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1. (WO2018011398) METHOD OF IDENTIFYING DROPLETS IN A STACK AND AN ASSOCIATED SEQUENCER
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Pub. No.: WO/2018/011398 International Application No.: PCT/EP2017/067851
Publication Date: 18.01.2018 International Filing Date: 14.07.2017
IPC:
B01J 19/00 (2006.01) ,B01L 3/02 (2006.01) ,G01N 35/10 (2006.01) ,C12Q 1/68 (2006.01)
Applicants: BASE4 INNOVATION LIMITED[GB/GB]; Broers Building JJ Thomson Avenue Cambridge Cambridgeshire CB3 0FA, GB
Inventors: FRAYLING, Cameron Alexander; GB
ISAAC, Thomas Henry; GB
Agent: BRISCOE, Paul Brian; GB
Priority Data:
16179518.214.07.2016EP
Title (EN) METHOD OF IDENTIFYING DROPLETS IN A STACK AND AN ASSOCIATED SEQUENCER
(FR) PROCÉDÉ D'IDENTIFICATION DE GOUTTELETTES DANS UN EMPILEMENT ET SÉQUENCEUR ASSOCIÉ
Abstract: front page image
(EN) Disclosed is a method of identifying the contents of individual droplets in a droplet stream each droplet containing fluorophores in an initial non-fluorescing state characterised by the steps of introducing the droplets one-by-one into at least one open-ended tube to create a stack of droplets therein; activating the fluorophores within the droplets to cause them to fluoresce; releasing each droplet in the droplet stack in turn from the tube and detecting along the major axis of the tube fluorescence associated with each droplet as it emerges. Also disclosed is a method suitable for sequencing a biopolymer characterised by the steps of (1) progressively digesting the biopolymer into an ordered stream of its constituent monomers; (2) converting the stream of monomers into a corresponding stream of monomer- containing aqueous droplets each droplet additionally containing a probe capable of (a) capturing the monomer and (b) thereafter being digested to release an unqueched fluorophore characteristic of the captured monomer; (3) introducing the stream of droplets created in step (2) into an inlet end of at least one open-ended tube to create a stack of droplets therein and (4) releasing each droplet in turn from an outlet end of the tube(s) and detecting fluorophores in each droplet as each droplet emerges. The method may be used in a corresponding apparatus for sequencing a biopolymer such as a nucleic acid or protein
(FR) L'invention concerne un procédé d'identification individuel du contenu de gouttelettes dans un flux de gouttelettes. Chaque gouttelette contient des fluorophores dans un état initial non fluorescent. Le procédé est caractérisé par les étapes consistant à introduire les gouttelettes une par one dans au moins un tube à extrémité ouverte afin de créer un empilement de gouttelettes dans celui-ci; à activer les fluorophores à l'intérieur des gouttelettes afin de provoquer leur fluorescence; à libérer chaque gouttelette de l'empilement de gouttelettes à partir du tube et à détecter le long de l'axe principal du tube la fluorescence associée à chaque gouttelette au fur et à mesure qu'elle sortes. L'invention porte également sur un procédé approprié pour le séquençage d'un biopolymère caractérisé par les étapes de (1) digestion progressive du biopolymère dans un flux ordonné de ses monomères constitutifs; (2) convertir le flux de monomères en un flux correspondant de gouttelettes aqueuses contenant un monomère, chaque gouttelette contenant en outre une sonde capable de capturer (a) le monomère et (b) puis de le digérer pour libérer un fluorophore non transformé caractéristique du monomère capturé; (3) introduire le flux de gouttelettes créées à l'étape (2) dans une extrémité d'entrée d'au moins un tube à extrémité ouverte afin de créer un empilement de gouttelettes dans celui-ci et (4) à libérer chaque gouttelette à partir d'une extrémité de sortie de tube(s) et au fur et à mesure de leur sortie détecter des fluorophores dans chaque gouttelette. Le procédé peut être utilisé dans un appareil correspondant pour le séquençage d'un biopolymère tel qu'un acide nucléique ou une protéine
Designated States: AE, AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BH, BN, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CL, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DJ, DK, DM, DO, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, GT, HN, HR, HU, ID, IL, IN, IR, IS, JO, JP, KE, KG, KH, KN, KP, KR, KW, KZ, LA, LC, LK, LR, LS, LU, LY, MA, MD, ME, MG, MK, MN, MW, MX, MY, MZ, NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PA, PE, PG, PH, PL, PT, QA, RO, RS, RU, RW, SA, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, ST, SV, SY, TH, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, ZA, ZM, ZW
African Regional Intellectual Property Organization (ARIPO) (BW, GH, GM, KE, LR, LS, MW, MZ, NA, RW, SD, SL, ST, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
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European Patent Office (EPO) (AL, AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HR, HU, IE, IS, IT, LT, LU, LV, MC, MK, MT, NL, NO, PL, PT, RO, RS, SE, SI, SK, SM, TR)
African Intellectual Property Organization (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, KM, ML, MR, NE, SN, TD, TG)
Publication Language: English (EN)
Filing Language: English (EN)