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1. WO2020007042 - RAPID AMPLIFICATION METHOD FOR NUCLEIC ACID OF HEPATITIS B VIRUS

Publication Number WO/2020/007042
Publication Date 09.01.2020
International Application No. PCT/CN2019/074284
International Filing Date 31.01.2019
IPC
C CHEMISTRY; METALLURGY
12
BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
Q
MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES OR MICRO-ORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
1
Measuring or testing processes involving enzymes or micro-organisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
70
involving virus or bacteriophage
[IPC code unknown for C12Q 1/686]
C CHEMISTRY; METALLURGY
12
BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
R
INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C-C12Q75
1
Micro-organisms
92
Viruses
93
Animal viruses
C12Q 1/70 (2006.01)
C12Q 1/686 (2018.01)
C12R 1/93 (2006.01)
CPC
C12Q 1/686
C12Q 1/706
Applicants
  • 圣湘生物科技股份有限公司 SANSURE BIOTECH INC. [CN/CN]; 中国湖南省长沙市 高新技术产业开发区麓松路680号 No. 680 Lusong Road, Hi-Tech Development Zone Changsha, Hunan 410205, CN
Inventors
  • 戴立忠 DAI, Lizhong; CN
  • 范旭 FAN, Xu; CN
Agents
  • 广州华进联合专利商标代理有限公司 ADVANCE CHINA IP LAW OFFICE; 中国广东省广州市 天河区珠江东路6号4501房(部位:自编01-03和08-12单元)(仅限办公用途) Room 4501, No. 6 Zhujiang East Road, Tianhe District Guangzhou, Guangdong 510623, CN
Priority Data
201810728131.X05.07.2018CN
Publication Language Chinese (ZH)
Filing Language Chinese (ZH)
Designated States
Title
(EN) RAPID AMPLIFICATION METHOD FOR NUCLEIC ACID OF HEPATITIS B VIRUS
(FR) PROCÉDÉ D'AMPLIFICATION RAPIDE D'ACIDE NUCLÉIQUE DU VIRUS DE L'HÉPATITE B
(ZH) 乙肝病毒核酸的快速扩增方法
Abstract
(EN)
Provided is a rapid amplification method for a nucleic acid of hepatitis B virus, comprising the following steps: mixing a sample containing hepatitis B virus with a nucleic acid releasing agent, and adding a PCR premix to obtain a reaction solution, the nucleic acid releasing agent including Surfactin, potassium chloride, sodium dodecyl sulfonate and ethanol, the PCR premix comprising deoxyribonucleoside triphosphate, an upstream primer as shown in the sequence SEQ No. 1, a downstream primer as shown in the sequence SEQ No. 2, a DNA polymerase and an amplification buffer; placing the reaction solution in a PCR reaction tube so that the reaction solution is in a form of a thin film with a thickness of 0.1 mm or less; placing the PCR reaction tube in a PCR amplifier for PCR amplification under the following reaction conditions: pre-denaturation at 90 to 100 °C for 10 s to 600 s, denaturation at 90 to 100 °C for 0 to 1 s, and annealing and extending at 50-65 °C for 0 to 1 s. Said method significantly shortens the period required for each cycle while ensuring accuracy and effectiveness of amplification, thereby achieving the purpose of rapidly and simply amplification of a nucleic acid of hepatitis B virus.
(FR)
L'invention concerne un procédé d'amplification rapide d'un acide nucléique du virus de l'hépatite B, comprenant les étapes suivantes consistant à : mélanger un échantillon contenant le virus de l'hépatite B avec un agent de libération d'acide nucléique, et ajouter un prémélange PCR pour obtenir une solution de réaction, l'agent de libération d'acide nucléique comprenant la surfactine, le chlorure de potassium, le dodécylsulfonate de sodium et l'éthanol, le prémélange PCR comprenant le désoxyribonucléoside triphosphate, une amorce amont telle que représentée dans la séquence SEQ No. 1, une amorce aval telle que représentée dans la séquence SEQ No. 2, une ADN polymérase et un tampon d'amplification; placer la solution de réaction dans un tube de réaction PCR de sorte que la solution de réaction se présente sous la forme d'un film mince d'une épaisseur inférieure ou égale à 0,1 mm; placer le tube de réaction PCR dans un amplificateur PCR pour une amplification PCR dans les conditions de réaction suivantes : pré-dénaturation à 90 à 100 °C de 10 s à 600 s, dénaturation à 90 à 100 °C de 0 à 1 s, et recuit s'étendant à 50-65 °C de 0 à 1 s. Ledit procédé raccourcit significativement la période requise pour chaque cycle tout en assurant une précision et une efficacité d'amplification, ce qui permet d'obtenir rapidement et simplement l'amplification d'un acide nucléique du virus de l'hépatite B.
(ZH)
提供了一种乙肝病毒核酸的快速扩增方法,包括以下步骤:将含有乙肝病毒的样品与核酸释放剂混合后加入PCR预混液得到反应液,所述核酸释放剂包括莎梵婷、氯化钾、十二烷基磺酸钠和乙醇,所述PCR预混液包括脱氧核糖核苷三磷酸、如SEQ No.1序列所示的上游引物、如SEQ No.2序列所示的下游引物、DNA聚合酶和扩增缓冲液;将所述反应液置于PCR反应管中使所述反应液呈厚度小于等于0.1mm的薄膜状;将所述PCR反应管置于PCR扩增仪中按照以下反应条件进行PCR扩增:90~100℃预变性10s~600s,90~100℃变性0~1s,50~65℃退火延伸0~1s。所述方法在确保扩增的准确性和有效性的前提下,每一个循环所需要的时间都显著地缩短了,实现了快速简单地扩增乙肝病毒核酸的目的。
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