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1. (WO2019007382) INDOLE-FORMAMIDE DERIVATIVE, PREPARATION METHOD THEREFOR AND USE THEREOF IN MEDICINE
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说明书

发明名称 0001   0002   0003   0004   0005   0006   0007   0008   0009   0010   0011   0012   0013   0014   0015   0016   0017   0018   0019   0020   0021   0022   0023   0024   0025   0026   0027   0028   0029   0030   0031   0032   0033   0034   0035   0036   0037   0038   0039   0040   0041   0042   0043   0044   0045   0046   0047   0048   0049   0050   0051   0052   0053   0054   0055   0056   0057   0058   0059   0060   0061   0062   0063   0064   0065   0066   0067   0068   0069   0070   0071   0072   0073   0074   0075   0076   0077   0078   0079   0080   0081   0082   0083   0084   0085   0086   0087   0088   0089   0090   0091   0092   0093   0094   0095   0096   0097   0098   0099   0100   0101   0102   0103   0104   0105   0106   0107   0108   0109   0110   0111   0112   0113   0114   0115   0116   0117   0118   0119   0120   0121   0122   0123   0124   0125   0126   0127   0128   0129   0130   0131   0132   0133   0134   0135   0136   0137   0138   0139   0140   0141   0142   0143   0144   0145   0146   0147   0148   0149   0150   0151   0152   0153   0154   0155   0156   0157   0158   0159   0160   0161   0162   0163   0164   0165   0166   0167   0168   0169   0170   0171   0172   0173   0174   0175   0176   0177   0178   0179   0180   0181   0182   0183   0184   0185   0186   0187   0188   0189   0190   0191   0192   0193   0194   0195   0196   0197   0198   0199   0200   0201   0202   0203   0204   0205   0206   0207   0208   0209   0210   0211   0212   0213   0214   0215   0216   0217   0218   0219   0220   0221   0222   0223   0224   0225   0226   0227   0228   0229   0230   0231   0232   0233   0234   0235   0236   0237   0238   0239   0240   0241   0242   0243   0244   0245   0246   0247   0248   0249   0250   0251   0252   0253   0254   0255   0256   0257   0258   0259   0260   0261   0262   0263   0264   0265   0266   0267   0268   0269   0270   0271   0272   0273   0274   0275   0276   0277   0278   0279   0280   0281   0282   0283   0284   0285   0286   0287   0288   0289   0290   0291   0292   0293   0294   0295   0296   0297   0298   0299   0300   0301   0302   0303   0304   0305   0306   0307   0308   0309   0310   0311   0312   0313   0314   0315   0316   0317   0318   0319   0320   0321   0322   0323   0324   0325   0326   0327   0328   0329   0330   0331   0332   0333   0334   0335   0336   0337   0338   0339   0340   0341   0342   0343   0344   0345   0346   0347   0348   0349   0350   0351   0352   0353   0354   0355   0356   0357   0358   0359   0360   0361   0362   0363   0364   0365   0366   0367   0368   0369   0370   0371   0372   0373   0374   0375   0376   0377   0378   0379   0380   0381   0382   0383   0384   0385   0386   0387   0388   0389   0390   0391   0392   0393   0394   0395   0396   0397   0398   0399   0400   0401   0402   0403   0404   0405   0406   0407   0408   0409   0410   0411   0412   0413   0414   0415   0416   0417   0418   0419   0420   0421   0422   0423   0424   0425   0426   0427   0428   0429   0430   0431   0432   0433   0434   0435   0436   0437   0438   0439   0440   0441   0442   0443   0444   0445   0446   0447   0448   0449   0450   0451   0452   0453   0454   0455   0456   0457   0458   0459   0460   0461   0462   0463   0464   0465   0466   0467   0468   0469   0470   0471   0472   0473   0474   0475   0476   0477   0478   0479   0480   0481   0482   0483   0484   0485   0486   0487   0488   0489   0490   0491   0492   0493   0494   0495   0496   0497   0498   0499   0500   0501   0502   0503   0504   0505   0506   0507   0508   0509   0510   0511   0512   0513   0514   0515   0516   0517   0518   0519   0520   0521   0522   0523   0524   0525   0526   0527   0528   0529   0530   0531   0532   0533   0534   0535   0536   0537   0538   0539   0540  

权利要求书

1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11   12   13   14   15   16  

附图

1  

说明书

发明名称 : 吲哚甲酰胺类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用

技术领域

[0001]
本发明属于医药领域,涉及吲哚甲酰胺类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用。特别地,本发明涉及通式(I)所示的吲哚甲酰胺类衍生物、其制备方法、含有该衍生物的药物组合物,其作为ROR激动剂以及其用于预防和/或治疗肿瘤或癌症的药物中的用途。

背景技术

[0002]
维甲酸相关孤儿核受体(Retinoid-related orphan receptors,ROR)是核受体家族的成员之一,也是一类配体依赖的转录因子,它能够调控多种生理和生化过程,包括生殖发育、新陈代谢、免疫系统调节等(Mech Dev.1998Jan,70(1-2:147-53;EMBO J.1998Jul 15,17(14):3867-77)。ROR家族包括三种类型RORα、RORβ和RORγ(Curr Drug Targets Inflamm Allergy.2004Dec,3(4):395-412),其中RORγ可以在许多组织中表达,包括胸腺、肝脏、肾脏、脂肪和骨骼肌等(Immunity.1998Dec,9(6):797-806.)。
[0003]
RORγ有两种亚型:RORγ1和RORγt(RORγ2),其中RORγ1在许多组织中表达,如:胸腺、肌肉、肾脏和肝脏中表达,而RORγt则只在免疫细胞内表达(Eur J Immunol.1999Dec,29(12):4072-80)。已有文献报道,RORγt能够调节在免疫细胞分化的过程中T细胞的存活,并能激活和促进CD4+、CD8+的细胞分化成辅助T细胞17(Th17)和细胞毒性T细胞(Tc17)(J Immunol.2014Mar 15,192(6):2564-75),其中TH17和Tc17细胞是一类效应细胞,通过分泌白介素17(IL-17)和其他炎症因子(如IL-21)促进炎症反应、增强获得性免疫反应和自身免疫应答。此外,现有研究证明,通过将Th17和Tc17细胞移植到荷瘤小鼠中,可以明显抑制移植瘤的生长(J Immunol.2010Apr 15,184(8):4215-27)。Th17还可以招募细胞毒性CD8+T细胞和自然杀伤细胞进入肿瘤微环境,从而杀死肿瘤细胞,达到抗肿瘤的目的(Blood.2009Aug 6,114(6):1141-9;Clin Cancer Res.2008Jun1,14(11):3254-61)。因此,激活RORγt,有可能成为新的抗肿瘤疗法。
[0004]
目前,已有医药公司开发出RORγt的激动剂,比如Lycera Corp.公司开发的小分子药物LYC-55716。临床前研究表明,其类似物LYC-54143可通过两条不同的通路抑制肿瘤生长,表现出优越的抗癌活性。首先,LYC-54143激活RORγt后可通过传统途径调节Th17和Tc17细胞的分化,促进IL-17等其他细胞因子的表达,提高T细胞活性。另外,激活的RORγt可以调节免疫系统中的多种基因表达,抑制细胞检查受体PD-1的表达,从而降低免疫抑制,提高抗癌活性(Oncoimmunology.2016Nov 4,5(12):e1254854;ACS Chem Biol.2016Apr 15,11(4):1012-8)。虽然 LYC-55716目前已经进入临床II期,但是有关该靶点激动剂的药物仍然非常少,并且无上市药物出现,已公开的专利有如WO2015171558、WO2008152260、WO2007068580、WO2007068579、WO2005056516、WO2005056510、WO2005066116、WO00228810,仍需要继续开发更高效的新的RORγt激动剂,以期为患者提供新的有效的抗癌药物。
[0005]
本发明人设计具有通式(I)所示结构的吲哚甲酰胺类化合物,表现出显著的激动ROR的作用。在研究ROR激动剂的过程中,发明人还发现在本发明所述的通式(I)所示的化合物中,环A邻位基团的变化会改变其调节效果,当环A邻位基团为位阻较小的基团(例如H)时通式(I)所示的化合物为反激动剂,当环A邻位基团为卤代烷基(例如三氟甲基)、烷基(例如乙基)和卤代烷氧基(例如三氟甲氧基)类位阻较大的基团时通式(I)所示的化合物为ROR激动剂。本发明还提供了药效试验,单独施用本发明化合物时表现出良好的抑瘤活性,另外,本发明化合物与PD-1抗体联合用药时表现出协同作用,为提高免疫治疗的疗效开辟了新途径。
[0006]
发明内容
[0007]
本发明的目的在于提供一种通式(I)所示的化合物:
[0008]
[0009]
或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式,或其可药用的盐,
[0010]
其中:
[0011]
为双键或单键;
[0012]
G 1、G 2和G 3相同或不同,且各自独立地选自C、CH、CH 2或N;
[0013]
环A选自芳基、杂芳基、环烷基和杂环基;
[0014]
R 1相同或不同,且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、氰基、氨基、硝基、羟基和羟烷基;
[0015]
R 2为卤代烷基;
[0016]
R 3选自烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、羟烷基、卤素、氰基、氨基、硝基、羟基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基,其中所述的烷基、卤代烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自羟基、卤素、烷基、烷氧基 和氨基中的一个或多个取代基所取代;
[0017]
R 4相同或不同,且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、氰基、氨基、硝基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基;
[0018]
R 5选自氢原子、烷基、卤代烷基、氨基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、NR 10R 11、芳基和杂芳基,其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自羟基、卤素、烷基、氨基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取代;
[0019]
R 6相同或不同,且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、氰基、氨基、硝基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基;
[0020]
R 7选自氢原子、烷基、卤代烷基、环烷基和杂环基,其中所述的烷基任选被选自卤素、硝基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取代;
[0021]
R 8和R 9相同或不同,且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、氰基、氨基、硝基、羟基和羟烷基;
[0022]
R 10和R 11相同或不同,且各自独立地选自氢原子、烷基、卤代烷基、氨基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基;
[0023]
n为0、1、2、3或4;
[0024]
s为0、1、2或3;且
[0025]
t为0、1、2或3。
[0026]
在本发明一个优选的实施方案中,所述的通式(I)所示的化合物为通式(II)所示的化合物:
[0027]
[0028]
其中:
[0029]
R a为氢原子或烷基;
[0030]
环A、G 1~G 3、R 1、R 4~R 7、n、s和t如通式(I)中所定义。
[0031]
在本发明一个优选的实施方案中,所述的通式(I)所示的化合物为通式(II)所示的化合物:
[0032]
[0033]
其中:
[0034]
环A、G 1~G 3、R 1、R 4~R 7、n、s和t如通式(I)中所定义。
[0035]
在本发明优选的实施方案中,所述的通式(I)所示化合物为如下通式(I’)所示的化合物:
[0036]
[0037]
环A、R 1~R 9、n、s和t如通式(I)中所定义。
[0038]
在本发明另一个优选的实施方案中,所述的通式(II)所示化合物为如下通式(II’)所示的化合物:
[0039]
[0040]
环A、R 1、R 4~R 7、n、s和t如通式(II)中所定义。
[0041]
在本发明一个优选的实施方案中,所述的通式(I)所示的化合物,其中环A选自苯基、吡啶基、咪唑基、吡唑基和吗啉基。
[0042]
在本发明一个优选的实施方案中,所述的通式(I)所示的化合物,其中 选自:
[0043]
在本发明一个优选的实施方案中,所述的通式(I)所示的化合物为通式(III)所示的化合物:
[0044]
[0045]
其中:
[0046]
R 1、R 5~R 7、n和t如通式(I)中所定义。
[0047]
在本发明一个优选的实施方案中,所述的通式(I)所示的化合物为通式(IV)所示的化合物:
[0048]
[0049]
其中:
[0050]
R 1、R 5~R 7、n和t如通式(I)中所定义。
[0051]
在本发明一个优选的实施方案中,所述的通式(I)所示的化合物,其中R 1为氢原子、卤素和烷基。
[0052]
在本发明一个优选的实施方案中,所述的通式(I)所示的化合物,其中R 5选自烷基、NR 10R 11或环烷基,其中所述的烷基或环烷基各自独立地任选被选自羟基、卤素、烷基、氨基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取代;R 10和R 11如通式(I)中所定义。
[0053]
在本发明一个优选的实施方案中,所述的通式(I)所示的化合物,其中R 5选自乙基、环丙基、环丙基甲基或-NH-环丙基。
[0054]
在本发明一个优选的实施方案中,所述的通式(I)所示的化合物,其中R 6为氢原子或卤素。
[0055]
在本发明一个优选的实施方案中,所述的通式(I)所示的化合物,其中R 7选自烷基、环烷基和卤代烷基。
[0056]
典型的通式(I)的化合物,包括但不限于:
[0057]
[0058]
[0059]
[0060]
或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式,或其可药用盐。
[0061]
本发明的另一方面涉及一种药物组合物,其含有治疗有效剂量的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或可药用的盐,以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。本发明还涉及一种制备所述药物组合物的方法,其包括将通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用的盐与药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂相混合。在本发明一个实施方案中,所述药物组合物进一步含有抗PD-1抗体,优选抗鼠PD-1抗体。
[0062]
本发明进一步涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式,或其可药用盐,或包含其的药物组合物在制备ROR激动剂中的用途。
[0063]
本发明进一步涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式,或其可药用盐,或包含其的药物组合物在作为ROR激动剂在制备用于预防和/或治疗肿瘤或癌症的药物中 的用途。
[0064]
本发明进一步涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式,或其可药用盐(作为ROR激动剂),或包含其的药物组合物与抗PD-1抗体联合在制备用于预防和/或治疗肿瘤或癌症的药物中的用途。
[0065]
本发明进一步涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式、或其可药用盐,或包含其的药物组合物,其用作药物。
[0066]
本发明还涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式、或其可药用盐,或包含其的药物组合物,其作为ROR激动剂。
[0067]
本发明还涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式、或其可药用盐,或包含其的药物组合物,其作为ROR激动剂用于预防和/或治疗肿瘤或癌症。
[0068]
本发明还涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式、或其可药用盐,或包含其的药物组合物与抗PD-1抗体的组合,其用于预防和/或治疗肿瘤或癌症。
[0069]
本发明还涉及一种治疗预防和/或治疗肿瘤或癌症的方法,其包括向需要其的患者施用治疗有效剂量的作为ROR激动剂的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式,或其可药用盐,或包含其的药物组合物。
[0070]
本发明还涉及一种治疗预防和/或治疗预防肿瘤或癌症的方法,其包括向需要其的患者施用治疗有效剂量的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式,或其可药用盐,或包含其的药物组合物和抗PD-1抗体。
[0071]
含活性成分的药物组合物可以是适用于口服的形式,例如片剂、糖锭剂、锭剂、水或油混悬液、可分散粉末或颗粒、乳液、硬或软胶囊,或糖浆剂或酏剂。可按照本领域任何已知制备药用组合物的方法制备口服组合物,此类组合物可含有一种或多种选自以下的成分:甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂,以提供悦目和可口的药用制剂。片剂含有活性成分和用于混合的适宜制备片剂的无毒的可药用的赋形剂。这些赋形剂可以是惰性赋形剂,造粒剂、崩解剂,粘合剂,和润滑剂,。这些片剂可以不包衣或可通过掩盖药物的味道或在胃肠道中延迟崩解和吸收,因而在较长时间内提供缓释作用的已知技术将其包衣。
[0072]
也可用其中活性成分与惰性固体稀释剂或其中活性成分与水溶性载体或油溶媒混合的软明胶胶囊提供口服制剂。
[0073]
水悬浮液含有活性物质和用于混合的适宜制备水悬浮液的赋形剂。此类赋形剂是悬浮剂,分散剂或湿润剂。水混悬液也可以含有一种或多种防腐剂、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂和一种或多种甜味剂。
[0074]
油混悬液可通过使活性成分悬浮于植物油,或矿物油配制而成。油悬浮液可含有增稠剂。可加入上述的甜味剂和矫味剂,以提供可口的制剂。可通过加入抗氧化剂保存这些组合物。
[0075]
本发明的药物组合物也可以是水包油乳剂的形式。油相可以是植物油,或矿物油或其混合物。适宜的乳化剂可以是天然产生的磷脂,乳剂也可以含有甜味剂、矫味剂、防腐剂和抗氧剂。此类制剂也可含有缓和剂、防腐剂、着色剂和抗氧剂。
[0076]
本发明的药物组合物可以是无菌注射水溶液形式。可以使用的可接受的溶媒或溶剂有水、林格氏液和等渗氯化钠溶液。无菌注射制剂可以是其中活性成分溶于油相的无菌注射水包油微乳可通过局部大量注射,将注射液或微乳注入患者的血流中。或者,最好按可保持本发明化合物恒定循环浓度的方式给予溶液和微乳。为保持这种恒定浓度,可使用连续静脉内递药装置。这种装置的实例是Deltec CADD-PLUS.TM.5400型静脉注射泵。
[0077]
本发明的药物组合物可以是用于肌内和皮下给药的无菌注射水或油混悬液的形式。可按已知技术,用上述那些适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂配制该混悬液。无菌注射制剂也可以是在肠胃外可接受的无毒稀释剂或溶剂中制备的无菌注射溶液或混悬液。此外,可方便地用无菌固定油作为溶剂或悬浮介质。为此目的,可使用任何调和固定油。此外,脂肪酸也可以制备注射剂。
[0078]
可按用于直肠给药的栓剂形式给予本发明化合物。可通过将药物与在普通温度下为固体但在直肠中为液体,因而在直肠中会溶化而释放药物的适宜的无刺激性赋形剂混合来制备这些药物组合物。
[0079]
如本领域技术人员所熟知的,药物的给药剂量依赖于多种因素,包括但并非限定于以下因素:所用具体化合物的活性、患者的年龄、患者的体重、患者的健康状况、患者的行为、患者的饮食、给药时间、给药方式、排泄的速率、药物的组合等;另外,最佳的治疗方式如治疗的模式、通式化合物(I)的日用量或可药用的盐的种类可以根据传统的治疗方案来验证。
[0080]
发明的详细说明
[0081]
除非有相反陈述,在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
[0082]
术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团,其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团,优选含有1至12个碳原子的烷基,更优选含有1至6个碳原子的烷基。非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁 基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基,及其各种支链异构体等。更优选的是含有1至6个碳原子的低级烷基,非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代的或非取代的,当被取代时,取代基可以在任何可使用的连接点上被取代,所述取代基优选为一个或多个以下基团,其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基和羧酸酯基。
[0083]
术语“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(非取代的环烷基),其中烷基和环烷基的定义如上所述。烷氧基的非限制性实例包括:甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基。烷氧基可以是任选取代的或非取代的,当被取代时,取代基优选为一个或多个以下基团,其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基和羧酸酯基。
[0084]
术语“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基,环烷基环包含3至20个碳原子,优选包含3至12个碳原子,更优选包含3至6个碳原子。单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等;多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。
[0085]
术语“螺环烷基”指5至20元的单环之间共用一个碳原子(称螺原子)的多环基团,其可以含有一个或多个双键,但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元,更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺环烷基、双螺环烷基或多螺环烷基,优选为单螺环烷基和双螺环烷基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺环烷基。螺环烷基的非限制性实例包括:
[0086]
[0087]
术语“稠环烷基”指5至20元,系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对碳原子的全碳多环基团,其中一个或多个环可以含有一个或多个双键,但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元,更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠环烷基,优选为双环或三环,更优选为5元/5元或5元/6元双环烷基。稠环烷基的非限制性实例包括:
[0088]
[0089]
术语“桥环烷基”指5至20元,任意两个环共用两个不直接连接的碳原子的全碳多环基团,其可以含有一个或多个双键,但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元,更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基,优选为双环、三环或四环,更有选为双环或三环。桥环烷基的非限制性实例包括:
[0090]
[0091]
所述环烷基环可以稠合于芳基、杂芳基或杂环烷基环上,其中与母体结构连接在一起的环为环烷基,非限制性实例包括茚满基、四氢萘基、苯并环庚烷基等。环烷基可以是任选取代的或非取代的,当被取代时,取代基优选为一个或多个以下基团,其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基和羧酸酯基。
[0092]
术语“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基,其包含3至20个环原子,其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O) m(其中m是整数0至2)的杂原子,但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分,其余环原子为碳。优选包含3至12个环原子,其中1~4个是杂原子;最优选包含3至8个环原子,其中1~3是杂原子;最优选包含3至6个环原子,其中1~2是杂原子。单环杂环基的非限制性实例包括吡咯烷基、咪唑烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、二氢咪唑基、二氢呋喃基、二氢吡唑基、二氢吡咯基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、 高哌嗪基、吡喃基等,优选哌啶基、哌嗪基或吗啉基。多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基。
[0093]
术语“螺杂环基”指5至20元的单环之间共用一个原子(称螺原子)的多环杂环基团,其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O) m(其中m是整数0至2)的杂原子,其余环原子为碳。其可以含有一个或多个双键,但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元,更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺杂环基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基,优选为单螺杂环基和双螺杂环基。更优选为3元/6元、4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺杂环基。螺杂环基的非限制性实例包括:
[0094]
[0095]
术语“稠杂环基”指5至20元,系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的多环杂环基团,一个或多个环可以含有一个或多个双键,但没有一个环具有完全共轭的π电子系统,其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O) m(其中m是整数0至2)的杂原子,其余环原子为碳。优选为6至14元,更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠杂环基,优选为双环或三环,更优选为5元/5元或5元/6元双环稠杂环基。稠杂环基的非限制性实例包括:
[0096]
[0097]
术语“桥杂环基”指5至14元,任意两个环共用两个不直接连接的原子的多环杂环基团,其可以含有一个或多个双键,但没有一个环具有完全共轭的π电子系统,其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O) m(其中m是整数0至2)的杂原子,其余环原子为碳。优选为6至14元,更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥杂环基,优选为双环、三环或四环,更有选为双环或三环。桥杂环基的非限制性实例包括:
[0098]
[0099]
所述杂环基环可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上,其中与母体结构连接在一起的环为杂环基,其非限制性实例包括:
[0100]
等。
[0101]
杂环基可以是任选取代的或非取代的,当被取代时,取代基优选为一个或多个以下基团,其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基和羧酸酯基。
[0102]
术语“芳基”指具有共轭的π电子体系的6至14元全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团,优选为6至10元,例如苯基和萘基。更优选苯基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上,其中与母体结构连接在一起的环为芳基环,其非限制性实例包括:
[0103]
[0104]
芳基可以是取代的或非取代的,当被取代时,取代基优选为一个或多个以下基团,其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
[0105]
术语“杂芳基”指包含1至4个杂原子、5至14个环原子的杂芳族体系,其中杂原子选自氧、硫和氮。杂芳基优选为5至10元,含1至3个杂原子;更优选为5元或6元,含1至2个杂原子;优选例如咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡唑基、噁唑基、吡咯基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、噻二唑、吡嗪基等,优选为咪唑基、四唑基、吡啶基、噻吩基、吡唑基或嘧啶基、噻唑基;更有选吡啶基。 所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上,其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环,其非限制性实例包括:
[0106]
[0107]
杂芳基可以是任选取代的或非取代的,当被取代时,取代基优选为一个或多个以下基团,其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基和羧酸酯基。
[0108]
术语“卤代烷基”指被一个或多个卤素取代的烷基,其中烷基如上所定义。
[0109]
术语“卤代烷氧基”指被一个或多个卤素取代的烷氧基,其中烷氧基如上所定义。
[0110]
术语“羟烷基”指被羟基取代的烷基,其中烷基如上所定义。
[0111]
术语“羟基”指-OH基团。
[0112]
术语“卤素”指氟、氯、溴或碘。
[0113]
术语“氨基”指-NH 2
[0114]
术语“氰基”指-CN。
[0115]
术语“硝基”指-NO 2
[0116]
术语“氧代基”指=O。
[0117]
术语“羰基”指C=O。
[0118]
术语“羧基”指-C(O)OH。
[0119]
术语“羧酸酯基”指-C(O)O(烷基)或-C(O)O(环烷基),其中烷基、环烷基如上所定义。
[0120]
术语“酰卤”指含有-C(O)-卤素的基团的化合物。
[0121]
“任选”或“任选地”意味着随后所描述的事件或环境可以但不必发生,该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。例如,“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在,该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。
[0122]
“取代的”指基团中的一个或多个氢原子,优选为最多5个,更优选为1~3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻,取代基仅处在它们的可能的化学位置,本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如,具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
[0123]
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物,以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药,利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
[0124]
“可药用盐”是指本发明化合物的盐,这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性,且具有应有的生物活性。

附图说明

[0125]
图1显示实施例4化合物单独施用或者与抗鼠-PD-1抗体联合用药在C57BL/6小鼠中对MC38结肠直肠肿瘤生长的影响。

具体实施方式

[0126]
以下结合实施例进一步描述本发明,但这些实施例并非限制着本发明的范围。
[0127]
实施例
[0128]
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或/和质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10 -6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AVANCE-400核磁仪,测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d 6),氘代氯仿(CDCl 3),氘代甲醇(CD 3OD),内标为四甲基硅烷(TMS)。
[0129]
MS的测定用FINNIGAN LCQAd(ESI)质谱仪(生产商:Thermo,型号:Finnigan LCQ advantage MAX)。
[0130]
HPLC的测定使用安捷伦1200DAD高压液相色谱仪(Sunfire C18 150×4.6mm色谱柱)和Waters 2695-2996高压液相色谱仪(Gimini C18 150×4.6mm色谱柱)。
[0131]
手性HPLC分析测定使用LC-10A vp(Shimadzu)或者SFC-analytical(Berger Instruments Inc.)。
[0132]
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板,薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm~0.2mm,薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm~0.5mm。
[0133]
柱层析一般使用烟台黄海硅胶200~300目硅胶为载体。
[0134]
手性制备柱层析使用Prep Star SD-1(Varian Instruments Inc.)或SFC-multigram(Berger Instruments Inc.)。
[0135]
CombiFlash快速制备仪使用Combiflash Rf200(TELEDYNE ISCO)。
[0136]
激酶平均抑制率及IC 50值的测定用NovoStar酶标仪(德国BMG公司)。
[0137]
本发明的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成,或可购买自ABCR GmbH&Co.KG,Acros Organics,Aldrich Chemical Company,韶远化学科技(Accela ChemBio Inc)、达瑞化学品、上海毕得医药科技有限公司等公司。
[0138]
实施例中无特殊说明,反应能够均在氩气氛或氮气氛下进行。
[0139]
氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气或氮气气球。
[0140]
氢气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。
[0141]
加压氢化反应使用Parr 3916EKX型氢化仪和清蓝QL-500型氢气发生器或HC2-SS型氢化仪。
[0142]
氢化反应通常抽真空,充入氢气,反复操作3次。
[0143]
微波反应使用CEM Discover-S 908860型微波反应器。
[0144]
实施例中无特殊说明,溶液是指水溶液。
[0145]
实施例中无特殊说明,反应的温度为室温,为20℃~30℃。
[0146]
实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(TLC),反应所使用的展开剂,纯化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂体系包括:A:二氯甲烷/甲醇体系,B:正己烷/乙酸乙酯体系,溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节,也可以加入少量的三乙胺和醋酸等碱性或酸性试剂进行调节。
[0147]
实施例1
[0148]
N-(1-(4-(乙磺酰基)苯基)-2-羟乙基)-1-异丙基-2-(2-(三氟甲基)苄基)-1H-吲哚-5-甲酰胺1
[0149]
[0150]
第一步
[0151]
2-(2-三氟甲基)苄基)-1H-吲哚-5-甲酸甲酯1c
[0152]
将1H-吲哚-5-甲酸甲酯1b(400mg,2.29mmol),1-(溴甲基)-2-(三氟甲基)苯1a(574mg,2.4mmol),双(乙腈)二氯化钯(II)(118mg,0.46mmol),双环[2.2.1]-2-庚烯(429mg,4.6mmol)和碳酸氢钠(384mg,4.6mmol)加入10mL N,N-二甲基乙酰胺中,氩气氛下,加热至70℃,搅拌16小时。反应结束后,反应液倒入水中,乙酸乙酯萃取三次,合并有机相,依次用水、饱和氯化钠溶液洗涤,无水硫酸钠干燥。过滤,滤液减压浓缩,用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物,得到标题化合物1c(570mg,产率:74.9%)。
[0153]
第二步
[0154]
1-异丙基-2-(2-(三氟甲基)苄基)-1H-吲哚-5-甲酸甲酯1d
[0155]
将化合物1c(500mg,1.5mmol)溶于15mL N,N-二甲基甲酰胺中,加入60%氢化钠(120mg,3.0mmol),室温搅拌反应30分钟,再加入2-碘丙烷(1.02g,6.0mmol),密封反应管内70℃反应16小时。反应液冷却至室温后倒入水中,乙酸乙酯萃取三次,合并有机相,水洗涤一次,无水硫酸钠干燥。过滤,滤液减压浓缩,用薄层层析色谱法以展开剂体系B纯化所得残余物,得到标题化合物1d(80mg,产率:14.2%)。
[0156]
第三步
[0157]
1-异丙基-2-(2-(三氟甲基)苄基)-1H-吲哚-5-甲酸1e
[0158]
将化合物1d(80mg,0.21mmol)溶于5mL甲醇和2mL四氢呋喃的混合溶剂中,加入3mL 4N的氢氧化钠溶液,60℃搅拌反应1小时。浓盐酸中和反应液,加入水,乙酸乙酯萃取三次,合并有机相,用饱和氯化钠溶液洗涤,无水硫酸钠干燥。过滤,滤液减压浓缩,得到粗品标题化合物1e(70mg),产物不经纯化直接用于下一步反应。
[0159]
第四步
[0160]
N-(1-(4-(乙磺酰基)苯基)-2-羟乙基)-1-异丙基-2-(2-(三氟甲基)苄基)-1H-吲哚-5-甲酰胺1
[0161]
将2-氨基-2-(4-乙磺酰基苯基)乙醇1f(67mg,0.29mmol,采用专利申请“WO2016061160”公开的方法制备而得),粗品化合物1e(70mg,0.193mmol),1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(56mg,0.29mmol),1-羟基苯并三唑(40mg,0.29mmol)和三乙胺(101mg,1mmol)加入10mL二氯甲烷中,室温搅拌16小时。反应液减压浓缩,用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物,得到标题化合物1(40mg,产率:36.0%)。
[0162]
MS m/z(ESI):573.5[M+1]。
[0163]
1H NMR(400HMz,CDCl 3)δ8.12(d,1H),7.92(d,2H),7.76(d,1H),7.69(dd,1H),7.64(d,2H),7.59(d,1H),7.47-7.38(m,2H),7.14-7.09(m,2H),6.35(s,1H),5.41-5.37(m,1H),4.49-4.42(m,1H),4.35(s,2H),4.12-4.08(m,2H),3.14(q,2H),2.37(brs,1H),1.52(d,6H),1.32(t,3H)。
[0164]
实施例2
[0165]
2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-N-(1-(4-(乙磺酰基)苯基)-2-羟乙基)-1-(2-氟代乙基)-1H-吲哚-5-甲酰胺2
[0166]
[0167]
[0168]
第一步
[0169]
2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-1H-吲哚-5-甲酸甲酯2b
[0170]
将化合物1b(7g,39.96mmol),1-(溴甲基)-4-氯-2-(三氟甲基)苯2a(13.11g,47.95mmol)溶于200mL N,N-二甲基乙酰胺中,加入双(乙腈)二氯化钯(II)(2.07g,7.99mmol),双环[2.2.1]-2-庚烯(3.76g,39.96mmol)和碳酸钠(8.47g,79.92mmol),氩气氛下,加热至80℃搅拌反应17小时。冷却反应液,过滤,滤液减压浓缩,用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物,得到标题化合物2b(13g,产率:88.47%)。
[0171]
MS m/z(ESI):368.1[M+1]。
[0172]
第二步
[0173]
2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-1-(2-氟代乙基)-1H-吲哚-5-甲酸甲酯2c
[0174]
将化合物2b(0.3g,815.77μmol),1-溴-2-氟乙烷(310.7mg,2.45mmol)溶于10mL N,N-二甲基甲酰胺,加入碳酸铯(797.38mg,2.45mmol),微波条件下100℃反应1小时。冷却反应,过滤,滤液减压浓缩,用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物,得到标题化合物2c(0.25g,产率:74.06%)。
[0175]
MS m/z(ESI):414.1[M+1]。
[0176]
第三步
[0177]
2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-1-(2-氟代乙基)-1H-吲哚-5-甲酸2d
[0178]
将化合物2c(0.25g,604.17μmol)溶于20mL甲醇中,加入1.5mL 4N的氢氧化钠溶液,回流搅拌反应1小时。反应液冷却至室温,滴加入1M盐酸调节pH为3~4,加入水和乙酸乙酯各20mL,乙酸乙酯萃取(20mL×2),合并有机相,无水硫酸钠干燥。过滤,滤液减压浓缩,用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物,得到标题化合物2d(0.24g,产率:99.4%)。
[0179]
MS m/z(ESI):400.1[M+1]。
[0180]
第四步
[0181]
2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-N-(1-(4-(乙磺酰基)苯基)-2-羟乙基)-1-(2-氟代乙基)-1H-吲哚-5-甲酰胺2
[0182]
将化合物2d(10mg,25.01μmol)溶于2mL N,N-二甲基甲酰胺中,加入化合物1f(8.67mg,37.83μmol)和N,N-二异丙基乙胺(6.47mg,50.03μmol),再加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(11.77mg,50.03μmol),室温搅拌反应2小时。减压浓缩反应液,用高效液相色谱法纯化所得残余物,制得标题化合物2(7.9mg,51.7%)。
[0183]
MS m/z(ESI):611.5[M+1]。
[0184]
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ8.13(s,1H),7.93-7.90(m,2H),7.77-7.75(m,2H),7.64-7.62(m,2H),7.47-7.45(m,1H),7.37-7.35(m,1H),7.16-7.14(m,1H),7.13-7.11(m,1H),6.33(s,1H),5.40-5.38(m,1H),4.70-4.68(m,1H),4.57-4.56(m,1H),4.37-4.35(m,1H),4.35(s,2H),4.30-4.31(m,1H),4.11-4.06(m,2H),3.16-3.11(m,2H),1.33-1.29(m,3H)。
[0185]
实施例3,4
[0186]
(S)-2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-N-(1-(4-(乙磺酰基)苯基)-2-羟乙基)-1-(2-氟代乙基)-1H-吲哚-5-甲酰胺3
[0187]
(R)-2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-N-(1-(4-(乙磺酰基)苯基)-2-羟乙基)-1-(2-氟代乙基)-1H-吲哚-5-甲酰胺4
[0188]
[0189]
将化合物2(120mg,0.197mmol)进行手性制备(分离条件:Superchiral S-AD(Chiralway),2cm I.D.×25cm Length,5um;流动相:二氧化碳/乙醇/二乙胺=60/40/0.05(v/v/v),流速:50g/min),收集其相应组分,减压浓缩,得到标题化合物3(52mg)和标题化合物4(52mg)。
[0190]
化合物3:
[0191]
MS m/z(ESI):610.9[M+1]。
[0192]
手性HPLC分析:保留时间7.882分钟,手性纯度:100%(色谱柱:Lux Amylose-1(AD)4.6×150mm 5um(带保护柱);流动相:正己烷/乙醇(0.1%二乙胺)=60/40(v/v))。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ8.13(s,1H),7.93-7.90(m,2H),7.77-7.75(m,2H),7.64-7.62(m,2H),7.47-7.45(m,1H),7.37-7.35(m,1H),7.16-7.14(m,1H),7.13-7.11(m,1H),6.33(s,1H),5.40-5.38(m,1H),4.70-4.68(m,1H),4.57-4.56(m,1H),4.37-4.35(m,1H),4.35(s,2H),4.31-4.30(m,1H),4.11-4.06(m,2H),3.16-3.11(m,2H),1.33-1.29(m,3H)。
[0193]
化合物4:
[0194]
MS m/z(ESI):611.0[M+1]。
[0195]
手性HPLC分析:保留时间11.747分钟,手性纯度:100%(色谱柱:Lux Amylose-1 (AD)4.6×150mm 5um(带保护柱);流动相:正己烷/乙醇(0.1%二乙胺)=60/40(v/v))。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ8.12(s,1H),7.93-7.91(m,2H),7.76-7.74(m,2H),7.65-7.63(m,2H),7.47-7.45(m,1H),7.37-7.35(m,1H),7.15-7.11(m,2H),6.33(s,1H),5.39-5.38(m,1H),4.70-4.69(m,1H),4.59-4.56(m,1H),4.37-4.36(m,1H),4.35(s,2H),4.31-4.30(m,1H),4.11-4.06(m,2H),3.17-3.11(m,2H),2.33(brs,1H),1.34-1.30(m,3H)。
[0196]
实施例5
[0197]
(R)-2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-N-(1-(4-(乙磺酰基)苯基)-2-羟乙基)-6-氟-1-(2-氟代乙基)-1H-吲哚-5-甲酰胺5
[0198]
[0199]
第一步
[0200]
2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-6-氟-1H-吲哚-5-甲酸甲酯5b
[0201]
将6-氟-1H-吲哚-5-甲酸甲酯5a(500mg,2.59mmol),化合物2a(1.06g,88mmol),双(乙腈)二氯化钯(II)(67.15mg,258.83μmol),双环[2.2.1]-2-庚烯(487.40mg,5.18mmol)和碳酸钾(714.38mg,5.18mmol)加入20mL N,N-二甲基乙酰胺中,氩气氛下,加热至80℃,搅拌16小时。反应液冷却至室温,过滤,滤液倒入水中,乙酸乙酯萃取,合并有机相,无水硫酸钠干燥。过滤,滤液减压浓缩,用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物,得到标题化合物5b(600mg,产率:60.1%)。
[0202]
MS m/z(ESI):386.1[M+1]。
[0203]
第二步
[0204]
2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-6-氟-1-(2-氟代乙基)-1H-吲哚-5-甲酸甲酯5c
[0205]
将化合物5b(100mg,259.24μmol),1-氟-2-碘-乙烷(67.64mg,388.86μmol)和碳酸铯(254.32mg,777.72μmol)加入5mL乙腈中,微波条件下100℃反应1小 时。反应液倒入水中,乙酸乙酯萃取,合并有机相,无水硫酸钠干燥。过滤,滤液减压浓缩,用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物,得到标题化合物5c(80mg,产率:71.5%)。
[0206]
MS m/z(ESI):432.1[M+1]。
[0207]
第三步
[0208]
2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-6-氟-1-(2-氟代乙基)-1H-吲哚-5-甲酸5d
[0209]
将化合物5c(80mg,185.28μmol)和氢氧化钠(37.05mg,926.39μmol)加入6mL甲醇和0.5mL水的混合溶剂中,60℃搅拌反应2小时。减压浓缩除去甲醇,所得残余物中滴加1M稀盐酸调节pH~3,乙酸乙酯萃取,有机相用无水硫酸钠干燥。过滤,滤液减压浓缩,得到粗品标题化合物5d(50mg),产物不经纯化直接用于下一步反应。
[0210]
MS m/z(ESI):418.0[M+1]。
[0211]
第四步
[0212]
(R)-2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-N-(1-(4-(乙磺酰基)苯基)-2-羟乙基)-6-氟-1-(2-氟代乙基)-1H-吲哚-5-甲酰胺5
[0213]
将(R)-2-氨基-2-(4-(乙磺酰基)苯基)乙醇5e(16.47mg,71.81μmol,采用专利申请“WO2016061160”公开的方法制备而得),粗品化合物5d(30mg,71.81μmol),1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(20.57mg,107.72μmol),1-羟基苯并三唑(16.39mg,107.72μmol)和N,N-二异丙基乙胺(27.84mg,215.43μmol)加入3mL N,N-二甲基甲酰胺中,室温搅拌16小时。反应液用乙酸乙酯萃取,合并有机相,无水硫酸钠干燥。过滤,滤液减压浓缩,用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物,得到标题化合物5(19mg,产率:42.1%)。
[0214]
MS m/z(ESI):629.5[M+1]。
[0215]
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ8.26(d,1H),7.89(d,2H),7.72-7.60(m,4H),7.42(d,1H),7.11-7.03(m,2H),6.27(s,1H),5.41-5.39(m,1H),4.63-4.51(m,2H),4.27-4.19(m,4H),4.06-4.01(m,2H),3.12-3.07(m,2H),2.35(brs,1H),1.30-1.27(m,3H)。
[0216]
实施例6
[0217]
(R)-2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-1-环丙基-N-(1-(4-(乙磺酰基)苯基)-2-羟乙基)-6-氟-1H-吲哚-5-甲酰胺6
[0218]
[0219]
[0220]
第一步
[0221]
2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-1-环丙基-6-氟-1H-吲哚-5-甲酸甲酯6b
[0222]
将化合物5b(100mg,259.24μmol),环丙基硼酸6a(44.54mg,518.48μmol),2,2’-联吡啶(48.59mg,311.09μmol),醋酸铜(56.50mg,311.09μmol)和碳酸钠(54.95mg,518.48μmol)加入20mL四氢呋喃中,氩气氛下,60℃搅拌16小时。反应液过滤,滤液用乙酸乙酯萃取,无水硫酸钠干燥。过滤,滤液减压浓缩,用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物,得到标题化合物6b(80mg,产率:72.47%)。
[0223]
MS m/z(ESI):426.1[M+1]。
[0224]
第二步
[0225]
2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-1-环丙基-6-氟-1H-吲哚-5-甲酸6c
[0226]
将化合物6b(90mg,211.37μmol.)和氢氧化钠(42.27mg,1.06mmol)加入6mL甲醇和0.5mL水的混合溶剂中,60℃搅拌反应2小时。减压浓缩除去甲醇,所得残余物中滴加1M盐酸调节pH~3,乙酸乙酯萃取,有机相用无水硫酸钠干燥。过滤,滤液减压浓缩,得到粗品标题化合物6c(60mg),产物不经纯化直接用于下一步反应。
[0227]
MS m/z(ESI):412.0[M+1]。
[0228]
第三步
[0229]
(R)-2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-1-环丙基-N-(1-(4-(乙磺酰基)苯基)-2-羟乙基)-6-氟-1H-吲哚-5-甲酰胺6
[0230]
将化合物5e(16.71mg,72.86μmol),粗品化合物6c(30mg,72.86μmol),1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(20.87mg,109.28μmol),1-羟基苯并三唑(16.63mg,109.28μmol)和N,N-二异丙基乙胺(28.25mg,218.57μmol)加入3mL N,N-二甲基甲酰胺中,室温搅拌16小时。反应液用乙酸乙酯萃取,合并有机相,无水硫酸钠干燥。过滤,滤液减压浓缩,用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物,得到标题化合物6(15mg,产率:33.0%)。
[0231]
MS m/z(ESI):623.5[M+1]。
[0232]
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ8.23(d,1H),7.91(d,2H),7.71(d,2H),7.62(d,2H),7.42(d,1H),7.28(d,1H),7.03(d,1H),6.17(s,1H),5.40(s,1H),4.37(s,2H),4.08-4.04(m,2H),3.14-3.10(m,2H),2.98-2.90(m,1H),2.21(brs,1H),1.31-1.27(m,3H),1.14-1.12(m,2H),0.98-0.89(m,2H)。
[0233]
实施例7
[0234]
N-((R)-1-(4-(乙基磺酰基)苯基)-2-羟乙基)-1-(2-氟乙基)-2-((3-(三氟甲基)吗啉基)甲基)-1H-吲哚-5-甲酰胺7
[0235]
[0236]
第一步
[0237]
4-((5-溴-1H-吲哚-2-基)甲基)-3-(三氟甲基)吗啉7c
[0238]
将5-溴-1H-吲哚-2-甲醛7a(120mg,0.54mmol,采用公知的的方法“Journal of Medicinal Chemistry,2014,57(2),364-377”制备而得)溶于10mL 1,2-二氯乙烷,加入3-(三氟甲基)吗啉盐酸盐7b(120mg,0.63mmol)和5滴醋酸,搅拌反应1.5小时,加入三乙酰基硼氢化钠(240mg,1.1mmol),搅拌反应16小时。反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液,用乙酸乙酯萃取三次,合并有机相,饱和氯化钠溶液洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩,用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化,得到标题化合物7c(150mg,产率:76.5%)。
[0239]
MS m/z(ESI):363[M+1]。
[0240]
第二步
[0241]
4-((5-溴-1-(2-氟乙基)-1H-吲哚-2-基)甲基)-3-(三氟甲基)吗啉7d
[0242]
将化合物7c(80mg,0.22mmol),1-氟-2碘乙烷(60uL),碳酸铯(200mg,0.61mmol)和10mL N,N-二甲基甲酰胺加入微波反应管。微波条件下100℃反应1小时。向反应液中加入水,用乙酸乙酯萃取,合并有机相,无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩,用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化所得残余物,得到标题化合物7d(92mg,产率:100%)。
[0243]
MS m/z(ESI):409[M+1]。
[0244]
第三步
[0245]
1-(2-氟乙基)-2-((3-(三氟甲基)吗啉基)甲基)-1H-吲哚-5-甲酸7e
[0246]
将化合物7d(28mg,68μmol)、六羰基钼(35mg,133μmol)、反式二-(m)-双[2-(二邻甲苯基膦)苄基]乙酸二钯(II)(14mg,15μmol)、三叔丁基膦四氟硼酸盐(14mg,48μmol),1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯(50uL)加入水(50uL)和1,4二氧六环(0.5mL)混合溶剂中,微波条件下150℃反应15分钟。反应液用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系A纯化得到标题化合物7e(15mg,产率:58%)。
[0247]
MS m/z(ESI):375[M+1]。
[0248]
第四步
[0249]
N-((R)-1-(4-(乙基磺酰基)苯基)-2-羟乙基)-1-(2-氟乙基)-2-((3-(三氟甲基)吗啉基)甲基)-1H-吲哚-5-甲酰胺7
[0250]
将化合物7e(18mg,48μmol)溶于0.8mLN,N-二甲基甲酰胺中,加入化合物5e(12mg,52μmol)、N,N-二异丙基乙胺(40uL)和2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(30mg,78μmol),搅拌反应2小时。反应液用高效液相色谱法纯化,得到标题化合物7(6mg,产率:21.4%)。
[0251]
MS m/z(ESI):586[M+1]。
[0252]
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ8.03(s,1H),7.79(d,2H),7.64(d,1H),7.51(d,2H),7.30(d,1H),7.11(d,1H),6.47(s,1H),5.24(brs,1H),4.75-4.73(m,1H),4.62-4.37(m,3H),4.12(d,1H),4.05-3.81(m,4H),3.81-3.51(m,3H),3.08-2.87(m,4H),2.38(d,1H),1.20(t,3H)。
[0253]
实施例8
[0254]
(R)-1-环丙基-N-(1-(4-(乙磺酰基)苯基)-2-羟乙基)-6-氟-2-((3-甲基-5-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)甲基)-1H-吲哚-5-甲酰胺8
[0255]
[0256]
[0257]
第一步
[0258]
4-氨基-2-氟-5-碘苯甲酸甲酯8b
[0259]
将4-氨基-2-氟苯甲酸甲酯(3.4g,20.2mmol,采用专利申请“WO2013068467”公开的方法制备而得)溶于30mL二氯甲烷和甲醇的混合溶剂中(V:V=2:1),室温下加入氯化碘(3.6g,22.2mmol)和碳酸钙(4.03g,40.4mmol),搅拌反应2小时。反应液过滤,滤液用饱和硫代硫酸钠溶液洗涤(50mL×1),无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩,用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物,得到标题化合物8b(6.5g,产率:100%)。
[0260]
MS m/z(ESI):296[M+1]。
[0261]
第二步
[0262]
2-氟-5-碘-4-(2,2,2-三氟乙酰氨基)苯甲酸甲酯8c
[0263]
将化合物8b(6.5g,20.2mmol)溶于100mL二氯甲烷中,冰浴下加入三氟乙酸酐(3.6g,22.2mmol),搅拌反应1小时。反应液减压浓缩,用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物,得到标题化合物8c(5.4g,产率:69%)。
[0264]
MS m/z(ESI):392[M+1]。
[0265]
第三步
[0266]
2-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-6-氟-1H-吲哚-5-羧酸甲酯8e
[0267]
将化合物8c(2.28g,5.8mmol)和叔丁基二甲基(2-丙炔-1-基氧基)硅烷8d(1.49g,8.74mmol,采用公知的方法“Journal of the American Chemical Society,2016,138(24),7532-7535”制备而得)溶解于10mL N,N-二甲基甲酰胺中,加入二(三苯基膦)氯化钯(0.61g,0.88mmol),碘化亚铜(0.222g,1.17mmol)和三乙胺(4.07mL,29.2mmol),70℃搅拌反应4小时。向反应液中加入40mL水,用乙酸乙酯萃取(30mL×3),合并有机相,饱和氯化钠溶液洗涤(30mL×1),无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩,用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物,得到标题化合物8e(1.29g,产率:65%)。
[0268]
MS m/z(ESI):338[M+1]。
[0269]
第四步
[0270]
2-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-1-环丙基-6-氟-1H-吲哚-5-羧酸甲酯8f
[0271]
将化合物8e(0.633g,1.88mmol)和环丙基硼酸(1.61g,18.8mmol)溶解于5mL1,2-二氯乙烷中,加入醋酸铜(1.43g,7.88mmol),2,2-双吡啶(1.23g,7.88mmol)和碳酸钠(0.84g,7.88mmol),80℃搅拌反应16小时。反应液过滤,二氯甲烷洗涤滤饼,滤液减压浓缩,用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物,得到标题化合物8f(350mg,产率:50%)。
[0272]
MS m/z(ESI):378[M+1]。
[0273]
第五步
[0274]
1-环丙基-6-氟-2-(羟甲基)-1H-吲哚-5-羧酸甲酯8g
[0275]
将化合物8f(350mg,0.927mmol)溶解于10mL四氢呋喃中,冰浴下加入四丁基氟化铵四氢呋喃溶液(1.85mL,1.85mmol),0℃搅拌反应2小时,向反应液中加入10mL水,用乙酸乙酯萃取(10mL×3),合并有机相,饱和氯化钠溶液洗涤(10mL×1),无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩,用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物,得到标题化合物8g(230mg,产率:68%)。
[0276]
MS m/z(ESI):264[M+1]。
[0277]
第六步
[0278]
1-环丙基-6-氟-2-((3-甲基-5-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)甲基)-1H-吲哚-5-羧酸甲酯8i
[0279]
将化合物8g(84mg,0.32mmol)和3-甲基-5-三氟甲基吡唑8h(192mg,1.28mmol,采用公知的方法“Tetrahedron Letters,2016,57(14),1555-1559”制备而得)溶解于10mL四氢呋喃中,室温下加入三苯基膦(336mg,1.85mmol)和二乙基偶氮二羧酸酯(200uL,1.28mmol),搅拌反应16小时。向反应液中加入30mL乙酸乙酯,依次用水(10mL)、饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩,用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物,得到标题化合物8i(49mg,产率:39%)。
[0280]
MS m/z(ESI):396[M+1]。
[0281]
第七步
[0282]
1-环丙基-6-氟-2-((3-甲基-5-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)甲基)-1H-吲哚-5-羧酸8j
[0283]
将化合物8i(50mg,0.124mmol)溶解于1mL甲醇中,室温下加入2M氢氧化钾溶液(1mL,2mmol),室温搅拌反应16小时。向反应液中加入6M盐酸调节pH至1~2,加入10mL水,用乙酸乙酯萃取(10mL×3),合并有机相,饱和氯化钠溶液洗涤(10mL×1),无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩得到粗品标题化合物8j(50mg),产物不经纯化直接用于下步反应。
[0284]
MS m/z(ESI):382[M+1]。
[0285]
第八步
[0286]
(R)-1-环丙基-N-(1-(4-(乙磺酰基)苯基)-2-羟乙基)-6-氟-2-((3-甲基-5-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)甲基)-1H-吲哚-5-甲酰胺8
[0287]
将化合物8j(3.9mg,0.01mmol)和化合物5e(4mg,0.015mmol)溶解于1mL二氯甲烷中,室温下加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(3.9mg,0.02mmol),1-羟基苯并三唑(2.7mg,0.02mmol)和三乙胺(7uL,0.05mmol),室温搅拌反应4小时,反应液减压浓缩,用高效液相色谱法纯化所得残余物,得到标题化合物8(3mg,产率:50%)。
[0288]
MS m/z(ESI):593[M+1]。
[0289]
实施例9
[0290]
(R)-N-(1-(4-(乙磺酰基)苯基)-2-羟乙基)-6-氟-1-(2-氟乙基)-2-((3-甲基-5-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)甲基)-1H-吲哚-5-甲酰胺9
[0291]
[0292]
第一步
[0293]
2-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-6-氟-1-(2-氟乙基)-1H-吲哚-5-羧酸甲酯9a
[0294]
将化合物8e(0.6g,1.78mmol)溶解于5mL N,N-二甲基甲酰胺中,加入2-氟碘乙烷(0.775g,4.45mmol)和碳酸钾(0.862g,6.24mmol),80℃搅拌反应4小时。向反应液中加入40mL水,用乙酸乙酯萃取(20mL×3),合并有机相,饱和氯化钠溶液洗涤(30mL×1),无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩,用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物,得到标题化合物9a(610mg,产率:90%)。
[0295]
MS m/z(ESI):384[M+1]。
[0296]
第二步
[0297]
6-氟-1-(2-氟乙基)-2-(羟甲基)-1H-吲哚-5-羧酸甲酯9b
[0298]
采用实施例8第五步化合物8g的合成路线,将原料化合物8f替换为化合物9a得到标题化合物9b(340mg,产率:80%)。
[0299]
MS m/z(ESI):270[M+1]。
[0300]
第三步
[0301]
6-氟-1-(2-氟乙基)-2-((3-甲基-5-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)甲基)-1H-吲哚-5-羧酸甲酯9c
[0302]
采用实施例8第六步化合物8i的合成路线,将原料化合物8g替换为化合物9b得到标题化合物9c(170mg,产率:73%)。
[0303]
MS m/z(ESI):402[M+1]。
[0304]
第四步
[0305]
6-氟-1-(2-氟乙基)-2-((3-甲基-5-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)甲基)-1H-吲哚-5-羧酸9d
[0306]
采用实施例8第七步化合物8j的合成路线,将原料化合物8i替换为化合物9c得到粗品标题化合物9d(150mg,产率:90%),产物不经纯化直接用于下步反应。
[0307]
MS m/z(ESI):388[M+1]。
[0308]
第五步
[0309]
(R)-N-(1-(4-(乙磺酰基)苯基)-2-羟乙基)-6-氟-1-(2-氟乙基)-2-((3-甲基-5-(三氟乙基)-1H-吡唑-1-基)甲基)-1H-吲哚-5-甲酰胺9
[0310]
采用实施例8第八步化合物8的合成路线,将原料化合物8j替换为化合物9d得到标题化合物9(1.4mg,产率:20%)。
[0311]
MS m/z(ESI):599[M+1]。
[0312]
实施例10
[0313]
(R)-2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-N-(1-(4-(乙磺酰基)苯基)-2-羟乙基)-1-异丙基-1H-吲哚-5-甲酰胺10
[0314]
[0315]
[0316]
第一步
[0317]
2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-1-异丙基-1H-吲哚-5-羧酸甲酯10a
[0318]
将化合物2b(47.5mg,0.13mmol)溶于1.5mL N,N-二甲基甲酰胺中,加入60%氢化钠(32mg,0.774mmol),加入2-碘丙烷(77.4μL,0.774mmol),75℃反应16小时。反应液冷却至室温,加入15mL水,乙酸乙酯萃取(10mL×3),合并有机相,饱和氯化钠溶液洗涤(10mL×3),无水硫酸钠干燥。过滤,滤液减压浓缩,用硅胶柱色谱法以展开剂体系B纯化所得残余物,得到标题化合物10a(20mg,产率:40%)。
[0319]
MS m/z(ESI):410[M+1]。
[0320]
第二步
[0321]
2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-1-异丙基-1H-吲哚-5-甲酸10b
[0322]
采用实施例9第四步的合成路线,将原料化合物9c替换为化合物10a,制得得到粗品标题化合物10b(21mg,100%),产物不经纯化直接用于下步反应。
[0323]
MS m/z(ESI):396[M+1]。
[0324]
第三步
[0325]
(R)-2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-N-(1-(4-(乙磺酰基)苯基)-2-羟乙基)-1-异丙基-1H-吲哚-5-甲酰胺10
[0326]
采用实施例9第五步的合成路线,将原料化合物9d替换为化合物10b,制得标题化合物10(25.2mg)。
[0327]
MS m/z(ESI):607[M+1]。
[0328]
1H NMR(300MHz,CDCl 3)δ8.01(s,1H),7.82(d,2H),7.68-7.43(m,4H),7.32(d,1H),7.02(s,1H),6.94(d,1H),6.24(s,1H),5.29(s,1H),4.31(q,1H),4.22(s,2H),4.00(d,2H),3.03(q,2H),1.43(d,6H),1.22(t,3H)。
[0329]
实施例11
[0330]
(R)-2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-1-环丙基-N-(1-(4-(乙磺酰基)苯基)-2-羟乙基)-1H-吲哚-5-甲酰胺11
[0331]
[0332]
采用实施例6的合成路线,将原料化合物5b替换为化合物2b,制得标题化合物11(23.8mg)。
[0333]
MS m/z(ESI):623[M+1]。
[0334]
1H NMR(300MHz,CDCl 3)δ7.95(s,1H),7.81(d,2H),7.67-7.58(m,2H),7.53(d,3H),7.34(d,1H),7.04(bs,1H),6.95(d,1H),6.13(s,1H),5.25(m,1H),4.34(s,2H),4.12-3.93(m,3H),3.02(q,2H),2.89(b,1H),1.27-1.13(m,3H),1.09-0.88(m,4H)。
[0335]
实施例12
[0336]
(R)-2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-N-(1-(4-(N-环丙基胺磺酰基)苯基)-2-羟乙基)-1-(2-氟代乙基)-1H-吲哚-5-甲酰胺12
[0337]
[0338]
第一步
[0339]
N-环丙基-4-乙烯基苯磺酰胺12b
[0340]
将对苯乙烯磺酸钠12a溶于40mL甲苯,室温下加入二氯亚砜(11.54g,97.00mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL),加热至100℃搅拌反应2小时。冷却反应液,减压浓缩,加入二氯甲烷(100mL),滴加环丙胺(2.22g,38.80mmol),加完室温搅拌反应1小时。过滤,滤液减压浓缩,用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物,得到标题化合物12b(2.0g,产率:46.2%)。
[0341]
MS m/z(ESI):224[M+1]。
[0342]
第二步
[0343]
(R)-(1-(4-(N-环丙基胺磺酰基)苯基)-2-羟乙基)氨基甲酸叔丁酯12c
[0344]
将氢氧化钠(1.07g,26.87mmol)溶于15mL水中,取5mL溶解二水合锇酸钾(132.00mg,358.28μmol)备用,室温下将叔丁基氨基甲酸酯(3.67g,31.35mmol) 溶于100mL正丙醇中,与上述氢氧化钠水溶液混合,室温滴加叔丁基次氯酸酯(2.92g,26.87mmol),加完搅拌5分钟,加入氢化奎尼定1,4-(2,3-二氮杂萘)二醚(418.64mg,537.42μmol),室温搅拌反应10分钟。滴加预制的20mL化合物12b(2.0g,8.96mmol)的正丙醇溶液和5mL二水合锇酸钾氢氧化钠溶液,加完室温搅拌反应5小时。用饱和硫代硫酸钠溶液淬灭反应,乙酸乙酯萃取(1000mL×2),合并有机相,用无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩,用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物,得标题化合物12c(0.3g,产率:9.4%)。
[0345]
MS m/z(ESI):357[M+1]。
[0346]
第三步
[0347]
(R)-4-(1-氨基-2-羟乙基)-N-环丙基苯磺酰胺12d
[0348]
将化合物12c(300mg,841.67μmol)溶于10mL甲醇中,加入4mL浓盐酸,室温搅拌反应2小时。减压浓缩反应液,得标题化合物12d(215mg,99.6%)。MS m/z(ESI):257.4[M+1]。
[0349]
第四步
[0350]
(R)-2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-N-(1-(4-(N-环丙基磺酰胺基)苯基)-2-羟乙基)-1-(2-氟代乙基)-1H-吲哚-5-甲酰胺12
[0351]
将化合物2d(100mg,250.15μmol)溶于2mL N,N-二甲基甲酰胺中,加入化合物12d(87.89mg,300.2μmol)和N,N-二异丙基乙胺(64.66mg,500.3μmol),再加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(190mg,500.3μmol),室温搅拌反应2小时。减压浓缩反应液,用高效液相色谱法纯化所得残余物,制得标题化合物12(50mg,30.3%)。
[0352]
MS m/z(ESI):638[M+1]。
[0353]
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ8.69-8.67(d,1H),8.12(s,1H),7.89-7.87(m,2H),7.80(s,1H),7.76-7.73(d,1H),7.68-7.66(m,2H),7.61-7.59(m,1H),7.49-7.47(m,1H),7.28-7.26(m,1H),6.17(s,1H),5.32-5.30(m,1H),4.73(s,1H),4.61(s,1H),4.48(s,1H),4.41-4.40(m,3H),3.95-3.93(m,2H),2.15-2.14(m,1H),1.36-1.31(m,1H),0.55-0.53(m,4H)。
[0354]
实施例13
[0355]
(R)-2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-N-(1-(4-((环丙基甲基)磺酰基)苯基)-2-羟乙基)-1-(2-氟代乙基)-1H-吲哚-5-甲酰胺13
[0356]
[0357]
[0358]
第一步
[0359]
(4-溴苯基)(环丙基甲基)硫醚13c
[0360]
将4-溴苯硫酚13a(2.00g,10.58mmol)溶于15mL N,N-二甲基甲酰胺中,加入碳酸钾(1.61g,11.64mmol)和溴甲基环丙烷13b(1.57g,11.64mmol),
[0361]
氩气保护,室温搅拌反应16小时。过滤,减压浓缩滤液,用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物,制得标题化合物13c(2.5g,97.2%)。
[0362]
第二步
[0363]
1-溴-4-((环丙基甲基)磺酰基)苯13d
[0364]
将化合物13c(2.57g,10.58mmol)溶于50mL二氯甲烷中,放入冰水浴中冷却,加入间氯过氧苯甲酸(4.60g,26.42mmol),室温搅拌反应16小时。过滤,减压浓缩反应液,用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物,制得标题化合物13c(2.9g,88.3%)。
[0365]
MS m/z(ESI):292[M+18]。
[0366]
第三步
[0367]
1-((环丙基甲基)磺酰基)-4-乙烯基苯13f
[0368]
将4-(环丙基甲基)磺酰基溴苯13d(2.48g,9.01mmol)溶于80mL 1,4-二氧六环中,加入10mL水,加入乙烯基硼酸频哪醇酯13e(2.78g,18.03mmol)和四三苯基膦钯(520.49mg,450.64μmol),再加入碳酸铯(5.88g,18.03mmol),氩气保护,加热至80℃搅拌反应2小时。减压浓缩反应液,用高效液相色谱法纯化所得残余物,制得标题化合物13f(1.83g,91.3%)。
[0369]
MS m/z(ESI):240[M+18]。
[0370]
第四步
[0371]
(R)-(1-(4-(环丙基甲基磺酰基)苯基)-2-羟乙基)氨基甲酸叔丁酯13g
[0372]
将氢氧化钠(1.00g,24.70mmol)溶于15mL水中,取5mL溶解二水合锇酸钾(121.18mg,329.28μmol)备用,室温下将叔丁基氨基甲酸酯(3.38g,28.81mmol)溶于100mL正丙醇中,与上述氢氧化钠水溶液混合,室温滴加叔丁基次氯酸酯(2.68 g,24.70mmol),加完搅拌5分钟,加入氢化奎尼定1,4-(2,3-二氮杂萘)二醚(384.64mg,493.92μmol),室温搅拌反应10分钟。滴加预制的20mL4-环丙基甲基磺酰基苯乙烯13f(1.83g,8.23mmol)的正丙醇溶液和5mL二水合锇酸钾氢氧化钠溶液,加完室温搅拌反应5小时。用饱和硫代硫酸钠溶液淬灭反应,乙酸乙酯萃取(1000mL×2),合并有机相,用无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩,用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物,得标题化合物13g(1.3g,产率:44.43%)。
[0373]
MS m/z(ESI):256[M-100+1]。
[0374]
第五步
[0375]
(R)-2-氨基-2-(4-((环丙基甲基)磺酰基)苯基)乙醇13h
[0376]
将化合物13g(1.30g,3.66mmol)溶于10mL甲醇中,加入4mL浓盐酸,室温搅拌反应2小时。减压浓缩反应液,得标题化合物13h(0.9g,96.4%)。
[0377]
第六步
[0378]
(R)-2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-N-(1-(4-((环丙基甲基)磺酰基)苯基)-2-羟乙基)-1-(2-氟代乙基)-1H-吲哚-5-甲酰胺13
[0379]
将化合物2d(200mg,500.29μmol)溶于5mL N,N-二甲基甲酰胺中,加入化合物13h(218.97mg,750.44μmol)和N,N-二异丙基乙胺(129.32mg,1.00mmol),再加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(235.41mg,1.00mmol),室温搅拌反应2小时。减压浓缩反应液,用高效液相色谱法纯化所得残余物,制得标题化合物13(41mg,12.8%)。
[0380]
MS m/z(ESI):637[M+1]。
[0381]
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ8.13-8.12(d,1H),7.97-7.95(m,2H),7.76-7.75(m,1H),7.65-7.63(m,2H),7.47-7.45(m,1H),7.39-7.38(d,1H),7.20-7.16(m,1H),7.13-7.11(m,1H),6.30(s,1H),5.39-5.35(m,1H),4.70-4.68(t,1H),4.59-4.56(t,1H),4.38-4.35(m,3H),4.31-4.29(m,1H),4.15-4.11(dd,1H),4.08-4.04(dd,1H),3.05-3.04(d,2H),1.09-1.05(m,1H),0.64-0.59(m,2H),0.24-0.20(m,2H)。
[0382]
实施例14
[0383]
(R)-N-(1-(4-((环丙基甲基)磺酰基)苯基-2-羟乙基)-2-(4-氟-2-(三氟甲基)苄基)-1-(2-氟代乙基)-1H-吲哚-5-甲酰胺14
[0384]
[0385]
[0386]
第一步
[0387]
2-(4-氟-2-(三氟甲基)苄基)-1H-吲哚-5-甲酸甲酯14b
[0388]
将4-氟-2-三氟甲基苄溴14a(2.29g,8.90mmol),化合物1b(1.30g,7.42mmol),双(乙腈)二氯化钯(II)(385.05mg,1.48mmol),双环[2.2.1]-2-庚烯(698.67mg,7.42mmol)和碳酸钠(1.57g,14.84mmol)加入20mL N,N-二甲基乙酰胺中,氩气氛下,加热至80℃,搅拌16小时。反应液冷却至室温,过滤,滤液倒入水中,乙酸乙酯萃取,合并有机相,无水硫酸钠干燥。过滤,滤液减压浓缩,用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物,得到标题化合物14b(2.0g,产率:76.7%)。MS m/z(ESI):350[M-1]。
[0389]
第二步
[0390]
2-(4-氟-2-(三氟甲基)苄基)-1-(2-氟代乙基)-1H-吲哚-5-甲酸甲酯14c
[0391]
将化合物14b(140mg,398.53μmol),1-氟-2-碘-乙烷(151.2mg,1.20mmol)和碳酸铯(389.54mg,1.20mmol)加入15mL乙腈中,微波条件下100℃反应1小时。反应液倒入水中,乙酸乙酯萃取,合并有机相,无水硫酸钠干燥。过滤,滤液减压浓缩,用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物,得到标题化合物14c(135mg,产率:85.25%)。
[0392]
MS m/z(ESI):396[M-1]。
[0393]
第三步
[0394]
2-(4-氟-2-(三氟甲基)苄基)-1-(2-氟代乙基)-1H-吲哚-5-甲酸14d
[0395]
将化合物14c(135mg,339.76μmol)和氢氧化钠(37.05mg,926.39μmol)加入6mL甲醇和0.5mL水的混合溶剂中,60℃搅拌反应2小时。减压浓缩除去甲醇,所得残余物中滴加1M稀盐酸调节pH~3,乙酸乙酯萃取,有机相用无水硫酸钠干燥。过滤,滤液减压浓缩,得到粗品标题化合物14d(130mg),产物不经纯化直接用于下一步反应。
[0396]
MS m/z(ESI):382[M-1]。
[0397]
第四步
[0398]
(R)-N-(1-(4-((环丙基甲基)磺酰基)苯基-2-羟乙基)-2-(4-氟-2-(三氟甲基)苄 基)-1-(2-氟代乙基)-1H-吲哚-5-甲酰胺14
[0399]
将化合物14d(300mg,782.65μmol)溶于5mL N,N-二甲基甲酰胺中,加入化合物13h(342.56mg,1.17mmol)和N,N-二异丙基乙胺(202.3mg,1.57mmol),再加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(594.82mg,1.57mmol),室温搅拌反应2小时。减压浓缩反应液,用高效液相色谱法纯化所得残余物,制得标题化合物14(200mg,41.2%)。
[0400]
MS m/z(ESI):621[M+1]。
[0401]
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ8.13-8.12(d,1H),7.94-7.92(m,2H),7.77-7.74(m,1H),7.63-7.61(m,2H),7.50-7.47(m,1H),7.36-7.34(d,1H),7.25-7.23(m,1H),7.20-7.14(m,1H),6.30(s,1H),5.39-5.35(m,1H),4.69-4.67(t,1H),4.58-4.55(t,1H),4.38-4.35(m,3H),4.32-4.29(m,1H),4.12-4.08(dd,1H),4.05-4.01(dd,1H),3.05-3.02(d,2H),1.05-0.98(m,1H),0.64-0.59(m,2H),0.24-0.20(m,2H)。
[0402]
实施例15
[0403]
(R)-2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-N-(1-(4-(环丙基磺酰基)苯基)-2-羟乙基)-1-(2-氟代乙基)-1H-吲哚-5-甲酰胺15
[0404]
[0405]
第一步
[0406]
1-((环丙基)磺酰基)-4-乙烯基苯15b
[0407]
将4-环丙基磺酰基溴苯15a(315mg,1.21mmol)溶于20mL 1,4-二氧六环中,加入5mL水,加入化合物13e(223mg,1.45mmol)和四三苯基膦钯(55.8mg,48.25μmol),再加入碳酸铯(786.5mg,2.41mmol),氩气保护,加热至80℃搅拌反应2小时。减压浓缩反应液,用高效液相色谱法纯化所得残余物,制得标题化合物15b(210mg,83.6%)。
[0408]
MS m/z(ESI):226[M+18]
[0409]
第二步
[0410]
(R)-(1-(4-(环丙基磺酰基)苯基)-2-羟乙基)氨基甲酸叔丁酯15c
[0411]
将氢氧化钠(121mg,3.02mmol)溶于15mL水中,取5mL溶解二水合锇酸钾(14.84mg,40.33μmol)备用,室温下将叔丁基氨基甲酸酯(413.3mg,3.53mmol)溶于10mL正丙醇中,与上述氢氧化钠水溶液混合,室温滴加叔丁基次氯酸酯(328.4mg,3.02mmol),加完搅拌5分钟,加入氢化奎尼定1,4-(2,3-二氮杂萘)二醚(47.13mg,60.5μmol),室温搅拌反应10分钟。滴加10mL化合物15b(0.21g,1.01mmol)正丙醇溶液和5mL二水合锇酸钾氢氧化钠溶液,加完室温搅拌反应5小时。用饱和硫代硫酸钠溶液淬灭反应,乙酸乙酯萃取(50mL×2),合并有机相,用无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩,用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物,得标题化合物15c(133mg,产率:38.6%)。
[0412]
MS m/z(ESI):242[M-100+1]
[0413]
第三步
[0414]
(R)-2-氨基-2-(4-((环丙基)磺酰基)苯基)乙醇15d
[0415]
将化合物15c(133mg,389.56μmol)溶于10mL甲醇中,加入4mL浓盐酸,室温搅拌反应2小时。减压浓缩反应液,得标题化合物15d(90mg,96.4%)。
[0416]
第四步
[0417]
(R)-2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-N-(1-(4-(环丙基磺酰基)苯基)-2-羟乙基)-1-(2-氟代乙基)-1H-吲哚-5-甲酰胺15
[0418]
将化合物2d(150mg,375.22μmol)溶于5mL N,N-二甲基甲酰胺中,加入化合物15d(90.54mg,375.22μmol)和N,N-二异丙基乙胺(97.00mg,750.44μmol),再加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(285.41mg,750.44μmol),室温搅拌反应2小时。减压浓缩反应液,用高效液相色谱法纯化所得残余物,制得标题化合物15(100mg,42.8%)。
[0419]
MS m/z(ESI):621[M-1]。
[0420]
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ8.13(s,1H),7.94-7.92(m,2H),7.77-7.75(m,2H),7.64-7.62(m,2H),7.48-7.45(m,1H),7.38-7.36(m,1H),7.15-7.12(m,2H),6.34(s,1H),5.41-5.38(m,1H),4.70-4.68(t,1H),4.60-4.56(t,1H),4.38-4.36(m,3H),4.31-4.29(m,1H),4.16-4.12(dd,1H),4.09-4.05(dd,1H),2.51-2.46(m,1H),1.41-1.37(m,2H),1.09-1.05(m,2H)。
[0421]
实施例16
[0422]
(R)-2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-N-(1-(4-(乙磺酰基)苯基)-2-甲氧基乙基)-1-(2-氟代乙基)-1H-吲哚-5-甲酰胺16
[0423]
[0424]
[0425]
第一步
[0426]
(R)-(1-(4-(乙磺酰基)苯基)-2-羟乙基)氨基甲酸叔丁酯16a
[0427]
将化合物5e(50mg,218.06μmol)溶于6mL二氯甲烷中,0℃下加入三乙胺(44.63mg,436.12μmol)和二碳酸二叔丁酯(95.07mg,436.12μmol),搅拌反应1小时,加入冰水淬灭反应,乙酸乙酯萃取,有机相用无水硫酸钠干燥。过滤,滤液减压浓缩,粗品用薄层色谱法以洗脱剂体系B纯化得化合物16b(45mg,产率:62.6%)。
[0428]
MS m/z(ESI):230.2[M-100+1]。
[0429]
第二步
[0430]
(R)-(1-(4-(乙基磺酰基)苯基)-2-甲氧基乙基)氨基甲酸叔丁酯16b
[0431]
将化合物16a(50mg,151.79μmol)溶于6mL四氢呋喃中,0℃下加入氢化钠(11.63mg,303.57μmol)搅拌反应10分钟,加入碘甲烷(23.70mg,166.96μmol),搅拌反应2小时,加入冰水淬灭反应,乙酸乙酯萃取,有机相用无水硫酸钠干燥。过滤,滤液减压浓缩,粗品用薄层色谱法以洗脱剂体系B纯化,得化合物16b(45mg,产率:86.32%)。
[0432]
第三步
[0433]
(R)-1-(4-(乙基磺酰基)苯基)-2-甲氧基乙胺16c
[0434]
将化合物16b(45mg,131.03μmol)溶于10mL二氯甲烷中,加入三氟乙酸(298.80mg,2.62mmol),室温搅拌反应16小时。减压浓缩,得到粗品标题化合物16c(40mg),产物不经纯化直接用于下一步反应。
[0435]
第四步
[0436]
(R)-2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-N-(1-(4-(乙磺酰基)苯基)-2-甲氧基乙基)-1-(2-氟代乙基)-1H-吲哚-5-甲酰胺16
[0437]
将化合物2d(44.75mg,111.94μmol),粗品化合物16c(40.00mg,111.94μmol)溶于20mL N,N-二甲基甲酰胺中,加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(31.60mg,134.32μmol)和N,N-二异丙基乙胺(43.40mg,335.81μmol),室温搅拌16小时。反应液加水,用乙酸乙酯萃取,合并有机相,无水硫酸钠干燥。过滤,滤液减压浓缩,用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物,得到标 题化合物16(25mg,产率:35.73%)。
[0438]
MS m/z(ESI):625.6[M+1]
[0439]
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ8.07(s,1H),7.87-7.85(d,2H),7.73-7.71(m,2H),7.62-7.60(m,2H),7.43-7.41(m,1H),7.34-7.31(m,1H),7.15-7.08(m,2H),6.28(s,1H),5.44-5.40(m,1H),4.66-4.64(m,1H),4.55-4.52(m,1H),4.34-4.29(m,3H),4.28-4.25(m,1H),3.83-3.74(m,2H),3.39(s,3H),3.12-3.06(m,2H),1.29-1.26(m,3H)。
[0440]
实施例17(对照例)
[0441]
(R)-2-(4-(三氟甲基)苄基)-N-(1-(4-(乙基磺酰基)苯基)-2-羟乙基)-1-(2-氟代乙基)-1H-吲哚-5-甲酰胺17
[0442]
[0443]
第一步
[0444]
2-(4-(三氟甲基)苄基)-1H-吲哚-5-甲酸甲酯17b
[0445]
将化合物1b(1.00g,5.71mmol),4-(三氟甲基)苄溴17a(16.40g,6.86mmol)溶于15mL N,N-二甲基乙酰胺中,加入双(乙腈)二氯化钯(II)(296.17m g,1.14mmol),双环[2.2.1]-2-庚烯(1.1g,11.68mmol)和碳酸钠(1.22g,11.51mmol),氩气氛下,加热至80℃搅拌反应17小时。冷却反应液,过滤,滤液减压浓缩,用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物,得到标题化合物17b(1.60g,产率:84.10%)。
[0446]
MS m/z(ESI):334.1[M+1]。
[0447]
第二步
[0448]
2-(4-(三氟甲基)苄基)-1-(2-氟代乙基)-1H-吲哚-5-甲酸甲酯17c
[0449]
将化合物17b(500mg,1.50mmol),1-氟-2-溴-乙烷(381.0mg,3.0mmol)和碳酸铯(976mg,2.0mmol)加入10mL乙腈中,微波条件下100℃反应1小时。反应液倒入水中,乙酸乙酯萃取,合并有机相,无水硫酸钠干燥。过滤,滤液减压浓缩,用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物,得到标题化合物17c(500mg,产率:87.86%)。
[0450]
MS m/z(ESI):380.1[M+1]。
[0451]
第三步
[0452]
2-(4-(三氟甲基)苄基)-1-(2-氟代乙基)-1H-吲哚-5-甲酸17d
[0453]
将化合物17c(500mg,1.32mmol)和氢氧化钠(527.2mg,13.18mmol)加入10mL甲醇和2mL水的混合溶剂中,60℃搅拌反应2小时。减压浓缩除去甲醇,所得残余物中滴加1M稀盐酸调节pH~3,乙酸乙酯萃取,有机相用无水硫酸钠干燥。过滤,滤液减压浓缩,得到粗品标题化合物17d(500mg),产物不经纯化直接用于下一步反应。
[0454]
MS m/z(ESI):366.1[M+1]。
[0455]
第四步
[0456]
(R)-2-(4-(三氟甲基)苄基)-N-(1-(4-(乙基磺酰基)苯基)-2-羟乙基)-1-(2-氟代乙基)-1H-吲哚-5-甲酰胺17
[0457]
将(R)-2-氨基-2-(4-(乙磺酰基)苯基)乙醇5e(76mg,0.33mmol),粗品化合物17d(100mg,0.27mmol),O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’N’-四甲基脲六氟磷酸酯(125mg,0.33mmol),和N,N-二异丙基乙胺(54mg,0.42mmol)加入5mL N,N-二甲基甲酰胺中,室温搅拌16小时。反应液用乙酸乙酯萃取,合并有机相,无水硫酸钠干燥。过滤,滤液减压浓缩,用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物,得到标题化合物17(46mg,产率:29.14%)。
[0458]
MS m/z(ESI):577.1[M+1]。
[0459]
1H NMR(400MHz,CD 3OD)δ8.65(d,1H),8.12(s,1H),7.88(d,2H),7.86(d,3H),7.63(d,2H),7.46-7.43(m 3H),6.3(s,1H),5.3(d,1H),4.64-4.62(t,1H),4.52-4.5(t,1H),4.47-4.45(t,1H),4.41-4.38(t,1H),4.10(d,2H),3.92(d,2H),3.22-3.16(m 2H),1.26-1.19(m,3H)。
[0460]
生物学评价
[0461]
以下结合测试例进一步描述解释本发明,但这些实施例并非意味着限制本发明的范围。
[0462]
测试例1、本发明化合物对RORγ体外活性的测定
[0463]
一、实验材料及仪器
[0464]
1. TR-FRET RORγ共激活体系(Life Technologies)
[0465]
2.RORγLBD(AB Vector)
[0466]
3.DMSO(SigmaAldrich)
[0467]
4.酶标仪(Tecan)
[0468]
二、实验步骤
[0469]
采用LanthaScreen TR-FRET(时间分辨荧光能量共振转移)RORγ共激活体系筛选本发明的化合物对RORγ活性的调节。
[0470]
首先配制完整缓冲液D(complete TR-FRET Coregulator)(Life Technologies)包含终浓度5mM DTT。DMSO终浓度为2%。将待测化合物在含有2%DMSO的完整缓冲液D中连续稀释为2x终浓度,最高剂量为的60μm。10μl/孔加入384孔板的试验孔(PerkinElmer)。每个检测化合物在相同浓度下设置2个平行对照孔。准备4X RORγLBD(AB Vector)。使用完整缓冲液D稀释RORγLBD浓度为1ng/μL。5μl/孔加入384孔测定板的试验孔。阴性对照孔为5μL完整缓冲液D,无RORγLBD。使用完全缓冲液D配制含有0.6μM荧光素-D22(4X)和8nM铽(Tb)标记的抗GST抗体(4X)(Life Technologies)混合液,将5μL混合液加入到384孔板中。总反应体系为20μL。在振荡器上轻轻混匀该384孔板并在室温下避光孵育2-4小时。
[0471]
使用Tecan Infinite M1000检测荧光读数,通过GraphPad Prism 6.0软件绘制发射波长520nm/495nm的比值与化合物浓度的对数曲线,计算待测化合物的EC 50/IC 50值。
[0472]
本发明化合物对RORγ体外活性通过以上的试验进行测定,测得的EC 50值见表1。
[0473]
表1 本发明化合物对RORγ体外活性的EC 50值和对照例的IC 50值。
[0474]
[0475]
[0476]
a:如果是激动剂,数值标示为EC 50;如果是反激动剂,数值标示为IC 50
[0477]
b:如果是激动剂,数据表示为Emax(%);如果是反激动剂,数值表示为最大抑制率。
[0478]
结论:本发明化合物对RORγ体外活性具有明显的激动作用,同时申请人发现环A邻位基团的变化会改变其调节效果,当环A邻位基团为位阻较小的基团(例如H)时的实施例17为反激动剂。
[0479]
测试例2、本发明化合物对IL-17A酶联免疫定量分析活性测定
[0480]
一、实验材料及仪器
[0481]
1.人外周血单核细胞(PBMC)(Zenbio)
[0482]
2.淋巴细胞培养基(Zenbio)
[0483]
3.TexMACS(Miltenyi Biotec)
[0484]
4.人Cytostim(Miltenyi Biotec)
[0485]
5.人IL-17酶联免疫试剂盒(R&D系统)
[0486]
6.CO 2培养箱(Fisher Scientific)
[0487]
7.离心机(Fisher Scientific)
[0488]
8.96孔细胞培养板(Fisher Scientific)
[0489]
9.酶标仪(Tecan)
[0490]
二、实验步骤
[0491]
将冻存的人外周血单核细胞(PBMC)在预热的淋巴细胞培养基中快速复苏,离心1000rpm,10min,除去细胞培养上清,将细胞轻轻悬浮于TexMACS培养基中,计数细胞。在细胞悬液中按比例加入T细胞激活试剂cytostim(10μl/ml),然后以1×10 5外周血单核细胞/孔的密度将细胞种植于96孔细胞培养板中。使用TexMACS培养基梯度稀释待测化合物,分别加入各实验孔中,每组2-3个平行孔。准备只含细胞不含cytostim的阴性对照孔,以得到背景读数。将细胞培养板放置于5%二氧化碳37℃培养箱孵育3天。药物处理3天后收取细胞培养上清液,离心去除悬浮物。然后使用IL-17A酶联免疫试剂盒定量上清液中IL-17A。使用GraphPad Prism 6.0计算待测化合物的EC 50值。
[0492]
本发明化合物对IL-17A酶联免疫定量分析通过以上的试验进行测定,测得的EC 50值见表2。
[0493]
表2 本发明化合物对IL-17A酶联免疫定量分析的EC 50
[0494]
[表0001]
实施例编号 EC 50(nM) Emax(%)
2 90 82%
3 169 136%
4 85 93%
11 276 72%

[0495]
[表0002]
12 25 71%
13 27 65%
14 42 99%
16 8 99%

[0496]
结论:本发明化合物对IL-17A酶联免疫定量分析活性具有明显的调节作用。
[0497]
药代动力学评价
[0498]
测试例3、本发明化合物的小鼠药代动力学测试
[0499]
1、摘要
[0500]
以小鼠为受试动物,应用LC/MS/MS法测定了小鼠灌胃给予实施例4化合物后不同时刻血浆中的药物浓度。研究本发明化合物在小鼠体内的药代动力学行为,评价其药动学特征。
[0501]
2、试验方案
[0502]
2.1试验药品
[0503]
实施例4化合物。
[0504]
2.2试验动物
[0505]
C57小鼠9只为1组,雌性,购自上海杰思捷实验动物有限公司,动物生产许可证号:SCXK(沪)2013-0006。
[0506]
2.3药物配制
[0507]
称取一定量药物,加5%体积的DMSO、5%体积的吐温80和90%生理盐水配置成0.1mg/ml无色澄清透明液体。
[0508]
2.4给药
[0509]
C57小鼠禁食过夜后灌胃给药,给药剂量均为2.0mg/kg,给药体积均为0.2ml/10g。
[0510]
3、操作
[0511]
小鼠灌胃给药实施例4化合物,于给药前及给药后0.25,0.5,1.0,2.0,4.0,6.0,8.0,11.0,24.0小时采血0.1ml(每个时间点3只动物),置于肝素化试管中,3500转/分钟离心10分钟分离血浆,于-20℃保存。
[0512]
测定不同浓度的药物灌胃给药后小鼠血浆中的待测化合物含量:取给药后各时刻的小鼠血浆25μl,加入内标溶液喜树碱80μl(100ng/mL),乙腈200μl,涡旋混合5分钟,离心10分钟(3600转/分钟),血浆样品取上清液1μl进行LC/MS/MS分析。
[0513]
4、药代动力学参数结果
[0514]
本发明化合物的药代动力学参数如下:
[0515]
[0516]
[0517]
结论:本发明化合物的药代吸收较好,具有药代动力学优势。
[0518]
药效学评价
[0519]
测试例4、RORγ激动剂在同种型MC38结肠直肠肿瘤小鼠模型的药效
[0520]
1.实验目的
[0521]
用MC38小鼠模型来评估实施例4化合物对MC38肿瘤生长的抑制作用。
[0522]
2.实验方法和实验材料
[0523]
2.1.实验动物和饲养条件
[0524]
实验用雌性C57BL/6小鼠,购自Charles River Lab(美国),购入时20-25克,7-9周龄。10只/笼饲养,温度23±1℃恒温,湿度50~60%,自由进食进水。一切按照实验动物护理和使用委员会(IACUC批准指南)进行护理和使用。动物购进后,进行7天适应性饲养后开始实验。
[0525]
2.2.实验药品
[0526]
实施例4化合物;
[0527]
抗鼠PD-1(CD279)抗体购自BioXcell(克隆RMP1-14;目录编号BP0146);
[0528]
IgG2a同型对照抗体购自BioXcell(克隆2A3;目录编号BE0089)。
[0529]
2.3.实验设计和实验方法
[0530]
2.3.1.动物分组:
[0531]
小鼠适应性饲养后,分组如下:
[0532]
[表0003]
分组 n 给药方式 给药方案
IgG2a同型对照抗体加载体对照组 8 腹腔注射/口服 Q3dx4/BIDx21
抗鼠PD-1抗体 8 腹腔注射 Q3dx4
实施例4化合物 8 口服 BIDx21
抗鼠PD-1抗体加实施例4化合物 8 腹腔注射/口服 Q3dx4/BIDx21

[0533]
注:1.Q3dx4代表每隔三天给药,总共给四次,固定在第5,8,11,14天给药;
[0534]
2.BIDx21代表每天给药2次,连续给药21天;
[0535]
2.3.2.实验方法:
[0536]
实验使用雌性C57BL/6小鼠(20-25克,7-9周龄)。通过检测同种型MC38结肠直肠肿瘤(Synta Pharmaceuticals)在自交系C57BL/6小鼠的生长情况评估单独施用实施例4化合物或实施例4化合物与抗鼠-PD-1抗体联合施用的体内抗肿瘤活性。将五十万(5×10 5)MC38细胞植入每只小鼠的右侧腹部皮下,待5天后当肿瘤生长至40-80mm 3后,将小鼠随机分组,每天施用实施例4化合物(30mg/kg) 2次,连续给药21天。在抗体单用或与实施例4化合物联合施用治疗实验中,固定在第5、8、11、14天分别对携带MC38肿瘤的小鼠腹腔(i.p.)注射抗鼠PD-1(CD279)抗体(BioXcell)(5mg/kg)。对照组是载体CMC-Na药剂配方与IgG2a同型对照抗体。
[0537]
2.4.数据表达:
[0538]
用卡尺在三个维度中测量肿瘤体积,然后根据下式计算:肿瘤体积(mm 3)=l×w×h×0.5236,其中,1表示肿瘤长度,w表示肿瘤的宽度,h表示肿瘤的高度,单位为毫米。肿瘤生长抑制率TGI%=100x(TV 对照-TV 肿瘤)/(TV 对照-TV 初始),其中TV 对照=对照组的肿瘤体积;TV 肿瘤=治疗组的肿瘤体积;TV 初始=5天时起始肿瘤体积。
[0539]
3.结果和讨论:
[0540]
如图1所示,单独施用30mg/kg实施例4化合物时,TGI为40%。单独注射抗鼠PD-1(CD279)抗体(5mg/kg)时,TGI为51%。当与抗鼠PD-1单克隆抗体(5mg/kg)联合施用时,实施例4化合物(30mg/kg)表现出协同效应(TGI为63%。这些数据表明了在同基因的MC38结肠直肠肿瘤模型中,单独施用实施例4化合物表现出抑瘤活性,同时实施例4化合物与PD-1抗体联合施用表现出协同作用,这也表明实施例4化合物具有与RORγ激活(而非抑制)一致的生物活性,为提高免疫治疗的疗效开辟了新途径。

权利要求书

[权利要求 1]
一种通式(I)所示的化合物: 或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式,或其可药用的盐, 其中: 为双键或单键; G 1、G 2和G 3相同或不同,且各自独立地选自C、CH、CH 2或N; 环A选自芳基、杂芳基、环烷基和杂环基; R 1相同或不同,且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、氰基、氨基、硝基、羟基和羟烷基; R 2为卤代烷基; R 3选自烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、羟烷基、卤素、氰基、氨基、硝基、羟基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基,其中所述的烷基、卤代烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自羟基、卤素、烷基、烷氧基和氨基中的一个或多个取代基所取代; R 4相同或不同,且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、氰基、氨基、硝基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基; R 5选自氢原子、烷基、卤代烷基、氨基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、NR 10R 11、芳基和杂芳基,其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自羟基、卤素、烷基、氨基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取代; R 6相同或不同,且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、氰基、氨基、硝基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基; R 7选自氢原子、烷基、卤代烷基、环烷基和杂环基,其中所述的烷基任选被选自卤素、硝基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取代; R 8和R 9相同或不同,且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、氰基、氨基、硝基、羟基和羟烷基; R 10和R 11相同或不同,且各自独立地选自氢原子、烷基、卤代烷基、氨基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基; n为0、1、2、3或4; s为0、1、2或3;且 t为0、1、2或3。
[权利要求 2]
根据权利要求1所述的通式(I)所示的化合物,其为通式(IA)所示的化合物: 其中: R a为氢原子或烷基; 环A、G 1~G 3、R 1、R 4~R 7、n、s和t如权利要求1中所定义。
[权利要求 3]
根据权利要求1或2所述的通式(I)所示的化合物,其为通式(II)所示的化合物: 其中: 环A、G 1~G 3、R 1、R 4~R 7、n、s和t如权利要求1中所定义。
[权利要求 4]
根据权利要求1~3中任一项所述的通式(I)所示的化合物,其中环A选自 苯基、吡啶基、咪唑基、吡唑基和吗啉基。
[权利要求 5]
根据权利要求1~4中任一项所述的通式(I)所示的化合物,其为通式(III)所示的化合物: 其中: R 1、R 5~R 7、n和t如权利要求1中所定义。
[权利要求 6]
根据权利要求1~5中任一项所述的通式(I)所示的化合物,其为通式(IV)所示的化合物: 其中: R 1、R 5~R 7、n和t如权利要求1中所定义。
[权利要求 7]
根据权利要求1~6中任一项所述的通式(I)所示的化合物,其中R 1选自氢原子、卤素和烷基。
[权利要求 8]
根据权利要求1~7中任一项所述的通式(I)所示的化合物,其中R 5选自烷基、NR 10R 11或环烷基,其中所述的烷基或环烷基各自独立地任选被选自羟基、卤素、烷基、氨基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取代;R 10和R 11如权利要求1中所定义。
[权利要求 9]
根据权利要求1~8中任一项所述的通式(I)所示的化合物,其中R 6为氢原子或卤素。
[权利要求 10]
根据权利要求1~9中任一项所述的通式(I)所示的化合物,其中R 7选自烷基、环烷基和卤代烷基。
[权利要求 11]
根据权利要求1~10中任一项所述的通式(I)所示的化合物,其选自:
[权利要求 12]
一种药物组合物,其含有治疗有效量的根据权利要求1~11中任一项所述的通式(I)所示的化合物,以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
[权利要求 13]
根据权利要求12所述的药物组合物,其进一步含有抗PD-1抗体。
[权利要求 14]
根据权利要求1~11中任一项所述的通式(I)所示的化合物或根据权利要求12所述的药物组合物在制备ROR激动剂中的用途。
[权利要求 15]
根据权利要求1~11中任一项所述的通式(I)所示的化合物或根据权利要 求12所述的药物组合物作为ROR激动剂在制备用于预防和/或治疗肿瘤或癌症的药物中的用途。
[权利要求 16]
根据权利要求1~11中任一项所述的通式(I)所示的化合物或根据权利要求12所述的药物组合物与抗PD-1抗体联合在制备用于预防和/或治疗肿瘤或癌症的药物中的用途。

附图

[ 图 1]