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1. (WO2019064483) METHOD FOR DETECTING SINGLE BASE SUBSTITUTION USING ION EXCHANGE CHROMATOGRAPHY
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Pub. No.: WO/2019/064483 International Application No.: PCT/JP2017/035441
Publication Date: 04.04.2019 International Filing Date: 29.09.2017
IPC:
C12N 15/09 (2006.01) ,C12Q 1/68 (2006.01)
C CHEMISTRY; METALLURGY
12
BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
N
MICRO-ORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICRO-ORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
15
Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
09
Recombinant DNA-technology
C CHEMISTRY; METALLURGY
12
BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
Q
MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES OR MICRO-ORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
1
Measuring or testing processes involving enzymes or micro-organisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
68
involving nucleic acids
Applicants:
積水メディカル株式会社 SEKISUI MEDICAL CO., LTD. [JP/JP]; 東京都中央区日本橋二丁目1番3号 1-3, Nihonbashi 2-chome, Chuo-ku, Tokyo 1030027, JP
Inventors:
海老沼 宏幸 EBINUMA Hiroyuki; JP
内田 桂 UCHIDA Katsura; JP
塚本 百合子 TSUKAMOTO Yuriko; JP
Agent:
特許業務法人 もえぎ特許事務所 MOEGI PATENT OFFICE; 東京都新宿区荒木町20番地21インテック88ビル4階 4F, Intec 88 Bldg. 20-21 Araki-cho, Shinjuku-ku, Tokyo 1600007, JP
Priority Data:
Title (EN) METHOD FOR DETECTING SINGLE BASE SUBSTITUTION USING ION EXCHANGE CHROMATOGRAPHY
(FR) PROCÉDÉ DE DÉTECTION D’UNE SUBSTITUTION DE BASE UNIQUE À L'AIDE DE LA CHROMATOGRAPHIE PAR ÉCHANGE D’IONS
(JA) イオン交換クロマトグラフィーを用いた一塩基置換検出方法
Abstract:
(EN) [Problem] To provide a method for precisely and quantitatively separating and detecting multiple types of genetic mutations, in particular, a single base substitution or a point mutation.[Solution] According to the present invention, in an allele-specific primer (ASP) for interpreting a genetic mutation, in particular, a single base substitution or a point mutation, a non-nucleotide component is added to the ASP and 5' terminus of at least one of primers pairing the ASP and is amplified by PCR, and amplified products are separated through an ion exchange chromatography, whereby the amplified products can be separated and detected even if the amplified products have the same length.
(FR) Le problème décrit par la présente invention concerne un procédé pour séparer et détecter, avec précision et quantitativement, de multiples types de mutations génétiques, en particulier une substitution de base unique ou une mutation ponctuelle. Selon la solution de la présente invention, dans une amorce spécifique à un allèle (ASP) pour interpréter une mutation génétique, en particulier une substitution de base unique ou une mutation ponctuelle, un constituant non nucléotidique est ajouté à l'ASP et à l'extrémité 5' d'au moins l'une des amorces s'appariant à l'ASP et est amplifié par PCR et des produits amplifiés sont séparés par une chromatographie par échange d'ions, les produits amplifiés pouvant être séparés et détectés même si les produits amplifiés présentent la même longueur.
(JA) 【課題】本発明は、多種類の遺伝子変異、特に一塩基置換若しくは点変異を、正確かつ定量的に分離及び検出する方法を提供することを目的とする。 【解決手段】遺伝子変異、特に一塩基置換若しくは点変異を解析するためのアレル特異的プライマー(ASP)において、そのASP及びそれと対をなすプライマーの少なくとも1つの5'末端に、非ヌクレオチド成分を付加してPCRにより増幅し、その増幅産物をイオン交換クロマトグラフィーにより分離することで、増幅産物の長さが同じでも、分離検出できる。
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Publication Language: Japanese (JA)
Filing Language: Japanese (JA)