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1. (WO2019044820) METHOD FOR PRODUCING DOUBLE-STRANDED DNA FRAGMENTS
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Pub. No.: WO/2019/044820 International Application No.: PCT/JP2018/031745
Publication Date: 07.03.2019 International Filing Date: 28.08.2018
IPC:
C12N 15/09 (2006.01)
C CHEMISTRY; METALLURGY
12
BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
N
MICRO-ORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICRO-ORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
15
Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
09
Recombinant DNA-technology
Applicants:
Spiber株式会社 SPIBER INC. [JP/JP]; 山形県鶴岡市覚岸寺字水上234番地1 234-1, Aza Mizukami, Kakuganji, Tsuruoka-shi, Yamagata 9970052, JP
Inventors:
伊藤 雄介 ITO Yusuke; JP
佐藤 知香子 SATO Chikako; JP
谷内江 望 YACHIE Nozomu; JP
Agent:
長谷川 芳樹 HASEGAWA Yoshiki; JP
清水 義憲 SHIMIZU Yoshinori; JP
Priority Data:
2017-16316828.08.2017JP
Title (EN) METHOD FOR PRODUCING DOUBLE-STRANDED DNA FRAGMENTS
(FR) PROCÉDÉ DE PRODUCTION DE FRAGMENTS D'ADN DOUBLE BRIN
(JA) 2本鎖DNA断片を製造する方法
Abstract:
(EN) The present invention pertains to a method for producing double-stranded DNA fragments having desired nucleic acid sequences by dual asymmetric PCR (DA-PCR). The method comprises: (1) a step in which a reaction mixture is prepared, wherein a plurality of types of oligonucleotides (sense oligonucleotides), each corresponding to a portion of the sense chain of a double-stranded DNA fragment, and a plurality of types of oligonucleotides (antisense oligonucleotides), each corresponding to a portion of the antisense chain of a double-stranded DNA fragment, are prepared, and an equal concentration of each oligonucleotide is mixed with DNA polymerase and dNTP; (2) a step in which PCR is performed using the reaction mixture of step (1); (3) a step in which a primer set capable of amplifying the full length of the double-stranded DNA fragments is added to the reaction mixture of step (2); and (4) a step in which PCR is performed using the reaction mixture of step (3).
(FR) La présente invention concerne un procédé de production de fragments d'ADN double brin présentant des séquences d'acide nucléique souhaitées par PCR asymétrique double (DA-PCR). Le procédé comprend : (1) une étape dans laquelle un mélange réactionnel est préparé, une pluralité de types d'oligonucléotides (oligonucléotides sens), correspondant chacun à une partie de la chaîne sens d'un fragment d'ADN double brin, et une pluralité de types d'oligonucléotides (oligonucléotides antisens), correspondant chacun à une partie de la chaîne antisens d'un fragment d'ADN double brin, sont préparés et une concentration égale de chaque oligonucléotide est mélangée avec de l'ADN polymérase et du dNTP ; (2) une étape dans laquelle une PCR est effectuée à l'aide du mélange réactionnel de l'étape (1) ; (3) une étape dans laquelle un ensemble d'amorces en mesure d'amplifier la longueur totale des fragments d'ADN double brin est ajouté au mélange réactionnel de l'étape (2) ; et (4) une étape dans laquelle une PCR est effectuée à l'aide du mélange réactionnel de l'étape (3).
(JA) 本発明は、所望の塩基配列を有する2本鎖DNA断片を、二重非対称PCR(DA-PCR)により製造する方法に関する。該方法は、(1)それぞれが2本鎖DNA断片のセンス鎖の一部に相当する複数種のオリゴヌクレオチド(センスオリゴヌクレオチド)と、それぞれが2本鎖DNA断片のアンチセンス鎖の一部に相当する複数種のオリゴヌクレオチド(アンチセンスオリゴヌクレオチド)とを用意し、等濃度の各種オリゴヌクレオチドと、DNAポリメラーゼ及びdNTPとを混合し、反応混合液を調製する工程と、(2)工程(1)の反応混合液を用いて、PCRを行う工程と、(3)工程(2)の反応混合液に、2本鎖DNA断片の完全長を増幅できるプライマーセットを添加する工程と、(4)工程(3)の反応混合液を用いて、PCRを行う工程を備える。
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Publication Language: Japanese (JA)
Filing Language: Japanese (JA)