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1. (WO2018185301) SYSTEM FOR THE ADAPTATION OF CELL-BASED ASSAYS FOR ANALYSIS ON AUTOMATED IMMUNO-ASSAY PLATFORMS
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Pub. No.: WO/2018/185301 International Application No.: PCT/EP2018/058890
Publication Date: 11.10.2018 International Filing Date: 06.04.2018
IPC:
C07K 16/24 (2006.01) ,G01N 33/50 (2006.01) ,G01N 33/68 (2006.01) ,C07K 14/715 (2006.01) ,C07K 14/47 (2006.01) ,C12Q 1/6897 (2018.01)
C CHEMISTRY; METALLURGY
07
ORGANIC CHEMISTRY
K
PEPTIDES
16
Immunoglobulins, e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
18
against material from animals or humans
24
against cytokines, lymphokines or interferons
G PHYSICS
01
MEASURING; TESTING
N
INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
33
Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/-G01N31/131
48
Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
50
Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
G PHYSICS
01
MEASURING; TESTING
N
INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
33
Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/-G01N31/131
48
Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
50
Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
68
involving proteins, peptides or amino acids
C CHEMISTRY; METALLURGY
07
ORGANIC CHEMISTRY
K
PEPTIDES
14
Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
435
from animals; from humans
705
Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
715
for cytokines; for lymphokines; for interferons
C CHEMISTRY; METALLURGY
07
ORGANIC CHEMISTRY
K
PEPTIDES
14
Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
435
from animals; from humans
46
from vertebrates
47
from mammals
[IPC code unknown for C12Q 1/6897]
Applicants: EURO-DIAGNOSTICA AB[SE/SE]; Box 50117 202 11 Malmö, SE
Inventors: TOVEY, Michael; FR
LALLEMAND, Christophe; FR
Agent: ZACCO DENMARK A/S; Arne Jacobsens Allé 15 2300 København S, DK
Priority Data:
17165502.007.04.2017EP
Title (EN) SYSTEM FOR THE ADAPTATION OF CELL-BASED ASSAYS FOR ANALYSIS ON AUTOMATED IMMUNO-ASSAY PLATFORMS
(FR) SYSTÈME POUR L'ADAPTATION DE DOSAGES À BASE DE CELLULES EN VUE D'UNE ANALYSE SUR DES PLATEFORMES DE DOSAGE IMMUNOLOGIQUE AUTOMATISÉES
Abstract:
(EN) Cell based assays are required for the detection of biological activity and hence are required for use as potency assays, detection of neutralizing antibodies and detection and quantification of the effector cell function of therapeutic antibodies or the quantification of the potency or neutralizing antibody response to virus vectors such as AAV vectors used in gene therapy. Cell-based assay are also required for the quantification of antibody mediated effector functions including complement-dependent cytotoxicity (CDC), antibody-dependent cellular phagocytosis (ADCP), and antibody- dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC). Cell based assays are difficult to adapt for use on automated immuno-assay platforms. Reporter-genes that encode readily visible proteins that can be quantified using fluorescence or luminescence such as luciferases (firefly, Renilla, Gaussia, Nano Luciferase etc), fluorescent proteins such as green fluorescent protein (GFP) or dsRED or an enzyme such as chloramphenicol acetyltransferase (CAT) or a protease and respond to signal transduction, that is directly related to the mechanism of action of a drug, can be used to quantify the potency of a drug following binding of a drug to a soluble target or cell surface target (receptor or other cell-surface molecule), anti-drug neutralizing antibodies, and therapeutic antibody induced effector cell function. The principal of the invention is that reporter-gene product or by-product produced either during the course of the cell-based assay or onconclusion of the cell based assay is quantified either in the cell medium or cell supernatant, for a secreted protein, or following lysis of the cells with a suitable passive lysis buffer. The reporter- gene product such as firefly luciferase is then detected in the cell medium or cell supernatant or cell lysate using an antibody pair (monoclonal or polyclonal) specific for the gene product such as a firefly luciferase labelled with the dual detection system specific for an ELISA or a particular automated assay platform such as Meso Scale Discovery electro- chemiluminescence (MSD-ECL), Luminex, SMC, Alpco, AlphaLISA, Gyros or label free detection using SPR such as the Biacore platform. The expression of the reporter-gene product such as firefly luciferase can be normalized with respect to the expression of a second reporter gene product such as Renilla luciferase or Nano Luciferase under the control of a constitutive promoter.
(FR) La présente invention concerne des dosages à base de cellules qui sont nécessaires pour la détection d'une activité biologique et, par conséquent, sont requis pour une utilisation en tant que tests d'activité biologique, la détection d'anticorps neutralisants et la détection et la quantification de la fonction de cellule effectrice d'anticorps thérapeutiques ou la quantification de la réponse d'anticorps de puissance ou de neutralisation à des vecteurs viraux tels que des vecteurs AAV utilisés en thérapie génique. Selon l'invention, le dosage à base de cellules est également nécessaire pour la quantification de fonctions effectrices induites par des anticorps, notamment la cytotoxicité dépendante du complément (CDC), la phagocytose cellulaire dépendante des anticorps (ADCP) et la cytotoxicité à médiation cellulaire dépendante des anticorps (ADCC). Les dosages à base de cellules sont difficiles à adapter pour une utilisation sur des plateformes de dosage immunologique automatisées. L'invention concerne également des gènes rapporteurs codant pour des protéines facilement visibles qui peuvent être quantifiées à l'aide de fluorescence ou de luminescence telles que des luciférases (luciole, Renilla, Gaussia, Nano-luciférase, etc.), des protéines fluorescentes telles que la protéine fluorescente verte (GFP) ou dsRED ou une enzyme telle que l'acétyltransférase de chloramphénicol (CAT) ou une protéase et répondent à la transduction de signal, qui est directement liée au mécanisme d'action d'un médicament, peuvent être utilisés pour quantifier la puissance d'un médicament suite à la liaison d'un médicament à une cible soluble ou à une surface cellulaire cible (réceptrice ou autre molécule de surface cellulaire). L'invention concerne en outre, des anticorps anti-médicament neutralisant et une fonction de cellule effectrice induite par un anticorps thérapeutique. Le principal objet de l'invention est que le produit de gène rapporteur ou le sous-produit réalisé soit au cours du dosage à base de cellules soit à l'issue du dosage à base de cellules, est quantifié soit dans le milieu cellulaire, soit dans le surnageant cellulaire, pour une protéine sécrétée, ou suite à la lyse des cellules avec un tampon de lyse passif approprié. Le produit de gène rapporteur, tel que la luciférase de luciole, est ensuite détecté dans le milieu cellulaire ou le surnageant de cellule ou le lysat cellulaire à l'aide d'une paire d'anticorps spécifique (monoclonal ou polyclonal) pour le produit génique tel qu'une luciférase de luciole marquée avec le système de détection double spécifique d'un ELISA ou d'une plate-forme de dosage automatisée particulière telle que l'électro-chimioluminescence de découverte à méso-échelle (MSD-ECL), Luminex, SMC, Alpco, AlphaLISA, Gyros ou la détection sans marqueur à l'aide d'un SPR tel que la plate-forme Biacore. Selon l'invention, l'expression du produit de gène rapporteur, tel que la luciférase de luciole, peut être normalisée par rapport à l'expression d'un second produit de gène rapporteur tel que la luciférase de Renilla ou la Nano-luciférase sous la commande d'un promoteur constitutif.
Designated States: AE, AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BH, BN, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CL, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DJ, DK, DM, DO, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, GT, HN, HR, HU, ID, IL, IN, IR, IS, JO, JP, KE, KG, KH, KN, KP, KR, KW, KZ, LA, LC, LK, LR, LS, LU, LY, MA, MD, ME, MG, MK, MN, MW, MX, MY, MZ, NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PA, PE, PG, PH, PL, PT, QA, RO, RS, RU, RW, SA, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, ST, SV, SY, TH, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, ZA, ZM, ZW
African Regional Intellectual Property Organization (ARIPO) (BW, GH, GM, KE, LR, LS, MW, MZ, NA, RW, SD, SL, ST, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
Eurasian Patent Office (AM, AZ, BY, KG, KZ, RU, TJ, TM)
European Patent Office (EPO) (AL, AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HR, HU, IE, IS, IT, LT, LU, LV, MC, MK, MT, NL, NO, PL, PT, RO, RS, SE, SI, SK, SM, TR)
African Intellectual Property Organization (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, KM, ML, MR, NE, SN, TD, TG)
Publication Language: English (EN)
Filing Language: English (EN)