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1. (WO2019063071) METHOD FOR ISOLATING RNA WITH HIGH YIELD
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Pub. No.: WO/2019/063071 International Application No.: PCT/EP2017/074490
Publication Date: 04.04.2019 International Filing Date: 27.09.2017
IPC:
C12N 15/10 (2006.01)
C CHEMISTRY; METALLURGY
12
BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
N
MICRO-ORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICRO-ORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
15
Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
09
Recombinant DNA-technology
10
Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
Applicants:
QIAGEN GMBH [DE/DE]; QIAGEN Straße 1 40724 Hilden, DE
Inventors:
SCHLUMPBERGER, Martin; DE
CHRISTOFFEL, Gabriele; DE
Agent:
ROTH, Carla; DE
KÖNIG, Gregor; DE
TILMANN, Max W.; DE
VON RENESSE, Dorothea; DE
SZYNKA, Dirk; DE
SMORODIN, Tobias; DE
HEMSATH, Lars; DE
LÜCKE, Robert; DE
VERHASSELT, Jörn; DE
Priority Data:
Title (EN) METHOD FOR ISOLATING RNA WITH HIGH YIELD
(FR) PROCÉDÉ D'ISOLEMENT D'ARN À HAUT RENDEMENT
Abstract:
(EN) A phenol-free method for isolating a nucleic acid from a sample is provided, said method comprising the following steps: a) adding a precipitation buffer to a sample to prepare an acidic precipitation mixture wherein said precipitation buffer comprises a metal cation precipitant and a buffering agent, has a p H value of 4.0 or less and does not comprise an organic solvent selected from aprotic polar solvents and protic solvents and wherein the acidic precipitation mixture comprises the metal cation precipitant in a concentration of less than 200m M and precipitating proteins; b) separating the precipitate from the supernatant, wherein the supernatant comprises small RNA having a length of less than 200nt and large RNA having a length of at least 1000nt; and c) isolating a nucleic acid from the supernatant. The present method allows to avoid the use of organic solvents during protein precipitation. Also provided is a precipitation buffer.
(FR) L'invention concerne un procédé sans phénol pour isoler un acide nucléique à partir d'un échantillon, ledit procédé comprenant les étapes suivantes, consistant à : a) ajouter un tampon de précipitation à un échantillon pour préparer un mélange de précipitation acide, ledit tampon de précipitation comprenant un précipitant à base d'un cation métallique et un agent tampon, présentant un pH de 4,0 ou moins et ne comprenant pas de solvant organique choisi parmi les solvants polaires aprotiques et les solvants protiques et le mélange de précipitation acide comprenant le précipitant à base d'un cation métallique en une concentration inférieure à 200 mM, et faire précipiter les protéines ; b) séparer le précipité du surnageant, le surnageant comprenant du petit ARN présentant une longueur inférieure à 200 nt et du grand ARN présentant une longueur d'au moins 1000 nt ; et c) isoler un acide nucléique à partir du surnageant. Le présent procédé permet d'éviter l'utilisation de solvants organiques pendant la précipitation de protéines. L'invention concerne également un tampon de précipitation.
Designated States: AE, AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BH, BN, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CL, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DJ, DK, DM, DO, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, GT, HN, HR, HU, ID, IL, IN, IR, IS, JO, JP, KE, KG, KH, KN, KP, KR, KW, KZ, LA, LC, LK, LR, LS, LU, LY, MA, MD, ME, MG, MK, MN, MW, MX, MY, MZ, NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PA, PE, PG, PH, PL, PT, QA, RO, RS, RU, RW, SA, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, ST, SV, SY, TH, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, ZA, ZM, ZW
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European Patent Office (EPO) (AL, AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HR, HU, IE, IS, IT, LT, LU, LV, MC, MK, MT, NL, NO, PL, PT, RO, RS, SE, SI, SK, SM, TR)
African Intellectual Property Organization (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, KM, ML, MR, NE, SN, TD, TG)
Publication Language: English (EN)
Filing Language: English (EN)