N
MICRO-ORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICRO-ORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
15
Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
09
Recombinant DNA-technology
63
Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
C CHEMISTRY; METALLURGY
07
ORGANIC CHEMISTRY
K
PEPTIDES
14
Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
195
from bacteria
32
from Bacillus (G)
C12N 15/00 (2006.01)
C12N 9/14 (2006.01)
C12N 15/63 (2006.01)
C07K 14/32 (2006.01)
CPC
C07K 14/32
C12N 15/00
C12N 15/102
C12N 15/63
C12N 15/85
C12N 2310/20
Applicants
  • TSINGHUA UNIVERSITY [CN/CN]; Qinghuayuan, Haidian District Beijing 100084, CN
Inventors
  • XIE, Zhen; CN
  • MA, Dacheng; CN
  • ZHANG, Zhaoyu; CN
  • XU, Zhimeng; CN
Agents
  • TSINGYIHUA INTELLECTUAL PROPERTY LLC; Room 301 Trade Building, Zhaolanyuan, Tsinghua University, Qinghuayuan, Haidian District Beijing 100084, CN
Priority Data
201810731984.905.07.2018CN
Publication Language English (EN)
Filing Language English (EN)
Designated States
Title
(EN) CAS9 VARIANTS AND APPLICATION THEREOF
(FR) VARIANTS DE CAS9 ET LEURS UTILISATIONS
Abstract
(EN)
Provided is a Cas9 variant, comprising: a first backbone region, having at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%or 100%sequence identity to the first backbone region of a wild-type cas9; a protospacer adjacent motif (PAM) interaction region, being a 13-amino acid sequence deriving from the PAM interaction region of an ortholog of the wild-type Cas9, and having at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%or 100%sequence identity to the PAM interaction region of the ortholog of the wild-type Cas9; and a second backbone region, having at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%or 100%sequence identity to the second backbone region of the wild-type cas9; wherein an N-terminus of the PAM interaction region is connected to a C-terminus of the first backbone region, and a C-terminus of the PAM interaction region is connected to an N-terminus of the second backbone region, and wherein the Cas9 variant has recognition capability at a PAM sequence selected from the group consisting of NNVRRN, NNVACT, NNVATG, NNVATT, NNVGCT, NNVGTG and NNVGTT PAM sequences, wherein N is adenine (A), thymine (T), cytosine (C) or guanine (G); R is adenine (A) or guanine (G); and V is adenine (A), cytosine (C) or guanine (G).
(FR)
L'invention concerne un variant de Cas9, comprenant : une première région de squelette, ayant au moins 90 %, au moins 95 %, au moins 96 %, au moins 97 %, au moins 98 %, au moins 99 % ou 100 % d'identité de séquence par rapport à la première région de squelette d'une cas9 de type sauvage; une région d'interaction de motif de reconnaissance du proto-espaceur (PAM), à savoir une séquence de 13 acides aminés issue de la région d'interaction de PAM d'un orthologue de la cas9 de type sauvage, et ayant au moins 70 %, au moins 75 %, au moins 80 %, au moins 85 %, au moins 90 %, au moins 95 %, au moins 96 %, au moins 97 %, au moins 98 %, au moins 99 % ou 100 % d'identité de séquence avec la région d'interaction de PAM de l'orthologue de la cas9 de type sauvage; et une seconde région de squelette, ayant au moins 90 %, au moins 95 %, au moins 96 %, au moins 97 %, au moins 98 %, au moins 99 % ou 100 % d'identité de séquence avec la seconde région de squelette de la cas9 de type sauvage; une extrémité N-terminale de la région d'interaction de PAM étant reliée à une extrémité C-terminale de la première région de squelette, et une extrémité C-Terminale de la région d'interaction de PAM étant reliée à une extrémité N-terminale de la seconde région de squelette, et dans lequel le variant de cas9 ayant une capacité de reconnaissance au niveau d'une séquence PAM choisie dans le groupe consistant en les séquences PAM NNVRRN, NNVACT, NNVATG, NNVGCT, NNVGTG et NNVGTT, dans lesquelles N est adénine (A), thymine (T), cytosine (C) ou guanine (G); R est adénine (A) ou guanine (G); et V est adénine (A), cytosine (C) ou guanine (G).
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