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1. (WO2018223657) CHAOTROPIC AGENT AND METHOD FOR EXTRACTING GENOMIC DNA BY USING SAME
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Pub. No.: WO/2018/223657 International Application No.: PCT/CN2017/116735
Publication Date: 13.12.2018 International Filing Date: 17.12.2017
IPC:
C12N 15/10 (2006.01)
C CHEMISTRY; METALLURGY
12
BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
N
MICRO-ORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICRO-ORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
15
Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
09
Recombinant DNA-technology
10
Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
Applicants:
陈礼平 CHEN, Liping [CN/CN]; CN
王海英 WANG, Haiying [CN/CN]; CN
Inventors:
陈礼平 CHEN, Liping; CN
王海英 WANG, Haiying; CN
Agent:
丽水创智果专利代理事务所(普通合伙) LISHUI CHUANG ZHI GUO PATENT AGENCY (GENERAL PARTNER); 中国浙江省丽水市 莲都区卢镗街507号朱巧兴 ZHU, Qiaoxing No. 507, Lutang Street, Liandu District Lishui, Zhejiang 323000, CN
Priority Data:
201710413739.905.06.2017CN
Title (EN) CHAOTROPIC AGENT AND METHOD FOR EXTRACTING GENOMIC DNA BY USING SAME
(FR) AGENT CHAOTROPE ET PROCÉDÉ D'EXTRACTION D'ADN GÉNOMIQUE À L'AIDE DE CELUI-CI
(ZH) 一种离液剂以及使用该离液剂提取基因组DNA的方法
Abstract:
(EN) A chaotropic agent and a method for extracting genomic DNA by using same. The chaotropic agent contains sodium bromate, and the compound can quickly and effectively separate histone in a nucleosomal structure from genomic DNA. The method for extracting genomic DNA by using the chaotropic agent comprises the following steps: adding a cell lysis solution to a sample to rupture cells; then mixing the sample with a chaotropic agent uniformly to obtain a material in which histone and genomic DNA are separated; adding protein extracting liquid, followed by uniform mixing and centrifugation, to obtain supernatant after protein is extracted; and mixing the supernatant with a DNA precipitant, and centrifuging the mixture to obtain a DNA precipitate. Compared with a method using sodium perchlorate, this method is different in the type of the chaotropic agent, and has lower valence and more appropriate yield and purity of the genomic DNA. Compared with a conventional proteinase K method, this method requires no long-time digestion, saves a great deal of time, overcomes the defect of susceptibility to change in protease K activity and the disadvantage of inadequate digestion, and features good repeatability and high stability.
(FR) L'invention concerne un agent chaotrope et un procédé d'extraction d'ADN génomique à l'aide de celui-ci. L'agent chaotrope contient du bromate de sodium, et le composé permet de réaliser une séparation rapide et efficace entre l'histone dans une structure nucléosomique et de l'ADN génomique. Le procédé d'extraction d'ADN génomique à l'aide de l'agent chaotrope comprend les étapes suivantes : ajouter une solution de lyse cellulaire à un échantillon pour rompre des cellules; puis mélanger l'échantillon avec un agent chaotrope de façon uniforme pour obtenir un matériau dans lequel l'histone et l'ADN génomique sont séparés; ajouter un liquide d'extraction de protéine, suivi d'un mélange et d'une centrifugation uniformes, pour obtenir un surnageant après extraction de la protéine; et mélanger le surnageant avec un agent précipitant d'ADN, et centrifuger le mélange pour obtenir un précipité d'ADN. Par comparaison avec un procédé utilisant du perchlorate de sodium, ce procédé est différent en ce qui concerne le type de l'agent chaotrope, et présente une valence inférieure ainsi qu'un rendement et une pureté plus appropriés de l'ADN génomique. Par comparaison avec un procédé de protéinase K classique, ce procédé ne nécessite pas de digestion à long terme, fait gagner beaucoup de temps, surmonte le défaut de susceptibilité à un changement d'activité de protéase K et l'inconvénient d'une digestion inadéquate, et présente une bonne répétabilité et une stabilité élevée.
(ZH) 一种离液剂以及使用该离液剂提取基因组DNA的方法。所述离液剂含有溴酸钠,该化合物能将核小体结构中的组蛋白与基因组DNA快速有效分离。使用该离液剂提取基因组DNA的方法包括如下步骤:在样本中加入细胞裂解液使细胞破裂;然后与离液剂混匀,得到组蛋白与基因组DNA分离后的物料;加入蛋白抽提液,混匀,离心后得到蛋白被抽提后的上清液;将上清液与DNA沉淀剂混合,离心后得到DNA沉淀。该方法具有以下优点:和高氯酸钠法相比,离液剂种类不同,且化合价更低,基因组DNA的得率和纯度相当。和传统蛋白酶K法相比,该方法无需长时间消化,节省大量时间,避免蛋白酶K活性易变化的缺陷和消化不充分的劣势,重复性好、稳定性高。
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Publication Language: Chinese (ZH)
Filing Language: Chinese (ZH)