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1. (WO2018006804) ORPHAN NUCLEAR RECEPTOR NUR77 LIGAND AND APPLICATION THEREOF
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说明书

发明名称 0001   0002   0003   0004   0005   0006   0007   0008   0009   0010   0011   0012   0013   0014   0015   0016   0017   0018   0019   0020   0021   0022   0023   0024   0025   0026   0027   0028   0029   0030   0031   0032   0033   0034   0035   0036   0037   0038   0039   0040   0041   0042   0043   0044   0045   0046   0047   0048   0049   0050   0051   0052   0053   0054   0055   0056   0057   0058   0059   0060   0061   0062   0063   0064   0065   0066   0067   0068   0069   0070   0071   0072   0073   0074   0075   0076   0077   0078   0079   0080   0081   0082   0083   0084   0085   0086   0087   0088   0089   0090   0091   0092   0093   0094   0095   0096   0097   0098   0099   0100   0101   0102   0103   0104   0105   0106   0107   0108   0109   0110   0111   0112   0113   0114   0115   0116   0117   0118   0119   0120   0121   0122   0123   0124   0125   0126   0127   0128   0129   0130   0131   0132   0133   0134   0135   0136   0137   0138   0139   0140   0141   0142   0143   0144   0145   0146   0147   0148   0149   0150   0151   0152   0153   0154   0155   0156   0157   0158   0159   0160   0161   0162   0163   0164   0165   0166   0167   0168   0169   0170   0171   0172   0173   0174   0175   0176   0177   0178   0179   0180   0181   0182   0183   0184   0185   0186   0187   0188   0189   0190   0191   0192   0193   0194   0195   0196   0197   0198   0199   0200   0201   0202   0203   0204   0205   0206   0207   0208   0209   0210   0211   0212   0213   0214   0215   0216   0217   0218   0219   0220   0221   0222   0223   0224   0225   0226   0227   0228   0229   0230   0231   0232   0233   0234   0235   0236   0237   0238   0239   0240   0241   0242   0243   0244   0245   0246   0247   0248   0249   0250   0251   0252   0253   0254   0255   0256   0257   0258   0259   0260   0261   0262   0263   0264   0265   0266   0267   0268   0269   0270   0271   0272   0273   0274   0275   0276   0277   0278   0279   0280   0281   0282   0283   0284   0285   0286   0287   0288   0289   0290   0291   0292   0293   0294   0295   0296   0297   0298   0299   0300   0301   0302   0303   0304   0305   0306   0307   0308   0309   0310   0311   0312   0313   0314   0315   0316   0317   0318   0319   0320   0321   0322   0323   0324   0325   0326   0327   0328   0329   0330   0331   0332   0333   0334   0335   0336   0337   0338   0339   0340   0341   0342   0343   0344   0345   0346   0347   0348   0349   0350   0351   0352   0353   0354   0355   0356   0357   0358   0359   0360   0361   0362   0363   0364   0365   0366   0367   0368   0369   0370   0371   0372   0373   0374   0375   0376   0377   0378   0379   0380   0381   0382   0383   0384   0385   0386   0387   0388   0389   0390   0391   0392   0393   0394   0395   0396   0397   0398   0399   0400   0401   0402   0403   0404   0405   0406   0407   0408   0409   0410   0411   0412   0413   0414   0415   0416   0417   0418   0419   0420   0421   0422   0423   0424   0425   0426   0427   0428   0429   0430   0431   0432   0433   0434   0435   0436   0437   0438   0439   0440   0441   0442   0443   0444   0445   0446   0447   0448   0449   0450   0451   0452   0453   0454   0455   0456   0457   0458   0459   0460   0461   0462   0463   0464   0465   0466   0467   0468   0469   0470   0471   0472   0473   0474   0475   0476   0477   0478   0479   0480   0481   0482   0483   0484   0485   0486   0487   0488   0489   0490   0491   0492   0493   0494   0495   0496   0497   0498   0499   0500   0501   0502   0503   0504   0505   0506   0507   0508   0509   0510   0511   0512   0513   0514   0515   0516   0517   0518   0519   0520   0521   0522   0523   0524   0525   0526   0527   0528   0529   0530   0531   0532   0533   0534   0535   0536   0537   0538   0539   0540   0541   0542   0543   0544   0545   0546   0547   0548   0549   0550   0551   0552   0553   0554   0555   0556   0557   0558   0559   0560   0561   0562   0563   0564   0565   0566   0567   0568   0569   0570   0571   0572   0573   0574   0575   0576   0577   0578   0579   0580   0581   0582   0583   0584   0585   0586   0587   0588   0589   0590   0591   0592   0593   0594   0595   0596   0597   0598   0599   0600   0601   0602   0603   0604   0605   0606  

权利要求书

1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11   12   13   14   15   16   17   18   19   20   21   22   23   24   25   26   27   28   29   30   31   32   33   34   35   36   37   38   39   40   41   42   43   44   45   46   47   48   49   50   51   52   53  

附图

0001 (R26)   0002 (R26)   0003 (R26)   0004 (R26)   0005 (R26)   0006 (R26)   0007 (R26)   0008 (R26)   0009 (R26)   0010 (R26)   0011 (R26)   0012 (R26)   0013 (R26)   0014 (R26)   0015 (R26)   0016 (R26)   0017 (R26)  

说明书

发明名称 : 孤儿核受体Nur77的配体及其用途

技术领域

[0001]
本申请涉及医药领域和生物领域。具体而言,本申请涉及孤儿核受体Nur77的新型配体及其用途。本申请还涉及如式I-式V所示的化合物用作孤儿核受体Nur77的配体的用途。本申请还涉及如式I-式V所示的化合物用于预防或治疗与孤儿核受体Nur77相关的疾病的用途。本申请还涉及具有抗癌(特别是三阴性乳腺癌)活性的药物的筛选方法。本申请还涉及以核受体Nur77为检验指标,评估三阴性乳腺癌等相关疾病诊疗效果的方法。

背景技术

[0002]
孤儿核受体Nur77,其也被称为NGFIB(神经生长因子IB)或孤儿核受体TR3,是癌症、新陈代谢和炎症性疾病发生发展过程中一个的关键调节子。作为一类即刻早期应答基因,Nur77在大量细胞过程中起着重要作用,包括由细胞分裂素、激素、压力、代谢和凋亡信号等不同刺激引起的细胞生存、凋亡、炎症和自噬过程(Pei L等人(2006),″Regulation of macrophage inflammatory gene expression by the orphan nuclear receptor Nur77″,Mol.Endocrinol.20(4):786-94;Zhang XK(2007),″Targeting Nur77 translocation″,Expert Opin.Ther.Targets 11(1):69-79)。Nur77的死亡作用最早于1994年发现,T细胞受体信号能够诱导Nur77表达,在T细胞受体所介导的细胞凋亡过程中Nur77的表达增加(Woronicz JD,Calnan B,et al.Requirement for the Orphan Steroid-Receptor Nur77 in Apoptosis of T-Cell Hybridomas.Nature,367:277-81,1994;Liu ZG,Smith SW,et al.Apoptotic Signals Delivered through the T-Cell Receptor of a T-Cell Hybrid Require the Immediate-Early Gene Nur77.Nature,367:281-4,1994)。在研究类维甲酸化合物AHPN(也叫CD437)时,我们发现了Nur77在肿瘤细胞凋亡中的作用,研究表明,在多种凋亡信号的刺激下,Nur77从细胞核迁移到细胞质,并定位于线粒体上,Nur77的线粒体定位同细胞色素c(Cytochrome c,Cyt c)的释放及细胞凋亡相关。缺失DNA结合结构域的Nur77能够 组成型地定位于线粒体上,使大量细胞色素c被从线粒体释放出来,从而诱导细胞凋亡(Li Y,Lin BZ,et al.Molecular determinants of AHPN(CD437)-induced growth arrest and apoptosis in human lung cancer cell lines. Mol Cell Biol,1998,18(8);4719-4731; Li HKolluri SK,et al.Cytochrome c release and apoptosis induced by mitochondrial targeting of nuclear orphan receptor TR3,Science,2000,289(5482);1159-1164; Lin BKolluri SK,et al.Conversion of Bcl-2 from protector to killer by interaction with nuclear orphan receptor Nur77/TR3,Cell,2004,16;527-540)Nur77转位到细胞质中,定位于线粒体是其促凋亡的重要条件,因此,许多药物通过Nur77的线粒体定位诱导肿瘤及其它重大疾病细胞的细胞凋亡,从而Nur77线粒体定位将是开发新型药物的一个有效靶点。
[0003]
乳腺癌是女性健康的“头号杀手”。最新调查数据显示,平均每3分钟世界上就有一位妇女被诊断为乳腺癌,我国女性乳腺癌的发病率和死亡率也是逐年上升,目前已位居女性恶性肿瘤发病率之首。而乳腺癌作为女性恶性肿瘤死亡率排名第一位的原因在于其高转移性,其中最典型的是雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和原癌基因Her-2均为阴性的三阴性乳腺癌(TNBC),其最大的特征就是转移性强、患者预后较差,对内分泌治疗不敏感,并尚无有效治疗药物。前期研究发现,Nur77作为一个早期反应基因,能够调节如细胞的增殖、凋亡、胚胎发育、血管生成在内的很多关键的生命活动过程,其表达或功能异常也会导致包括肿瘤在内的一系列疾病。在正常组织中Nur77一般表达很低或不表达,但在癌症发生发展过程以及肿瘤药物治疗过程中可被大量诱导,它的诱导表达可介导细胞增殖和凋亡双重作用,决定细胞的生与死,这两种截然相反的现象取决于不同的刺激和Nur77在细胞内不同的定位。近期研究又表明,在TNFα等炎症因子刺激下,Nur77可以特异性结合其配体,通过胞质移位调控线粒体功能而发挥其抗炎活性。
[0004]
而在前期调研中,我们发现乳腺癌特别是三阴性乳腺癌的发生发展同样始终伴随着炎症反应及mTOR信号通路的高度激活,慢性炎症同样是乳腺癌发生发展的重要基础,并且也有许多对其他肿瘤有效的非类固醇类消炎药,也被拿来用于乳腺癌的防治。因此,基于Nur77易被炎症因子调控并对乳腺癌关键的调控作用,寻找有效的、特异性结合Nur77的配体,以开发用于治疗三阴性乳腺癌的药物有着更为重要的现实意义。 因此,本申请建立新型抗癌药物筛选方法,即以Nur77为靶点,寻找有效的、特异性结合Nur77的配体,以开发用于治疗癌症(如三阴乳腺癌)的新化合物分子;并且建立以Nur77作为癌症(如三阴性乳腺癌)检验指标的方法来评估和诊断相关癌症的发生发展。
[0005]
海洋生态环境由于与陆地差异较大,因此,导致海洋生物体内小分子代谢物的生物合成途径也迥然不同。因此,海洋天然产物拥有大量结构独特的化合物并具有许多各种各样的生物学活性。比如,萜类和甾体化合物等具有较好的抗肿瘤以及免疫调节活性等。本申请的发明人通过大量的实验研究发现了一类新的五环三萜类化合物YXY101及其衍生物,其能够结合Nur77,抑制mTOR信号通路从而抑制肿瘤发生发展。本申请提供了有前景的化合物,因此,特别有利地,本发明化合物能够作用于表达Nur77的细胞.调控发明人新近发现的Nur77所介导的mTOR信号通路,用于治疗三阴性乳腺癌及其他癌症(例如肝癌,宫颈癌,肺癌、三阳性乳腺癌、结直肠癌或前列腺癌)。
[0006]
发明内容
[0007]
在本发明中,除非另有说明,否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且,本文中所用的细胞培养、分子遗传学、核酸化学、免疫学实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的常规步骤。同时,为了更好地理解本发明,下面提供相关术语的定义和解释。
[0008]
如本文中所使用的,术语“互变异构体”是指,因分子中某一原子在两个位置迅速移动而产生的官能团异构体。此类互变异构体的典型实例为酮-烯醇互变异构体。本发明所述的化合物可以以互变异构体形式存在,并因此涵盖所有可能的互变异构体,及其任何组合或任何混合物。
[0009]
如本文中所使用的,术语“立体异构体”是指,分子中原子或原子团的连接次序相同,但空间排列不同而引起的异构体。在本申请中,化合物的“立体异构”分为构象和构型异构,而构型异构还分为顺反异构和旋光异构。因此,在本申请中,“立体异构体”包括所有可能的光学异构体和非对映异构体,以及其任何组合,例如外消旋体(外消旋混合物),单一对映异构体,非对映异构体混合物,单一非对映异构体。例如,当本发明所述的化合物含有烯烃双键时,除非特别说明,否则其包括顺式异构体和反式 异构体,以及其任何组合。
[0010]
如本文中所使用的,术语“药学上可接受的盐”是指,(1)本发明化合物中存在的酸性官能团(例如-COOH、-OH、-SO 3H等)与适当的无机或者有机阳离子(碱)形成的盐,例如本发明化合物与碱金属或碱土金属形成的盐、本发明化合物的铵盐,和本发明化合物与含氮有机碱形成的盐;以及(2)本发明化合物中存在的碱性官能团(例如-NH 2等)与适当的无机或者有机阴离子(酸)形成的盐,例如本发明化合物与无机酸或有机羧酸形成的盐。
[0011]
因此,本发明化合物的“药学上可接受的盐”包括但不限于,碱金属盐,如钠盐、钾盐、锂盐等;碱土金属盐,如钙盐、镁盐等;其他金属盐,如铝盐、铁盐、锌盐、铜盐、镍盐、钴盐等;无机碱盐,如铵盐;有机碱盐,如叔辛基胺盐、二苄基胺盐、吗啉盐、葡糖胺盐、苯基甘氨酸烷基酯盐、乙二胺盐、N-甲基葡糖胺盐、胍盐、二乙胺盐、三乙胺盐、二环己基胺盐、N,N’-二苄基乙二胺盐、氯普鲁卡因盐、普鲁卡因盐、二乙醇胺盐、N-苄基-苯乙基胺盐、哌嗪盐、四甲基胺盐、三(羟甲基)氨基甲烷盐;氢卤酸盐,如氢氟酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐等;无机酸盐,如硝酸盐、高氯酸盐、硫酸盐、磷酸盐等;低级烷磺酸盐,如甲磺酸盐、三氟甲磺酸盐、乙磺酸盐等;芳基磺酸盐,如苯磺酸盐、对苯磺酸盐等;有机酸盐,如醋酸盐、苹果酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、草酸盐、马来酸盐等;氨基酸盐,如甘氨酸盐、三甲基甘氨酸盐、精氨酸盐、鸟氨酸盐、谷氨酸盐、天冬氨酸盐等。
[0012]
如本文中所使用的,术语“药学上可接受的酯”是指,当本发明化合物存在羧基时,其与醇发生酯化反应而形成的酯;当本发明化合物存在羟基时,其与有机酸、无机酸、有机酸盐等发生酯化反应而形成的酯。酯在酸或者碱存在的条件下,可以发生水解反应生成相应的酸或醇。
[0013]
如本文中所使用的,术语“C 1-6烷基”表示直链或支链的含有1-6个碳原子的烷基,如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、2-甲基丁基、新戊基、1-乙基丙基、正己基、异己基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、1,2-二甲基丙基等。C 1-6烷基的优选实例包括C 1-5烷基、C 1-4烷基、C 1-3烷基。本发明所述的“C 1-4烷基”表示直链或支链的含有 1-4个碳原子的烷基,其包括但不限于上述实例中的含有1-4个碳原子的具体实例。
[0014]
如本文中所使用的,术语“链烯基”是指含有至少一个碳碳双键的直链或支链烃基,其典型的实例为C 2-10链烯基,例如C 2-6链烯基或C 2-4链烯基。具体的实例包括但不限于:乙烯基、丙烯基、2-丙烯基、丁烯基、2-丁烯基、丁二烯基、戊烯基、2-甲基-丁烯基、3-甲基-丁烯基、1,3-戊二烯基、1,4-戊二烯基、己烯基、2-乙基-丁烯基、3-甲基-戊烯基、4-甲基-戊烯基、1,3-己二烯基、1,4-己二烯基、1,5-己二烯基等。
[0015]
如本文中所使用的,术语“炔基”是指至少含有一个碳碳三键的直链或支链烃基,其典型的实例为C 2-10炔基,例如C 2-6炔基或C 2-4炔基。具体的实例包括但不限于:乙炔基、丙炔基、2-丙炔基、丁炔基、2-丁炔基、2-甲基-丙炔基、丁二炔基、戊炔基、2-甲基-丁炔基、3-甲基-丁炔基、1,3-戊二炔基、1,4-戊二炔基、己炔基、2-乙基-丁炔基、3-甲基-戊炔基、4-甲基-戊炔基、1,3-己二炔基、1,4-己二炔基、1,5-己二炔基等。
[0016]
如本文中所使用的,术语“环烷基”是指单环饱和烷基,其典型的实例为3-8元环烷基,例如3元、4元、5元、6元、7元或8元环烷基。如本文中所使用的,术语“3-8元环烷基”是指含有3-8个碳原子的环烷基。具体的实例包括但不限于:环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基等。
[0017]
如本文中所使用的,术语“杂环烷基”是指含有至少1个至多4个(例如1、2、3或4个)选自N、O和S的杂原子的环烷基,其中“环烷基”的定义如前文所述,其典型的实例为3-8元杂环烷基,例如3元、4元、5元、6元、7元或8元杂环烷基。如本文中所使用的,术语“3-8元杂环烷基”是指含有3-8个碳原子的杂环烷基。如本文中所使用的“氧代3-8元环烷基”是指所述杂原子为O的如前文所定义的3-8元杂环烷基。具体的实例包括但不限于:环氧乙基、氧代环丁基、吡咯烷基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫吗啉基等。
[0018]
如本文中所使用的,术语“芳基”是指芳香族基团,其典型实例为6-14元芳基,例如6-10元芳基。如本文中所使用的,术语“6-14元芳基”是指含有6-14个碳原子的单环、双环或多环芳香族基团,包括例如6-8元芳基和8-14元稠环芳基。6-8元芳基是指含有6-8个碳原子的芳基,例如苯基等。8-14元稠环芳基是指含有8-14个环碳原子、由两个或两个以上环状结构彼此共用两个相邻的碳原子所形成的不饱和的具有芳香性的稠环基团,具体实例包括但不仅限于:萘、蒽、菲等。术语“6-10元芳基”是指含有 6-10个碳原子的芳香族基团,其包括但不限于上述实例中环原子个数为6-10个的芳香族基团。
[0019]
如本文中所使用的,术语“芳基-C 1-6烷基”是指以芳基-C 1-6烷基-方式形成的基团,其中“芳基”和“C 1-6烷基”的定义各自如前文所述。
[0020]
如本文中所使用的,术语“C 1-6烷氧基”是指以C 1-6烷基-O-方式形成的基团,其中“C 1-6烷基”的定义如前文所述。
[0021]
如本文中所使用的,术语“C 1-6烷氨基”是指以C 1-6烷基-NH-方式形成的基团,其中“C 1-6烷基”的定义如前文所述。
[0022]
如本文中所使用的,术语“C 1-6烷硫基”是指以C 1-6烷基-S-方式形成的基团,其中“C 1-6烷基”的定义如前文所述。
[0023]
如本文中所使用的,术语“C 1-6烷酰基”是指以C 1-5烷基-C(O)-方式形成的基团,其中“C 1-5烷基”的定义如前文所述。
[0024]
如本文中所使用的,术语“C 1-6烷氧羰基”是指以C 1-6烷基-O-C(O)-方式形成的基团,其中“C 1-6烷基”的定义如前文所述。
[0025]
如本文中所使用的,术语“C 1-6烷氧羰基-C 1-6烷基”是指以C 1-6烷基-O-C(O)-C 1-6烷基-方式形成的基团,其中“C 1-6烷基”的定义如前文所述。
[0026]
如本文中所使用的,术语“3-8元环烷基-氨酰基”是指以3-8元环烷基-NHC(O)-方式形成的基团,其中“3-8元环烷基”的定义如前文所述。
[0027]
如本文中所使用的,术语“卤素”包括例如氟原子、氯原子、溴原子和碘原子。
[0028]
如本文中所使用的,术语“6-15元杂芳基”是指含有6-15个环原子且其中至少一个为杂原子的、具有芳香性的基团。6-15元杂芳基包括“5-8元杂芳基”,例如“5-7元杂芳基”、“5-6元杂芳基”等。“5-8元杂芳基”具体实例包括但不限于,呋喃基、噻吩基、吡咯基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、咪唑基、吡唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、吡啶基、2-吡啶酮、4-吡啶酮、嘧啶基、1,4-二氧杂环己二烯基、2H-1,2-噁嗪基、4H-1,2-噁嗪基、6H-1,2-噁嗪基、4H-1,3-噁嗪基、6H-1,3-噁嗪基、4H-1,4-噁嗪基、哒嗪基、吡嗪基、1,2,3-三嗪基、1,3,5-三嗪基、1,2,4,5-四嗪基、氮杂环庚三烯基、1,3-二氮杂环庚三烯基、氮杂环辛四烯基等。6-15元杂芳基还包括“9-15元稠杂芳 基”(例如9-15元苯并稠杂芳基),其具体实例包括但不限于:苯并呋喃基、苯并异呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、异吲哚、苯并噁唑基、苯并咪唑基、吲唑基、苯并三唑基、喹啉基、2-喹啉酮、4-喹啉酮、1-异喹啉酮、异喹啉基、吖啶基、菲啶基、苯并哒嗪基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、酚嗪基、喋啶基、嘌呤基、萘啶基、吩嗪、吩噻嗪等。
[0029]
如本文中所使用的,术语“细胞”特别优选地是指,表达Nur77的细胞。本发明化合物能够与Nur77特异性结合,并作为其配体发挥作用。因此,特别有利地,本发明化合物能够作用于表达Nur77的细胞.调控发明人新近发现的Nur77所介导的炎症及mTOR信号通路。在某些优选的实施方案中,所述细胞为三阴性乳腺癌及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳性乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[0030]
如本文中所使用的,术语“孤儿核受体Nur77”或“Nur77”是指,神经生长因子IB(NGFIB),其由NR4A1基因编码(Chang C等(1989),″Isolation and characterization of human TR3 receptor:a member of steroid receptor superfamily″,J.Steroid Biochem.34(1-6):391-5)。Nur77参与细胞周期、炎症和细胞凋亡等过程,并且其亚细胞定位与细胞的存活和死亡相关(Pei L等人(2006),″Regulation of macrophage inflammatory gene expression by the orphan nuclear receptor Nur77″,Mol.Endocrinol.20(4):786-94;Zhang XK(2007),″Targeting Nur77 translocation″,Expert Opin.Ther.Targets 11(1):69-79)。
[0031]
如本文中所使用的,术语“与Nur77相关的疾病”是指,其发生和/或进展与Nur77信号通路相关的疾病。研究已显示,Nur77参与细胞周期、炎症和细胞凋亡等过程,并且其亚细胞定位与细胞的存活和死亡相关(同上)。此外,还已报道,Nur77可被多种刺激诱导,包括生理刺激,例如脂肪酸,前列腺素,生长因子,炎性细胞因子,肽激素等;以及物理刺激,例如磁场,机械搅拌(剪切力),膜去极化等(Maxwell MA,Muscat GE(2006),″The NR4A subgroup:immediate early response genes with pleiotropic physiological roles″,Nucl Recept Signal 4:e002)。另外,还已显示,Nur77参与一些实体肿瘤的转移(Ramaswamy S,Ross KN,Lander ES,Golub TR(2003),″A molecular signature of metastasis in primary solid tumors″,Nat.Genet.33(1): 49-54)。此外,还已显示,Nur77在发炎的人体滑膜组织、癌细胞、牛皮癣患者、动脉粥样硬化患者、多发性硬化患者中异常表达。因此,术语“与Nur77相关的疾病”包括但不限于,炎症(例如,与动脉粥样硬化相关的炎症,与肥胖症相关的炎症,与糖尿病相关的炎症,肝炎,肺炎,关节炎和炎症性肠病)、动脉粥样硬化、肥胖症、糖尿病、牛皮癣、多发性硬化和癌症(例如三阴乳腺癌)。
[0032]
如本文中所使用的,术语“受试者”是指动物,特别是哺乳动物,优选人。
[0033]
如本文中所使用的,术语“高脂肪膳食”是指,动物体(例如哺乳动物,例如人)日常摄入的膳食中的脂肪含量超出了动物体正常生理活动所需的脂肪量。
[0034]
如本文中所使用的,术语“有效量”是指,足以获得或至少部分获得期望的效果的量。例如,预防有效量是指,足以预防,阻止,或延迟疾病的发生的量;治疗有效量是指,足以治愈或至少部分阻止已患有疾病的患者的疾病和其并发症的量。测定这样的有效量完全在本领域技术人员的能力范围之内。例如,对于治疗用途有效的量将取决于待治疗的疾病的严重度,患者自己的免疫系统的总体状态,患者的一般情况例如年龄、体重和性别,药物的施用方式,以及同时施用的其他治疗等等。
[0035]
在本申请中,发明人通过大量的研究发现,如式I-式V所示的化合物(例如化合物YXY101)能够靶向孤儿核受体Nur77,并作为其配体发挥作用。例如,此类化合物可用于与孤儿核受体Nur77结合而抑制mTOR的活性,用于治疗与孤儿核受体Nur77相关的癌症(例如三阴乳腺癌)。
[0036]
因此,在第一个方面,本申请涉及如式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯的用途,其用作孤儿核受体Nur77的配体,或者用于制备用作孤儿核受体Nur77的配体的药物:
[0037]
[0038]
其中,
[0039]
X代表-NH-、-N(R)-、-O-、-CH 2-或卤素;其中,当X为卤素时,R 1不存在;
[0040]
当Y和与之相连的碳原子之间为单键时,Y代表H、卤素、-OR、-SR或-NRR’;当Y和与之相连的碳原子之间为双键时,Y代表O、S或NR;
[0041]
R 1不存在,或代表H、-PO(OR) 2、C 1-6烷基、糖基、C 1-6烷氧羰基-C 1-6烷基、3-8元环烷基-氨酰基、芳基-C 1-6烷基或芳基,其中所述C 1-6烷基、糖基、C 1-6烷氧羰基-C 1-6烷基、3-8元环烷基-氨酰基、芳基-C 1-6烷基和芳基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:卤素、羟基、氨基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷氨基和C 1-6烷酰基;优选地,所述芳基为6-14元芳基,例如6-10元芳基;更优选地为苯基或萘基;
[0042]
R 2代表H、D、-PO(OR) 2、-CONH 2、-NH 2、-NHR、-NRR’、-NHCOR、-NRCOR、-NHCOOR、-NHCONHR、-NHCONRR’、-NRCONHR、-NRCONRR’、-OH、-OR、-OCONHR、-OCONRR’、-SH、-SR、-SOR、-SOOR、-SO 2NHR”、硝基、卤素、糖基、氰基、三氟甲基、C 1-6烷基、3-8元环烷基、3-8元杂环烷基、芳基、C 1-6烷基取代的芳基、6-15元杂芳基、链烯基、炔基、亚磺基、磺酸或磺酸盐;其中所述C 1-6烷基、3-8元环烷基、3-8元杂环烷基、芳基、C 1-6烷基取代的芳基、6-15元杂芳基、链烯基和炔基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:氨基、卤素、羟基、氧基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6烷酰基、3-8元环烷基(例如环丙基)、氧代3-8元环烷基(例如氧代环丁基)、氰基、三氟甲基、C 1-6烷氧羰基、C 1-6烷基酰胺基、脲基、氨基甲酸酯基、羧基以及芳基;
[0043]
R 3和R 4各自独立地表示不存在,或代表H、C 1-6烷基、C 1-6烷酰基、C 1-6烷氧羰基、糖基、芳基-C 1-6烷基或芳基,其中所述C 1-6烷基、C 1-6烷酰基、C 1-6烷氧羰基、糖基、芳基-C 1-6烷基和芳基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:卤素、羟基、氨基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷氨基和C 1-6烷酰基;优选地,所述芳基为6-14元芳基,例如6-10元芳基;更优选地为苯基或萘基;
[0044]
R和R’各自独立地选自H、C 1-6烷基、3-8元环烷基、芳基-C 1-6烷基或芳基,其中所述C 1-6烷基、3-8元环烷基、芳基-C 1-6烷基和芳基未被取代或被一个或多个(例如1、 2、3或4个)选自下述的取代基取代:卤素、羟基、氨基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和C 1-6烷氨基;
[0045]
R”代表C 1-6烷基或芳基(例如6-10元芳基,优选苯基);
[0046]
式(I)中的虚实双键 代表单键或者双键;优选地,环A包含0、1、2或3个碳碳双键;环B包含0、1或2个碳碳双键。
[0047]
在某些优选实施方案中,X代表-NH-、-N(R)-、-O-、-CH 2-或卤素;其中,当X为卤素时,R 1不存在;
[0048]
当Y和与之相连的碳原子之间为单键时,Y代表H、卤素、-OR、-SR或-NRR’;当Y和与之相连的碳原子之间为双键时,Y代表O、S或NR;
[0049]
R 1不存在,或代表H、-PO(OR) 2、C 1-6烷基、糖基、C 1-6烷氧羰基-C 1-6烷基、3-8元环烷基-氨酰基、芳基-C 1-6烷基或芳基,其中所述C 1-6烷基、糖基、C 1-6烷氧羰基-C 1-6烷基、3-8元环烷基-氨酰基、芳基-C 1-6烷基和芳基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:卤素、羟基、氨基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷氨基和C 1-6烷酰基;优选地,所述芳基为6-14元芳基,例如6-10元芳基;更优选地为苯基或萘基;
[0050]
R 2代表H、D、-PO(OR) 2、-CONH 2、-NH 2、-NHR、-NRR’、-NHCOR、-NRCOR、-NHCOOR、-NHCONHR、-NHCONRR’、-NRCONHR、-NRCONRR’、-OH、-OR、-OCONHR、-OCONRR’、-SH、-SR、-SOR、-SOOR、-SO 2NHR”、硝基、卤素、糖基、氰基、三氟甲基、C 1-6烷基、3-8元环烷基、3-8元杂环烷基、芳基、C 1-6烷基取代的芳基、6-15元杂芳基、链烯基、炔基、亚磺基、磺酸或磺酸盐;其中所述C 1-6烷基、3-8元环烷基、3-8元杂环烷基、芳基、C 1-6烷基取代的芳基、6-15元杂芳基、链烯基和炔基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:氨基、卤素、羟基、氧基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6烷酰基、3-8元环烷基(例如环丙基)、氧代3-8元环烷基(例如氧代环丁基)、氰基、三氟甲基、C 1-6烷氧羰基、C 1-6烷基酰胺基、脲基、氨基甲酸酯基、羧基以及芳基;
[0051]
R 3和R 4各自独立地表示不存在,或代表H、C 1-6烷基、C 1-6烷酰基、C 1-6烷氧羰基、糖基、芳基-C 1-6烷基或芳基,其中所述C 1-6烷基、C 1-6烷酰基、C 1-6烷氧羰基、 糖基、芳基-C 1-6烷基和芳基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:卤素、羟基、氨基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷氨基和C 1-6烷酰基;优选地,所述芳基为6-14元芳基,例如6-10元芳基;更优选地为苯基或萘基;
[0052]
R和R’各自独立地选自H、C 1-6烷基、3-8元环烷基、芳基-C 1-6烷基或芳基,其中所述C 1-6烷基、3-8元环烷基、芳基-C 1-6烷基和芳基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:卤素、羟基、氨基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和C 1-6烷氨基;
[0053]
R”代表C 1-6烷基或芳基(例如6-10元芳基,优选苯基);
[0054]
式(I)中的虚实双键 代表单键或者双键;优选地,环A包含0、1、2或3个碳碳双键;环B包含0、1或2个碳碳双键。
[0055]
在本发明的某些优选实施方案中,所述磺酸盐选自磺酸钠、磺酸钾、磺酸钙和磺酸镁。
[0056]
在本发明的某些优选实施方案中,所述6-15元杂芳基选自9-15元稠杂芳基;更优选地,所述6-15元杂芳基选自9-15元苯并稠杂芳基,例如吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基或喹啉基。
[0057]
在某些优选的实施方案中,Y和与之相连的碳原子之间为双键,且Y代表O。
[0058]
在某些优选的实施方案中,X代表NH;Y和与之相连的碳原子之间为双键,且Y代表O;R 1代表被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代的芳基:C 1-6烷基和C 1-6烷氧基;优选地,所述芳基为苯基或萘基;R 2代表H。
[0059]
在某些优选的实施方案中,X代表O;Y和与之相连的碳原子之间为双键,且Y代表O;R 1代表H;R 2代表H、磺酸盐或6-15元杂芳基;优选地,所述磺酸盐选自磺酸钠、磺酸钾、磺酸钙和磺酸镁;优选地,所述6-15元杂芳基选自9-15元稠杂芳基;更优选地,所述6-15元杂芳基选自9-15元苯并稠杂芳基,例如吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑或喹啉基。
[0060]
在某些优选的实施方案中,X代表O;Y和与之相连的碳原子之间为双键,Y代表O;R 1代表C 1-6烷基或芳基-C 1-6烷基(优选苄基);R 2代表H。
[0061]
在某些优选的实施方案中,R 3不存在,且R 4代表H。在某些优选的实施方案中,R 3代表H,且R 4不存在。在某些优选的实施方案中,R 3和R 4均为H。
[0062]
在某些优选的实施方案中,R 3不存在,R 4代表H,且环A和环B中各有两个碳碳双键。
[0063]
在某些优选的实施方案中,R 3代表H,R 4不存在,且环A中有0、1或2个碳碳双键;进一步优选地,环B中有0、1或2个碳碳双键。
[0064]
在某些优选的实施方案中,R 3和R 4均为H,且环A中有3个碳碳双键(即,环A为苯环);进一步优选地,环B中有0或1个碳碳双键;更优选地,环B中7位和8位碳原子之间为碳碳双键。
[0065]
在某些优选的实施方案中,R 3和R 4均不存在。在此类实施方案中,环A中2位碳原子与其所连接的O原子之间为碳氧双键,并且3位碳原子与其所连接的O原子之间为碳氧双键。
[0066]
在某些优选的实施方案中,7位和8位碳原子之间为碳碳双键。在某些优选的实施方案中,7位和8位碳原子之间为碳碳单键。
[0067]
在某些优选实施方案中,Y和与之相连的碳原子之间为双键,且Y代表O。
[0068]
在某些优选实施方案中,所述化合物中的X代表-NH-、-N(R)-、-O-、-CH 2-或卤素;R代表C 1-6烷基或3-8元环烷基(优选环己基);其中,当X为卤素时,R 1不存在;
[0069]
在某些优选实施方案中,X代表-NH-、-N(R)-、-O-或卤素(例如氟);R代表环己基。
[0070]
在某些优选实施方案中,所述化合物中的R 1不存在,或代表氢、C 1-4烷基、-PO(OR) 2、单糖基、C 1-4烷氧羰基-C 1-4烷基、3-6元环烷基-氨酰基、芳基-C 1-4烷基或芳基;其中,所述C 1-4烷基、单糖基、C 1-4烷氧羰基-C 1-4烷基、3-6元环烷基-氨酰基、芳基-C 1-4烷基和芳基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:卤素、羟基、氨基、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 1-4烷氨基和C 1-4烷酰基;优选地,所述芳基为6-14元芳基,例如6-10元芳基;更优选地为苯基或萘基;
[0071]
R代表C 1-4烷基。
[0072]
在某些优选实施方案中,R 1不存在,或代表氢、C 1-4烷基、-PO(OR) 2、葡萄糖基、C 1-2烷氧羰基-C 1-2烷基、环己基-氨酰基、苯基-C 1-2烷基、萘基-C 1-2烷基、苯基或萘基;其中,所述甲基、乙基、葡萄糖基、C 1-2烷氧羰基-C 1-2烷基、环己基-氨酰基、苯基-C 1-2 烷基、萘基-C 1-2烷基、苯基或萘基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:C 1-2烷基、C 1-2烷氧基和C 1-2烷酰基;
[0073]
R代表C 1-4烷基。
[0074]
在某些优选实施方案中,R 1不存在,或代表氢、C 1-4烷基、-PO(OR) 2、苯基-C 1-2烷基、C 1-2烷氧羰基-C 1-2烷基、3-6元环烷基-氨酰基;
[0075]
R代表C 1-3烷基。
[0076]
在某些优选实施方案中,R 1不存在,或代表氢、甲基、乙基、-PO(OMe) 2、-PO(OEt) 2、-PO(O iPr) 2、2,3,4,6-四乙酰氧基-α-D-吡喃葡萄糖基、EtOCOCH 2-、环己基-氨酰基、苄基、甲氧基苯基或叔丁基苯基。
[0077]
在某些优选实施方案中,所述化合物中的R 2代表H、D、-OH、-PO(OR) 2、C 1-6烷基、9-15元稠杂芳基或磺酸盐;其中所述C 1-6烷基或6-15元杂芳基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:氨基、卤素、羟基、氧基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷酰基、氰基、三氟甲基和羧基;
[0078]
R代表H、C 1-6烷基或芳基。
[0079]
在某些优选实施方案中,R 2代表H、D、-PO(OR) 2、C 1-4烷基、9-15元苯并稠杂芳基或磺酸盐;其中,所述C 1-4烷基或9-15元苯并稠杂芳基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:氨基、卤素、羟基、氧基、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 1-4烷酰基、氰基、三氟甲基和羧基;
[0080]
R代表H、C 1-4烷基或苯基。
[0081]
在某些优选实施方案中,R 2代表H、D、-PO(OR) 2、C 1-4烷基、9-15元苯并稠杂芳基或磺酸盐;其中,所述C 1-4烷基和9-15元苯并稠杂芳基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:氨基、卤素、羟基、氧基、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 1-4烷酰基、氰基、三氟甲基和羧基;
[0082]
R代表H、C 1-4烷基或苯基。
[0083]
在某些优选实施方案中,R 2代表H、D、-PO(OR) 2、2-氧代苯基、吲哚基或磺酸钠;其中,所述吲哚基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:氨基、氟、氯、溴、羟基、甲基、甲氧基、甲酰基、氰基、三氟甲基和羧基;
[0084]
R代表H、甲基、乙基、异丙基或苯基。
[0085]
在某些优选实施方案中,所述化合物的7位和8位碳原子之间为碳碳双键。
[0086]
在某些优选实施方案中,所述化合物Y和与之相连的碳原子之间为碳碳双键。
[0087]
在某些优选实施方案中,所述化合物Y和与之相连的碳原子之间为碳碳单键。
[0088]
在某些优选实施方案中,所述化合物具有如下结构:
[0089]
[0090]
其中,R 3和R 4各自独立地代表H、C 1-6烷基或C 1-6烷酰基;
[0091]
优选地,R 3和R 4各自独立地代表H、C 1-4烷基或C 1-4烷酰基;
[0092]
优选地,R 3和R 4各自独立地代表H、甲基或丁酰基。
[0093]
在某些优选实施方案中,所述化合物具有如下结构:
[0094]
[0095]
其中,R 4代表H、C 1-6烷酰基、C 1-6烷氧羰基或被一个或多个(例如1、2、3或4个)C 1-6烷酰基取代的单糖基;
[0096]
在某些优选实施方案中,R 4代表H、C 1-4烷酰基、C 1-4烷氧羰基或被一个或多个(例如1、2、3或4个)C 1-4烷酰基取代的葡萄糖糖基。
[0097]
在某些优选实施方案中,R 4代表H或C 1-2烷氧羰基。
[0098]
在某些优选实施方案中,R 4代表H、丁酰基、乙氧羰基或2,3,4,6-四乙酰氧基-α-D-吡喃葡萄糖糖基。
[0099]
在某些优选实施方案中,所述化合物选自下列化合物:
[0100]
[0101]
[0102]
[0103]
[0104]
在某些优选实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用作孤儿核受体Nur77的配体,用于抑制Nur77的转录活性。在某些优选实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用于抑制Nur77在细胞中的转录活性。在某些优选实施方案中,所述细胞表达Nur77。在某些优选实施方案中,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[0105]
在某些优选实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用作孤儿核受体Nur77的配体,用于抑制TNFα在细胞中的生物学效应。在某些优选实施方案中,TNFα的生物学效应为κB抑制蛋白(IκB)激酶α/β(IKKα/β)的磷酸化,IκBα的降解,NF-κB亚基p65的入核转运,和/或NF-κB的激活。在某些优选实施方案中,所述细胞表达Nur77。在某些优选实施方案中,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[0106]
在某些优选实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用作孤儿核受体Nur77的配体,用于抑制细胞中mTOR通路(例如下调P-mTOR、p-P70S6K和/或p-S6活性)。在某些优选实施方案中,所述细胞表达Nur77。在某些优选实施方案中,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[0107]
在某些优选实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用作孤儿核受体Nur77的配体,用于在有此需要的受试者中预防或治疗与Nur77相关的疾病。
[0108]
在某些优选实施方案中,所述与Nur77相关的疾病为癌症(例如所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用作孤儿核受体Nur77的配体,用于在有此需要的受试者中预防或治疗与Nur77相关的疾病。在某些优选实施方案中,所述与Nur77相关的疾病为癌症(例如三阴乳腺癌)。
[0109]
在另一个方面,本申请涉及一种抑制孤儿核受体Nur77的转录活性的方法,其包括,将Nur77与如式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯相接触的步骤:
[0110]
[0111]
其中,各原子和取代基的定义如本申请第一方面所述。
[0112]
在某些优选实施方案中,所述方法用于抑制Nur77在细胞中的转录活性。在某些优选实施方案中,所述方法包括,给有此需要的细胞施用有效量的所述化合物,从而抑制Nur77在细胞中的转录活性。在某些优选实施方案中,所述细胞表达Nur77。在某些优选实施方案中,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)
[0113]
在另一个方面,本申请涉及一种抑制TNFα在细胞中的生物学效应的方法,其包括,给有此需要的细胞施用有效量的如式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯:
[0114]
[0115]
其中各原子和取代基的定义如本申请第一方面所述。
[0116]
在某些优选实施方案中,TNFα的生物学效应为κB抑制蛋白(IκB)激酶α/β(IKKα/β)的磷酸化,IκBα的降解,NF-κB亚基p65的入核转运,和/或NF-κB的激活。在某些优选实施方案中,所述方法用于抑制TNFα诱导的IκBα降解。在某些优选实施方案中,所述细胞表达Nur77。在某些优选实施方案中,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[0117]
在另一个方面,本申请涉及一种抑制mTOR信号通路的方法,其包括,给有此需要的细胞施用有效量的如式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯:
[0118]
[0119]
其中个原子和取代基的定义如不申请第一方面所述。
[0120]
在某些优选实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用于下调细胞中P-mTOR、p-P70S6K和/或p-S6的活性。在某些优选实施方案中,所述细胞表达Nur77。在某些优选实施方案中,所述细胞为三 阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)
[0121]
在另一个方面,本申请涉及一种预防或治疗与Nur77相关的疾病的方法,其包括,给有此需要的受试者施用有效量的如式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯:
[0122]
[0123]
其中各原子和取代基的定义如本申请第一方面所述。
[0124]
在某些优选实施方案中,所述与Nur77相关的疾病为癌症(例如三阴乳腺癌)。
[0125]
在另一个方面,本申请涉及如式IV所示的化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯的用途,其用作孤儿核受体Nur77的配体,或者用于制备用作孤儿核受体Nur77的配体的药物:
[0126]
[0127]
其中,X代表NH、O或CH 2
[0128]
Y代表O、S或NR;
[0129]
R 5和R 6各自独立地代表代表H或C 1-6烷基;
[0130]
当R 7和与之相连的碳原子之间为单键时,R 7代表OH,当R 7和与之相连的碳原子 之间为双键时,R 7代表O;
[0131]
R 8代表H或C 1-6烷基;
[0132]
式(IV)中的虚实双键 代表单键或者双键。
[0133]
在某些优选实施方案中,所述化合物选自下列化合物:
[0134]
[0135]
在某些优选实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用作孤儿核受体Nur77的配体,用于抑制Nur77的转录活性。在某些优选实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用于抑制Nur77在细胞中的转录活性。在某些优选实施方案中,所述细胞表达Nur77。在某些优选实施方案中,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)
[0136]
在某些优选实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用作孤儿核受体Nur77的配体,用于抑制TNFα在细胞中的生物学效应。在某些优选实施方案中,TNFα的生物学效应为κB抑制蛋白(IκB)激酶α/β(IKKα/β)的磷酸化,IκBα的降解,NF-κB亚基p65的入核转运,和/或NF-κB的激活。在某些优选实施方案中,所述细胞表达Nur77。在某些优选实施方案中,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[0137]
在某些优选实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用作孤儿核受体Nur77的配体,用于抑制细胞中mTOR通路(例如下调P-mTOR、p-P70S6K和/或p-S6活性)。在某些优选实施方案中,所述细胞表达Nur77。在某些优选实施方案中,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例 如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[0138]
在某些优选实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用作孤儿核受体Nur77的配体,用于在有此需要的受试者中预防或治疗与Nur77相关的疾病。在某些优选实施方案中,所述与Nur77相关的疾病为癌症(例如三阴乳腺癌)。
[0139]
在另一个方面,本申请涉及一种抑制孤儿核受体Nur77的转录活性的方法,其包括,将Nur77与如式IV所示的化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯相接触的步骤:
[0140]
[0141]
其中,X代表NH、O或CH 2
[0142]
Y代表O、S或NR;
[0143]
R 5和R 6各自独立地代表代表H或C 1-6烷基;
[0144]
当R 7和与之相连的碳原子之间为单键时,R 7代表OH,当R 7和与之相连的碳原子之间为双键时,R 7代表O;
[0145]
R 8代表H或C 1-6烷基;
[0146]
式(IV)中的虚实双键 代表单键或者双键。
[0147]
在某些优选实施方案中,所述化合物选自下列化合物:
[0148]
[0149]
[0150]
在某些优选实施方案中,所述方法用于抑制Nur77在细胞中的转录活性。在某些优选实施方案中,所述方法包括,给有此需要的细胞施用有效量的所述化合物,从而抑制Nur77在细胞中的转录活性。在某些优选实施方案中,所述细胞表达Nur77。在某些优选实施方案中,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[0151]
在另一个方面,本申请涉及一种抑制TNFα在细胞中的生物学效应的方法,其包括,给有此需要的细胞施用有效量的如式IV所示的化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯:
[0152]
[0153]
其中,X代表NH、O或CH 2
[0154]
Y代表O、S或NR;
[0155]
R 5和R 6各自独立地代表代表H或C 1-6烷基;
[0156]
当R 7和与之相连的碳原子之间为单键时,R 7代表OH,当R 7和与之相连的碳原子之间为双键时,R 7代表O;
[0157]
R 8代表H或C 1-6烷基;
[0158]
式(IV)中的虚实双键 代表单键或者双键。
[0159]
在某些优选实施方案中,所述化合物选自下列化合物:
[0160]
[0161]
在某些优选实施方案中,TNFα的生物学效应为κB抑制蛋白(IκB)激酶α/β(IKKα/β)的磷酸化,IκBα的降解,NF-κB亚基p65的入核转运,和/或NF-κB的激活。在某些优选实施方案中,所述方法用于抑制TNFα诱导的IκBα降解。在某些优选实施方案中,所述细胞表达Nur77。在某些优选实施方案中,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[0162]
在另一个方面,本申请涉及一种抑制mTOR通路的方法,其包括,给有此需要的细胞施用有效量的如式IV所示的化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯:
[0163]
[0164]
其中,X代表NH、O或CH 2
[0165]
Y代表O、S或NR;
[0166]
R 5和R 6各自独立地代表代表H或C 1-6烷基;
[0167]
当R 7和与之相连的碳原子之间为单键时,R 7代表OH,当R 7和与之相连的碳原子之间为双键时,R 7代表O;
[0168]
R 8代表H或C 1-6烷基;
[0169]
式(IV)中的虚实双键 代表单键或者双键。
[0170]
在某些优选实施方案中,所述化合物选自下列化合物:
[0171]
[0172]
在某些优选实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用于下调P-mTOR、p-P70S6K和/或p-S6活性。在某些优选实施方案中,所述细胞表达Nur77。在某些优选实施方案中,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[0173]
在另一个方面,本申请涉及一种预防或治疗与Nur77相关的疾病的方法,其包括,给有此需要的受试者施用有效量的如式IV所示的化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯:
[0174]
[0175]
其中,X代表NH、O或CH 2
[0176]
Y代表O、S或NR;
[0177]
R 5和R 6各自独立地代表代表H或C 1-6烷基;
[0178]
当R 7和与之相连的碳原子之间为单键时,R 7代表OH,当R 7和与之相连的碳原子之间为双键时,R 7代表O;
[0179]
R 8代表H或C 1-6烷基;
[0180]
式(IV)中的虚实双键 代表单键或者双键。
[0181]
在某些优选实施方案中,所述化合物选自下列化合物:
[0182]
[0183]
在某些优选实施方案中,所述与Nur77相关的疾病为癌症(例如三阴乳腺癌)。
[0184]
在另一个方面,本申请涉及下列化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯的用途,其用作孤儿核受体Nur77的配体,或者用于制备用作孤儿核受体Nur77的配体的药物:
[0185]
[0186]
在某些优选实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用作孤儿核受体Nur77的配体,用于抑制Nur77的转录活性。在某些优选实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用于抑制Nur77在细胞中的转录活性。在某些优选实施方案中,所述细胞表达Nur77。在某些优选实施方案中,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[0187]
在某些优选实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接 受的盐或酯或者所述药物用作孤儿核受体Nur77的配体,用于抑制TNFα在细胞中的生物学效应。在某些优选实施方案中,TNFα的生物学效应为κB抑制蛋白(IκB)激酶α/β(IKKα/β)的磷酸化,IκBα的降解,NF-κB亚基p65的入核转运,和/或NF-κB的激活。在某些优选实施方案中,所述细胞表达Nur77。在某些优选实施方案中,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[0188]
在某些优选实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用作孤儿核受体Nur77的配体,用于抑制细胞中mTOR通路(例如下调P-mTOR、p-P70S6和/或p-S6活性)。在某些优选实施方案中,所述细胞表达Nur77。在某些优选实施方案中,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[0189]
在某些优选实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用作孤儿核受体Nur77的配体,用于在有此需要的受试者中预防或治疗与Nur77相关的疾病。在某些优选实施方案中,所述与Nur77相关的疾病为癌症(例如三阴乳腺癌)。
[0190]
在另一个方面,本申请涉及一种抑制孤儿核受体Nur77的转录活性的方法,其包括,将Nur77与下列化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯相接触的步骤:
[0191]
[0192]
在某些优选实施方案中,所述方法用于抑制Nur77在细胞中的转录活性。在某些优选实施方案中,所述方法包括,给有此需要的细胞施用有效量的所述化合物,从而抑制Nur77在细胞中的转录活性。在某些优选实施方案中,所述细胞表达Nur77。在 某些优选实施方案中,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[0193]
在另一个方面,本申请涉及一种抑制TNFα在细胞中的生物学效应的方法,其包括,给有此需要的细胞施用有效量的下列所示的化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯:
[0194]
[0195]
在某些优选实施方案中,TNFα的生物学效应为κB抑制蛋白(IκB)激酶α/β(IKKα/β)的磷酸化,IκBα的降解,NF-κB亚基p65的入核转运,和/或NF-κB的激活。在某些优选实施方案中,所述方法用于抑制TNFα诱导的IκBα降解。在某些优选实施方案中,所述细胞表达Nur77。在某些优选实施方案中,所述细胞为癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[0196]
在另一个方面,本申请涉及一种抑制mTOR通路的方法,其包括,给有此需要的细胞施用有效量的下列所示的化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯:
[0197]
[0198]
在某些优选实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用于下调P-mTOR、p-P70S6K和/或p-S6活性。在某些优选 实施方案中,所述细胞表达Nur77。在某些优选实施方案中,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[0199]
在另一个方面,本申请涉及一种预防或治疗与Nur77相关的疾病的方法,其包括,给有此需要的受试者施用有效量的如下所示的化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯:
[0200]
[0201]
在某些优选实施方案中,所述与Nur77相关的疾病为癌症(例如三阴乳腺癌)。
[0202]
在另一个方面,本申请涉及如下所示化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯:
[0203]
[0204]
其中,
[0205]
R 9和R 10各自独立地选自氢、C 1-6烷基和芳基;
[0206]
优选地,R 9和R 10各自独立地选自氢、C 1-4烷基、苯基和萘基;
[0207]
优选地,R 9和R 10各自独立地选自甲基、乙基和异丙基。
[0208]
在某些优选实施方案中,所述化合物选自下列化合物:
[0209]
[0210]
在另一个方面,本申请涉及如式V所示的化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯的用途,其用作孤儿核受体Nur77的配体,或者用于制备用作孤儿核受体Nur77的配体的药物:
[0211]
[0212]
其中,
[0213]
R 9和R 10各自独立地选自氢、C 1-6烷基和芳基;
[0214]
优选地,R 9和R 10各自独立地选自氢、C 1-4烷基、苯基和萘基;
[0215]
优选地,R 9和R 10各自独立地选自甲基、乙基和异丙基。
[0216]
在某些优选实施方案中,所述化合物选自下列化合物:
[0217]
[0218]
在某些优选的实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用作孤儿核受体Nur77的配体,用于抑制Nur77的转录活性。在某些优选的实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用于在体内、体外或离体抑制Nur77的转录活性。在某些 优选的实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用于抑制Nur77在细胞中的转录活性。在某些优选的实施方案中,所述细胞表达Nur77。在某些优选的实施方案中,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[0219]
在某些优选的实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用作孤儿核受体Nur77的配体,用于抑制TNFα在细胞中的生物学效应。在某些优选的实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用于在体内、体外或离体抑制TNFα在细胞中的生物学效应。在某些优选的实施方案中,TNFα的生物学效应为κB抑制蛋白(IκB)激酶α/β(IKKα/β)的磷酸化,IκBα的降解,NF-κB亚基p65的入核转运,和/或NF-κB的激活。在某些优选的实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用于抑制TNFα诱导的IκBα降解。在某些优选的实施方案中,所述细胞表达Nur77。在某些优选的实施方案中,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[0220]
在某些优选实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用作孤儿核受体Nur77的配体,用于抑制细胞中mTOR通路(例如下调P-mTOR、p-P70S6和/或p-S6活性)。在某些优选实施方案中,所述细胞表达Nur77。在某些优选实施方案中,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[0221]
在某些优选的实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用作孤儿核受体Nur77的配体,用于在有此需要的受试者中预防或治疗与Nur77相关的疾病。
[0222]
在某些优选的实施方案中,所述与Nur77相关的疾病为癌症。在某些优选的实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用于在患有癌症的受试者中抑制癌细胞的增殖和/或转移和/或促进癌细胞的凋亡。 在某些优选的实施方案中,所述癌症选自肝癌,宫颈癌,肺癌、和乳腺癌。在某些优选的实施方案中,所述癌症为三阴性乳腺癌(即,雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和原癌基因Her-2均为阴性的乳腺癌)。在某些优选的实施方案中,所述药物用于治疗癌症,并且包含所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯,以及TNFα。
[0223]
在另一个方面,本申请涉及一种抑制孤儿核受体Nur77的转录活性的方法,其包括,将Nur77与式V所示化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯相接触的步骤:
[0224]
[0225]
其中,
[0226]
R 9和R 10各自独立地选自氢、C 1-6烷基和芳基;
[0227]
优选地,R 9和R 10各自独立地选自氢、C 1-4烷基、苯基和萘基;
[0228]
优选地,R 9和R 10各自独立地选自甲基、乙基和异丙基。
[0229]
在某些优选实施方案中,所述化合物选自下列化合物:
[0230]
[0231]
在某些优选实施方案中,所述方法用于抑制Nur77在细胞中的转录活性。在某些优选实施方案中,所述方法包括,给有此需要的细胞施用有效量的所述化合物,从而抑制Nur77在细胞中的转录活性。在某些优选实施方案中,所述细胞表达Nur77。在 某些优选实施方案中,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[0232]
在另一个方面,本申请涉及一种抑制TNFα在细胞中的生物学效应的方法,其包括,给有此需要的细胞施用有效量的式V所示的化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯:
[0233]
[0234]
其中,
[0235]
R 9和R 10各自独立地选自氢、C 1-6烷基和芳基。
[0236]
在某些优选实施方案中,R 9和R 10各自独立地选自氢、C 1-4烷基、苯基和萘基。
[0237]
在某些优选实施方案中,R 9和R 10各自独立地选自甲基、乙基和异丙基。
[0238]
在某些优选实施方案中,所述化合物选自下列化合物:
[0239]
[0240]
在某些优选实施方案中,TNFα的生物学效应为κB抑制蛋白(IκB)激酶α/β(IKKα/β)的磷酸化,IκBα的降解,NF-κB亚基p65的入核转运,和/或NF-κB的激活。在某些优选实施方案中,所述方法用于抑制TNFα诱导的IκBα降解。在某些优选实施方案中,所述细胞表达Nur77。在某些优选实施方案中,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[0241]
在另一个方面,本申请涉及一种抑制mTOR通路的方法,其包括,给有此需要的细胞施用有效量的式V所示的化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯:
[0242]
[0243]
其中,
[0244]
R 9和R 10各自独立地选自氢、C 1-6烷基和芳基。
[0245]
在某些优选实施方案中,R 9和R 10各自独立地选自氢、C 1-4烷基、苯基和萘基。
[0246]
在某些优选实施方案中,R 9和R 10各自独立地选自甲基、乙基和异丙基。
[0247]
在某些优选实施方案中,所述化合物选自下列化合物:
[0248]
[0249]
在某些优选实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用于下调P-mTOR、p-P70S6K和/或p-S6活性。在某些优选实施方案中,所述细胞表达Nur77。在某些优选实施方案中,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[0250]
在另一个方面,本申请涉及一种预防或治疗与Nur77相关的疾病的方法,其包括,给有此需要的受试者施用有效量的式V所示的化合物、其互变异构体、立体异构体或 药学上可接受的盐或酯:
[0251]
[0252]
其中,
[0253]
R 9和R 10各自独立地选自氢、C 1-6烷基和芳基。
[0254]
在某些优选实施方案中,R 9和R 10各自独立地选自氢、C 1-4烷基、苯基和萘基。
[0255]
在某些优选实施方案中,R 9和R 10各自独立地选自甲基、乙基和异丙基。
[0256]
在某些优选实施方案中,所述化合物选自下列化合物:
[0257]
[0258]
在某些优选实施方案中,所述与Nur77相关的疾病为癌症(例如三阴乳腺癌)。
[0259]
在另一个方面,本申请涉及下列化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯:
[0260]
[0261]
在另一个方面,本申请涉及下列化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可 接受的盐或酯的用途,其用作孤儿核受体Nur77的配体,或者用于制备用作孤儿核受体Nur77的配体的药物:
[0262]
[0263]
在某些优选的实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用作孤儿核受体Nur77的配体,用于抑制Nur77的转录活性。在某些优选的实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用于在体内、体外或离体抑制Nur77的转录活性。在某些优选的实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用于抑制Nur77在细胞中的转录活性。在某些优选的实施方案中,所述细胞表达Nur77。在某些优选的实施方案中,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[0264]
在某些优选的实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用作孤儿核受体Nur77的配体,用于抑制TNFα在细胞中的生物学效应。在某些优选的实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用于在体内、体外或离体抑制TNFα在细胞中的生物学效应。在某些优选的实施方案中,TNFα的生物学效应为κB抑制蛋白(IκB)激酶α/β(IKKα/β)的磷酸化,IκBα的降解,NF-κB亚基p65的入核转运,和/或NF-κB的激活。在某些优选的实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用于抑制TNFα诱导的IκBα降解。在某些优选的实施方案中,所述细胞表达Nur77。在某些优选的实施方案中,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[0265]
在某些优选实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用作孤儿核受体Nur77的配体,用于抑制细胞中mTOR通路 (例如下调P-mTOR、p-P70S6和/或p-S6活性)。在某些优选实施方案中,所述细胞表达Nur77。在某些优选实施方案中,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[0266]
在某些优选的实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用作孤儿核受体Nur77的配体,用于在有此需要的受试者中预防或治疗与Nur77相关的疾病。在某些优选的实施方案中,所述与Nur77相关的疾病为癌症。在某些优选的实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用于在患有癌症的受试者中抑制癌细胞的增殖和/或转移和/或促进癌细胞的凋亡。在某些优选的实施方案中,所述癌症选自肝癌,宫颈癌,肺癌、和乳腺癌。在某些优选的实施方案中,所述癌症为三阴性乳腺癌(即,雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和原癌基因Her-2均为阴性的乳腺癌)。在某些优选的实施方案中,所述药物用于治疗癌症,并且包含所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯,以及TNFα。
[0267]
在另一个方面,本申请涉及一种抑制孤儿核受体Nur77的转录活性的方法,其包括,将Nur77与下列化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯相接触的步骤:
[0268]
[0269]
在某些优选实施方案中,所述方法用于抑制Nur77在细胞中的转录活性。在某些优选实施方案中,所述方法包括,给有此需要的细胞施用有效量的所述化合物,从而抑制Nur77在细胞中的转录活性。在某些优选实施方案中,所述细胞表达Nur77。在某些优选实施方案中,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[0270]
在另一个方面,本申请涉及一种抑制TNFα在细胞中的生物学效应的方法,其包括,给有此需要的细胞施用有效量的下列化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯:
[0271]
[0272]
在某些优选实施方案中,TNFα的生物学效应为κB抑制蛋白(IκB)激酶α/β(IKKα/β)的磷酸化,IκBα的降解,NF-κB亚基p65的入核转运,和/或NF-κB的激活。在某些优选实施方案中,所述方法用于抑制TNFα诱导的IκBα降解。在某些优选实施方案中,所述细胞表达Nur77。在某些优选实施方案中,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[0273]
在另一个方面,本申请涉及一种抑制mTOR通路的方法,其包括,给有此需要的细胞施用有效量的下列化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯:
[0274]
[0275]
在某些优选实施方案中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用于下调P-mTOR、p-P70S6K和/或p-S6活性。在某些优选实施方案中,所述细胞表达Nur77。在某些优选实施方案中,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[0276]
在另一个方面,本申请涉及一种预防或治疗与Nur77相关的疾病的方法,其包括, 给有此需要的受试者施用有效量的下列化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯:
[0277]
[0278]
在某些优选实施方案中,所述与Nur77相关的疾病为癌症(例如三阴乳腺癌)。
[0279]
在另一个方面,本申请涉及一种具有抗癌活性的药物的筛选方法,其包括以下步骤:
[0280]
(1)提供表达孤儿核受体Nur77的癌细胞(例如三阴乳腺癌细胞),设立阴性对照(即不表达Nur77);
[0281]
(2)将所述细胞用TNFα和候选试剂处理;
[0282]
(3)检测(例如通过免疫印迹法进行检测)处理后的细胞中P-mTOR、p-P70S6K和p-S6的水平;
[0283]
(4)比较所述细胞与阴性对照细胞中相应蛋白的水平,如有至少一种蛋白水平降低即判断所述候选试剂具有抗癌活性。
[0284]
发明的有益效果
[0285]
(1)本发明人首次发现,如式I-式V所示的化合物能够靶向孤儿核受体Nur77,并作为其配体发挥作用。例如,此类化合物可用于降低或抑制孤儿核受体Nur77的活性(例如转录活性)。
[0286]
(2)mTOR信号通路的抑制作用可作为筛选抗癌药物的有效指标。本发明人发现,通过Nur77抑制mTOR信号通路强的化合物具有潜在的抗癌活性。由此,本申请还提供了一种具有抗癌(特别是三阴性乳腺癌)活性的药物的筛选方法。
[0287]
(3)本申请的化合物还可用于预防和治疗与孤儿核受体Nur77相关的疾病,例如癌症(例如三阴乳腺癌)。因此,本发明提供了新的、有效的、特异性结合Nur77的 配体,其可用于开发治疗癌症(例如三阴乳腺癌)的新疗法。

具体实施方式

[0288]
现参照下列意在举例说明本发明(而非限定本发明)的实施例来描述本发明。
[0289]
除非特别指明,本发明中所使用的分子生物学实验方法和免疫检测法,基本上参照J.Sambrook等人,分子克隆:实验室手册,第2版,冷泉港实验室出版社,1989,以及F.M.Ausubel等人,精编分子生物学实验指南,第3版,John Wiley & Sons,Inc.,1995中所述的方法进行;限制性内切酶的使用依照产品制造商推荐的条件。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市购获得的常规产品。

附图说明

[0290]
图1显示了用Biacore T200仪器筛选能与Nur77结合的化合物。如图显示了用Biacore T200仪器检测YXY101与Nur77-LBD的结合的实验结果,其中,红色点代表化合物YXY101;蓝色点代表对照化合物。结果显示,化合物YXY101能够与Nur77-LBD结合。
[0291]
图2A显示了雷公藤红素(化合物YXY101)的化学结构式。
[0292]
图2B显示了进一步用不同浓度的YXY101(0.04μM,0.08μM,0.16μM,0.32μM,0.64μM)与Nur77-LBD的结合的实验结果。结果显示,化合物YXY101与Nur77-LBD结合的解离常数(Kd)为292nM;
[0293]
图2C显示了用圆二色光谱法检测YXY101与Nur77-LBD的结合的实验结果,其中,红色曲线代表YXY101+Nur77-LBD;蓝色曲线代表Nur77-LBD。结果显示,化合物YXY101能改变Nur77-LBD的CD光谱。这表明,化合物YXY101能够与Nur77-LBD结合。
[0294]
图2D显示了用HPLC法检测YXY101与Nur77-LBD的结合的实验结果,其中,红色曲线代表YXY101+Nur77-LBD;紫色曲线代表YXY101+RXRα-LBD。结果显示,化合物YXY101能够与Nur77-LBD结合形成复合体,但不与RXRα-LBD结合。
[0295]
图2E显示了用双荧光素酶报告基因系统检测YXY101与Nur77-LBD的结合的实 验结果。结果显示,化合物YXY101能抑制Nur77的转录激活功能,但对糖皮质激素受体(GR)的转录激活功能无明显作用。这表明,化合物YXY101能够与Nur77-LBD结合,并抑制其转录活性;并且,化合物YXY101不与GR结合。
[0296]
图2F显示了YXY101与Nur77的分子对接。分子对接结果显示,YXY101主要通过疏水作用结合到Nur77蛋白表面的已知的疏水凹槽。
[0297]
图3A-3B显示了经不同浓度的YXY101和TNFα处理的细胞中IκBα和磷酸化的IKKα/β的免疫印迹分析结果。
[0298]
图3C显示了经YXY101和TNFα处理的细胞的免疫荧光染色结果(Scale bar:20μm)。
[0299]
图3D显示了经YXY101和TNFα处理的细胞的NF-κB活性的分析结果,其中,**P<0.01,***P<0.001(T检验)。
[0300]
图3E显示了经不同浓度的YXY101和TNFα处理的不同癌细胞系中IκBα和磷酸化的IKKα/β的免疫印迹分析结果。
[0301]
图3F显示了经不同化合物处理、且接受TNFα刺激的HepG2细胞中IκBα的免疫印迹分析结果。
[0302]
图4A-4B显示了转染了不同siRNA、且经不同浓度的YXY101和TNFα处理的HepG2细胞中Nur77、RXRα和IκBα的免疫印迹分析结果。
[0303]
图4C显示了经不同浓度的YXY101和TNFα处理的MEF细胞和Nur77-/-MEF细胞中IκBα的免疫印迹分析结果。
[0304]
图4D显示了经YXY101和TNFα处理的MEF细胞和Nur77-/-MEF细胞的免疫荧光染色结果(Scale bar:10μm)。
[0305]
图4E显示了经不同浓度的XS0284和TNFα处理的MEF细胞和Nur77-/-MEF细胞中IκBα的免疫印迹分析结果。
[0306]
图5A显示了不同的乳腺癌细胞(MDA-MB-231;MDA-MB-468;BT549;SKBR3;T47D和MCF-7)的增殖比率对YXY101浓度的曲线,以及YXY101的IC50值;其中,MDA-MB-231,MDA-MB-468,BT549和SKBR3为三阴性乳腺癌细胞,用红色 曲线表示;T47D和MCF-7为三阳性乳腺癌细胞,用蓝色曲线表示。
[0307]
图5B显示了用不同浓度的YXY101(0μM,0.25μM,0.5μM,1μM,2μM,或4μM)处理的MDA-MB-231和MCF-7细胞中parp和ER的免疫印迹分析结果。
[0308]
图5C显示了用不同浓度的YXY101(0μM,2μM,或4μM)处理12h或24h的MDA-MB-231中parp和p-mTOR的免疫印迹分析结果。
[0309]
图5D显示,用YXY101与TNFα联合处理不同时间(1h,6h或12h)的MDA-MB-231细胞中parp的免疫印迹分析结果。
[0310]
图5E显示了Hela细胞的增殖比率对YXY101的浓度曲线,结果显示,YXY101对野生型Hela细胞的IC50值为1.189μM,而在Nur77敲除的Hela细胞中的IC50为58.166μM。
[0311]
图6显示了各组裸鼠的肿瘤组织的免疫组化染色结果。图6A的左图显示了各组裸鼠中形成的肿瘤;中间图显示了各组裸鼠中形成的肿瘤的RTV;右图显示了各组裸鼠中形成的肿瘤的重量。
[0312]
图7A显示了,在灌胃给药2mg/kg的YXY101两周后,11周,13周或17周的MMTV-PYVT小鼠的整体情况。
[0313]
图7B显示了,在灌胃给药2mg/kg的YXY101两周后,来自11周,13周或17周的MMTV-PYVT小鼠的肿瘤组织的HE染色和免疫组化染色的结果。
[0314]
图7C显示了,在灌胃给药2mg/kg的YXY101两周后,来自11周,13周或17周的MMTV-PYVT小鼠的肺组织的重量、形态、HE染色和免疫组化染色的分析结果。
[0315]
图8A显示了野生型mmtv-PyMT小鼠、敲除Nur77的mmtv-PyMT小鼠在60天内的存活曲线。
[0316]
图8B显示了野生型mmtv-PyMT小鼠、敲除Nur77的mmtv-PyMT小鼠在11周、13周、17周时的肿瘤重量对比的统计学结果。
[0317]
图8C显示了野生型mmtv-PyMT小鼠、敲除Nur77的mmtv-PyMT小鼠在11周、13周、17周时的肿瘤外观形态大小比较。
[0318]
图8D显示了在动物水平上检测YXY101对mmtv-PyMT小鼠存活率的影响。
[0319]
图9A显示了在饥饿条件下用TNFα处理MB-MDA-231乳腺癌细胞,运用免疫印 迹的技术检测p-P70S6K的结果。
[0320]
图9B显示了在饥饿条件下用TNFα处理SKBR3乳腺癌细胞,运用免疫印迹的技术检测p-P70S6K的结果。
[0321]
图9C显示了在饥饿条件下用TNFα处理野生型和Nur77敲除型的MEF细胞不同时间(30min、2h)或不同浓度(20ng/ml/、40ng/ml),并运用免疫印迹的技术检测p-mTOR、p-P70S6K、p-S6的结果。
[0322]
图10A显示了在饥饿条件下用TNFα(20ng/ml)、YXY101(1μM、2μM、4μM)处理MB-MDA-231乳腺癌细胞,并运用免疫印迹的技术检测p-mTOR、p-P70S6K的结果。
[0323]
图10B显示了在MB-MDA-231乳腺癌细胞中外转Flag空载质粒或者Flag-Nur77质粒,并在饥饿条件下用TNFα、YXY101处理3h、6h,运用免疫印迹的技术检测p-mTOR、p-P70S6K、Nur77的结果。
[0324]
图10C显示了对MB-MDA-231细胞进行沉默Nur77处理,并在饥饿条件下用TNFα、YXY101处理,运用免疫印迹的技术检测p-P70S6K、Nur77的结果。
[0325]
图10D显示了用TNFα、YXY101(0.5Mm、1μM)处理野生型或者Nur77敲除型的MEF细胞,运用免疫印迹的技术检测p-S6、p-mTOR、p62的结果。
[0326]
图11A显示了不同的乳腺癌细胞(MDA-MB-231和MCF-7)的增殖比率对XS0503浓度的曲线,以及XS0503的IC50值
[0327]
图11B显示了用YXY101衍生物XS0077、XS0335、XS0419、XS0474、XS0488处理的MDA-MB-231细胞的IC50分析结果。
[0328]
图11C显示了用YXY101衍生物XS0284、XS0285、XS0394、XS0418、XS0419、XS0474、XS0486、XS0462、XS0491、XS0492、XS0488处理的BT474、ZR-75-1、BT549、HCC1937、HS578T、MCF-7、T47D这七株乳腺癌细胞的抑制率分析结果。
[0329]
图12A显示了用YXY101(4μM)和不同的YXY101衍生物(4μM)XS0394、XS0395、XS0419、XS0420、XS0421、XS0284、XS0335、XS0488、XS0491、XS0492、XS0418、XS0502、XS0503、XS0504、XS0506、XS0507、XS0508、XS0077以及TNFα(20ng/ml) 处理的MDA-MB-231细胞中PARP的免疫印迹分析结果。
[0330]
图12B显示了在使用无血清培养基饥饿处理10h情况下,用YXY101(2μM)和不同的YXY101衍生物(2μM)XS0284、XS0285、XS0335、XS0394、XS0418、XS0419、XS0454、XS0455、XS0462、XS0473、XS0474、XS0480、XS0486、XS0488、XS0491、XS0492以及TNFα(20ng/ml)处理的MDA-MB-231细胞中P-mTOR、P-p70S6K、P-S6的免疫印迹分析结果。
[0331]
图12C显示了用YXY101(2μM)和YXY101衍生物XS0455(1、2、4μM)以及TNF(20ng/ml)处理的MDA-MB-231细胞中P-mTOR、P-p70S6K、P-S6和IκBα的免疫印迹分析结果。
[0332]
图13显示了用Biacore T200仪器检测不同化合物(XS0418、XS0419、XS0474、XS0394、XS0492、XS0491、XS0488)与Nur77-LBD的结合的实验结果。结果显示,化合物XS0418与Nur77-LBD结合的解离常数(Kd)为3.67μM;化合物XS0419与Nur77-LBD结合的解离常数(Kd)为404nM;化合物XS0474与Nur77-LBD结合的解离常数(Kd)为2.60μM;化合物XS0394与Nur77-LBD结合的解离常数(Kd)为1.26μM;化合物XS0492与Nur77-LBD结合的解离常数(Kd)为1.30μM;化合物XS0491与Nur77-LBD结合的解离常数(Kd)为0.336μM;化合物XS0488与Nur77-LBD结合的解离常数(Kd)为1.28μM。
[0333]
图14是使用WT小鼠和PYVT小鼠,分别给予LFD饲养和HFD饲养,并灌胃YXY101及其衍生物XS0284两个化合物进行处理。图14A显示了不同处理条件下,不同实验组老鼠的形态外观特征。图14B对比了以上老鼠肿瘤的形态大小特征。图14C显示了上述老鼠在灌胃给药的12天时间里的体重变化曲线。图14D显示了上述老鼠在处理前后的体重变化的统计学意义。
[0334]
图15A显示了在PYVT的WT和Nur77敲除的小鼠中,进行灌胃YXY101及其衍生物XS0284处理后,肿瘤的形态大小的比较。
[0335]
图15B显示了上述小鼠中肿瘤组织重量的统计学结果。
[0336]
图16显示了采用灌胃或腹腔注射200mg/kg的YXY101及其衍生物XS0284一次后诱发的小鼠急性毒性模型后,观察灌胃或腹腔注射YXY101和XS0284(200mg/kg) 12个小时后,分别观察各组小鼠心脏、肝脏、小肠、白色脂肪和肾脏的组织形态以及HE染色的结果。
[0337]
图17显示了利用计算机辅助模拟Nur77与其配体结合的作用模式图。
[0338]
实施例1.化合物YXY101的表征
[0339]
(1)表面等离子共振术(SPR)
[0340]
通过表面等离子共振术来测定YXY101与Nur77的结合。简言之,将50μg经纯化的Nur77配体结合域(Nur77-LBD)蛋白与Biacore的CM5芯片偶联;随后通过Biacore T200仪器来测定YXY101(20μm)与Nur77-LBD的结合。将无关化合物用作对照。测定结果示于图1中。
[0341]
图1显示了用Biacore T200仪器检测YXY101与Nur77-LBD的结合的实验结果,其中,红色点代表化合物YXY101;蓝色点代表对照化合物。结果显示,化合物YXY101能够与Nur77-LBD结合。
[0342]
(2)YXY101与Nur77的结合动力学
[0343]
通过表面等离子共振术来测定YXY101与Nur77的解离常数(Kd)。简言之,使用Biacore T200仪器来测定不同浓度的YXY101(0.04μM,0.08μM,0.16μM,0.32μM,0.64μM)与Nur77-LBD的结合。测定结果示于图2B中。
[0344]
结果显示,化合物YXY101与Nur77-LBD结合的解离常数(Kd)为292nM。
[0345]
(3)圆二色光谱法(CD)
[0346]
使用圆二色光谱法(CD)对YXY101与Nur77-LBD的结合作进一步分析。简言之,将YXY101(1ml,1mg/ml)加入Nur77-LBD蛋白(1ml,1mg/ml)的磷酸盐缓冲液(10μm,PH7.4)中,并在4℃下孵育3h。随后,取0.7ml的溶液,并用Jasco J-810分光偏振计进行检测。记录从190nm到260nm的CD光谱。将单独的Nur77-LBD溶液(即,未添加化合物YXY101)用作对照。检测结果示于图2C中。
[0347]
结果显示,化合物YXY101能改变Nur77-LBD的CD光谱。这表明,化合物YXY101能够与Nur77-LBD结合。
[0348]
(4)高效液相色谱(HPLC)分析
[0349]
使用高效液相色谱(HPLC)对YXY101与Nur77-LBD的结合作进一步分析。简言之,将YXY101(600uL,0.1mg/ml)与经纯化的Nur77-LBD蛋白(5ml,1mg/ml)共同孵育。在4℃条件下孵育3h后,用Ni beads捕获YXY101和Nur77-LBD的复合体。随后,使用氯仿将该复合体解离,并将解离产物中的YXY101萃取出来。然后,使用HPLC分光仪(Shimadzu LC 20A,Japan)来检测萃取产物中的YXY101,其中,所使用的柱子为ODS柱(5um,4.6*250mm),流动相为含有0.2%H 3PO 4的乙腈水溶液,检测波长为425nm。另外,还使用YXY101与RXRα-LBD(维甲类X受体α的配体结合域)重复上述实验,用作对照。检测结果示于图2D中。
[0350]
结果显示,化合物YXY101能够与Nur77-LBD结合形成复合体,但不与RXRα-LBD结合。
[0351]
(5)双荧光素酶报告基因检测法
[0352]
使用双荧光素酶报告基因检测法对YXY101与Nur77-LBD的结合作进一步分析。另外,还使用YXY101与糖皮质激素受体(GR)来重复该实验,用作对照。实验结果示于图2E中。
[0353]
结果显示,化合物YXY101能抑制Nur77的转录激活功能,但对糖皮质激素受体(GR)的转录激活功能无明显作用。这表明,化合物YXY101能够与Nur77-LBD结合,并抑制其转录活性;并且,化合物YXY101不与GR结合。
[0354]
(6)分子模拟
[0355]
使用AutoDock V4.2.来完成YXY101与Nur77(PDB code:4JGV)的对接。YXY101的构象由拉马克遗传算法构建。在Nur77的晶体结构中,格中心被选择在已报道的THPN坐标(-12.08,18.29,-4.233),网格尺寸设置为40*40*40(X,Y,Z)格点,每个格点的间隔为0.375A。
[0356]
在分子对接中,应用标准对接方案:随机放置个体数量为150;能量评估的最大数量为250万;基因突变的比率为0.02;交叉比率为0.8;个体进行局部搜索的概率为0.06;波的下界是0.01;分子可视化使用版本0.99的PyMOL。结果示于图2F中。
[0357]
分子对接结果显示,YXY101主要通过疏水作用结合到Nur77蛋白表面的已知的疏水凹槽。
[0358]
实施例2.YXY101抑制TNFα的生物学效应
[0359]
HepG2细胞用不同浓度的YXY101(0μM,0.25μM,0.5μM,1μM,2μM或4μM)处理1小时,再用TNFα(0ng/mL或20ng/mL)处理30分钟。随后,用免疫印迹法(Western Bloting)检测细胞中的IκBα和磷酸化的IKKα/β。结果示于图3A-3B中。
[0360]
图3A-3B的结果显示,TNFα能够在细胞中诱导IKKα/β的磷酸化以及IκBα的降解;而YXY101则能够抑制TNFα诱导的IKKα/β的磷酸化和IκBα的降解。
[0361]
HepG2细胞用YXY101(0或1μM)处理1小时,然后用TNFα(20ng/mL)处理30分钟。随后,用免疫荧光染色法检测细胞中的NF-κB亚基p65。未经处理的细胞用作对照。结果示于图3C中。
[0362]
图3C显示了经YXY101和TNFα处理的HepG2细胞的免疫荧光染色结果(Scalebar:20μm)。图3C的结果显示,TNFα能够在细胞中诱导NF-κB亚基p65的入核转运;而YXY101则能够抑制TNFα诱导的p65入核转运。
[0363]
将NF-κB的报告基因转染入HEK-293T细胞,然后用YXY101(0或1μM)和TNFα(20ng/mL)进行处理。随后,检测细胞中的NF-κB活性。未经处理的细胞用作对照。结果示于图3D中。
[0364]
图3D显示了经YXY101和TNFα处理的细胞的NF-κB活性的分析结果,其中,**P<0.01,***P<0.001(T检验)。图4D的结果显示,TNFα能够在细胞中诱导NF-κB的转录激活;而YXY101则能够抑制TNFα诱导的NF-κB转录激活。
[0365]
多种癌细胞系(LO2,SMMC-7721,QGY-7703,HeLa,H460)用不同浓度的YXY101(0μM,1μM或4μM)处理1小时,再用TNFα(0ng/mL或20ng/mL)处理30分钟。随后,用免疫印迹法(Western Bloting)检测细胞中的IκBα和磷酸化的IKKα/β。结果示于图3E中。
[0366]
结果显示,TNFα能够在各种细胞系中诱导IKKα/β的磷酸化以及IκBα的降解;而YXY101则能够抑制TNFα诱导的IKKα/β的磷酸化和IκBα的降解。
[0367]
另外,还使用HepG2细胞来进行实验。简言之,HepG2细胞用指定浓度的各种化合物(YXY101、XS0284和XS0287)处理指定的时间,然后再用TNFα(0ng/mL或20ng/mL)处理30分钟。随后,用免疫印迹法(Western Bloting)检测细胞中的IκBα。结果示于图3F中。
[0368]
图3F显示在HepG2细胞中,YXY101及其衍生物XS0284和XS0287能够抑制TNFα诱导的IκBα的降解。
[0369]
图3A-3F的结果表明,YXY101及其衍生物XS0284和XS0287能够抑制TNFα在细胞中的各种生物学效应,包括IKKα/β的磷酸化的磷酸化、IκBα的降解、NF-κB亚基p65的入核转运、和NF-κB的转录激活。
[0370]
实施例3.YXY101对TNFα生物学效应的抑制作用由Nur77介导
[0371]
将对照SiRNA、Nur77 SiRNA或RXRα SiRNA转染入HepG2细胞。随后,HepG2细胞用不同浓度的YXY101(0μM,1μM或4μM)处理1小时,再用TNFα(0ng/mL或20ng/mL)处理30分钟。随后,用免疫印迹法(Western Bloting)检测细胞中的Nur77、RXRα和IκBα。结果示于图4A-4B中。
[0372]
图4A-4B显示了转染了不同siRNA、且经不同浓度的YXY101和TNFα处理的HepG2细胞中Nur77、RXRα和IκBα的免疫印迹分析结果。结果显示,Nur77 SiRNA有效抑制/敲除了Nur77在细胞中的表达;并且,RXRα SiRNA有效抑制/敲除了RXRα在细胞中的表达;对照SiRNA则不影响Nur77和RXRα的正常表达。进一步,图5A-5B的结果显示,在表达Nur77的细胞中,YXY101均能够抑制TNFα诱导的IκBα的降解;然而,当Nur77的表达被敲除时,YXY101丧失了抑制IκBα降解的能力。这些结果表明,YXY101对TNFα生物学效应的抑制作用是由Nur77介导的。
[0373]
还使用MEF细胞和Nur77-/-MEF细胞(即,不表达Nur77的MEF细胞)验证了上述实验结果。简言之,MEF细胞和Nur77-/-MEF细胞用不同浓度的YXY101(0μM或1μM)处理1小时,再用TNFα(0ng/mL或20ng/mL)处理30分钟。随后,用免疫印迹法(Western Bloting)检测细胞中的IκBα。结果示于图4C中。
[0374]
结果显示,在表达Nur77的MEF细胞中,YXY101均能够抑制TNFα诱导的IκBα 的降解;然而,在Nur77-/-MEF细胞中,YXY101丧失了抑制IκBα降解的能力。这些结果表明,YXY101对TNFα生物学效应的抑制作用是由Nur77介导的。
[0375]
另外,将MEF细胞和Nur77-/-MEF细胞用YXY101(0或1μM)处理1小时,然后用TNFα(20ng/mL)处理30分钟。随后,用免疫荧光染色法检测细胞中的NF-κB亚基p65。未经处理的细胞用作对照。结果示于图4D中。
[0376]
图4D显示了经YXY101和TNFα处理的MEF细胞和Nur77-/-MEF细胞的免疫荧光染色结果(Scale bar:10μm)。结果显示,在表达Nur77的MEF细胞中,YXY101能够抑制TNFα诱导的p65入核转运;然而,在Nur77-/-MEF细胞中,YXY101丧失了抑制p65入核的能力。这些结果表明,YXY101对TNFα生物学效应的抑制作用是由Nur77介导的。
[0377]
图4E显示了经不同浓度的XS0284和TNFα处理的MEF细胞和Nur77-/-MEF细胞中IκBα的免疫印迹分析结果。结果显示,在表达Nur77的MEF细胞中,XS0284能够抑制TNFα诱导的IκBα的降解;然而,在Nur77-/-MEF细胞中,XS0284丧失了抑制IκBα降解的能力。这些结果表明,XS0284对TNFα生物学效应的抑制作用是由Nur77介导的。
[0378]
实施例4.YXY101具有明显抑制肿瘤的活性,其中对三阴性乳腺癌尤为敏感,此生物学功能依赖于Nur77
[0379]
用不同浓度的YXY101(1μM,1.3μM,1.6μM,1.9μM,2.2μM,2.5μM,2.8μM,3.1μM,3.4μM,3.7μM,4.0μM)处理不同的乳腺癌细胞(MDA-MB-231;MDA-MB-468;BT549;SKBR3;T47D和MCF-7)处理72h,并测定乳腺癌细胞的增殖比率。绘制癌细胞增殖比率对YXY101浓度的曲线,并测定YXY101的IC50。结果示于图5A中。
[0380]
图5A显示了不同的乳腺癌细胞(MDA-MB-231;MDA-MB-468;BT549;SKBR3;T47D和MCF-7)的增殖比率对YXY101浓度的曲线,以及YXY101的IC50值;其中,MDA-MB-231,MDA-MB-468,BT549和SKBR3为三阴性乳腺癌细胞,用红色曲线表示;T47D和MCF-7为三阳性乳腺癌细胞,用蓝色曲线表示。结果显示,YXY101 抑制三阴性乳腺癌细胞增殖的能力显著强于其抑制三阳性乳腺癌细胞增殖的能力;其中,YXY101抑制MDA-MB-231,MDA-MB-468,BT549和SKBR3增殖的IC50分别为1.204、0.187、0.245和2.646μM,远远低于其抑制T47D和MCF-7增殖的IC50(分别为74.465μM和11.498μM)。这表明YXY101可特别有利地用于治疗三阴性乳腺癌。
[0381]
图5E显示了YXY101在野生型的Hela细胞中的IC50值为1.189μM,而在Nur77敲除的Hela细胞中的IC50为58.166μM,结果表示YXY101发挥的肿瘤抑制作用是依赖于Nur77的,加之图1和图2B显示的YXY101能特异性结合Nur77,YXY101的肿瘤抑制活性与Nur77息息相关。
[0382]
进一步,用不同浓度的YXY101(0μM,0.25μM,0.5μM,1μM,2μM,或4μM)处理MDA-MB-231和MCF-7细胞,随后通过WB检测细胞中的parp和ER。结果示于图5B中。
[0383]
图5B显示了用不同浓度的YXY101(0μM,0.25μM,0.5μM,1μM,2μM,或4μM)处理的MDA-MB-231和MCF-7细胞中parp和ER的免疫印迹分析结果。结果显示,YXY101可以在MDA-MB-231中诱导parp切割,即凋亡现象产生。
[0384]
进一步,用不同浓度的YXY101(0μM,2μM,或4μM)处理MDA-MB-231不同时间(12h或24h),随后通过WB检测细胞中的parp和p-mTOR。结果示于图5C中。
[0385]
图5C显示了用不同浓度的YXY101(0μM,2μM,或4μM)处理12h或24h的MDA-MB-231中parp和p-mTOR的免疫印迹分析结果。结果显示,在MDA-MB-231中,YXY101诱导凋亡是时间依赖性和浓度依赖性。
[0386]
此外,还用YXY101与TNFα联合处理MDA-MB-231细胞不同时间(1h,6h或12h),随后通过WB检测细胞中的parp。结果示于图5D中。
[0387]
图5D显示,用YXY101与TNFα联合处理不同时间(1h,6h或12h)的MDA-MB-231细胞中parp的免疫印迹分析结果。结果显示,在MDA-MB-231中,YXY101与TNFα的联合给药能诱导更强的细胞凋亡。
[0388]
实施例5.YXY101对乳腺癌肿瘤的增殖的抑制作用
[0389]
在本部分,我们通过裸鼠移植瘤实验检测YXY101单独或与TNFα联合用药时对三阴性乳腺癌的抗肿瘤作用。
[0390]
1)实验动物和试剂
[0391]
MDA-MB-231细胞细胞,BALB/c(nu/nu)裸鼠,体重18-20g,雌性,SPF级动物房中饲养,饲料、饮用水、动物笼具、垫料均经高压灭菌处理,每两天更换垫料,严格无菌操作。无菌条件下,收集对数生长期的待接种细胞,用无血清培养液洗涤,倒置显微镜下计数活细胞数>95%,调整细胞浓度为1×10 6/ml,将肿瘤细胞重悬于PBS中制成细胞悬液。每只裸鼠右侧腋下接种0.2ml上述细胞悬液,定期观察测量肿瘤生长情况。
[0392]
2)分组及给药
[0393]
给药组:当裸鼠移植瘤直径达到约0.5cm时,选择无出血、坏死、感染的裸鼠进行实验,给裸鼠称重,测量瘤径,分组,每组6只裸鼠,实验组分别按TNFα(120×10 4U/kg)、YXY101(2mg/kg)、联合用药组给药,空白对照组给予等量的生理盐水。TNFα采用瘤内注射给药,隔天给药;YXY101灌胃给药,每天给药。末次给药6hr后处死裸鼠,称瘤重。
[0394]
治疗过程中,裸鼠进食量及体重无明显减少,活动度正常,无松毛、腹泻等中毒症状出现。治疗结束时,各组裸鼠均未出现死亡。裸鼠处死后,尸体解剖可见肿瘤边界清楚,表面凹凸不平,质地较坚韧,局部血管明显扩张,有的瘤块中心区可出现坏死。各组裸鼠均未见转移病灶,各处理组裸鼠的心、肝、脾、肺、肾等脏器未发现明显外观改变。
[0395]
3)观察指标
[0396]
肿瘤生长曲线的绘制:
[0397]
肿瘤体积(tumor volume,TV)的计算公式为:V=1/2×a×b×c;其中,a、b、c分别表示长宽高。根据测量结果计算出肿瘤体积,以时间为横坐标,肿瘤体积为纵坐标绘制肿瘤生长曲线。
[0398]
抗肿瘤活性评价指标为相对肿瘤增殖率T/C(%):其中T,治疗组的RTV;C,阴性对照组的RTV。疗效评价标准:T/C%>40%为无效;T/C%≤40%并且p<0.05为有效。
[0399]
实验结果示于图6中。图6A的左图显示了各组裸鼠中形成的肿瘤;中间图显示了各组裸鼠中形成的肿瘤的RTV;右图显示了各组裸鼠中形成的肿瘤的重量。图6A的结果显示,在接种MDA-MB-231细胞后,裸鼠产生了肿瘤;并且,YXY101有良好的抑制肿瘤的作用;并且YXY101与TNFα的联合给药能诱导更强的抑制肿瘤的作用。
[0400]
图6B显示了各组裸鼠的肿瘤组织的免疫组化染色结果。图6B的结果显示,YXY101能够在肿瘤组织内诱导caspase3的切割,促进肿瘤细胞的凋亡;并且YXY101与TNFα的联合给药能诱导更强的肿瘤细胞的凋亡。
[0401]
实施例6.YXY101对乳腺癌肿瘤的增殖与转移的抑制作用
[0402]
1)实验动物和试剂
[0403]
MMTV-PYVT乳腺癌转基因小鼠,9周龄大小,雌性,SPF级动物房中饲养,饲料、饮用水、动物笼具、垫料均经高压灭菌处理,每两天更换垫料,严格无菌操作。
[0404]
2)分组及给药
[0405]
雌性MMTV-PYVT乳腺癌转基因小鼠,在温度23±1℃,湿度:40-60%,自然光照,自由饮水,自由进食普通饲料的条件下饲养。选择胸部刚开始长肿瘤的36只小鼠,随机分为3大组,每大组再分为对照组和YXY101处理组。
[0406]
按照下述方法给药:
[0407]
11wk时间点
[0408]
对照组:取9周龄小鼠于每天晚上7点给予饲料前灌胃生理盐水;
[0409]
YXY101组:取9周龄小鼠于每天晚上7点给予饲料前灌胃一次,剂量2mg/kg。
[0410]
13k时间点
[0411]
对照组:取11周龄小鼠于每天晚上7点给予饲料前灌胃生理盐水;
[0412]
YXY101组:取11周龄小鼠于每天晚上7点给予饲料前灌胃一次,剂量2mg/kg。
[0413]
17k时间点
[0414]
对照组:取15周龄小鼠于每天晚上7点给予饲料前灌胃生理盐水;
[0415]
YXY101组:取15周龄小鼠于每天晚上7点给予饲料前灌胃一次,剂量2mg/kg。
[0416]
按照上述方法连续给药2周后,对于每一只动物,摘眼球取血,移取上清测定血清炎症指标;取边界清楚,表面凹凸不平,质地较坚韧的肿瘤组织进行常规处理及包 埋,用于免疫染色。
[0417]
实验结果示于图7和图8中。图7A显示了,在灌胃给药2mg/kg的YXY101两周后,11周,13周或17周的MMTV-PYVT小鼠的整体情况。图7A的结果显示,YXY101能抑制乳腺癌肿瘤的进展。
[0418]
图7B显示了,在灌胃给药2mg/kg的YXY101两周后,来自11周,13周或17周的MMTV-PYVT小鼠的肿瘤组织的HE染色和免疫组化染色的结果。图7B的结果显示,YXY101可以抑制乳腺癌肿瘤的增殖。
[0419]
图7C显示了,在灌胃给药2mg/kg的YXY101两周后,来自11周,13周或17周的MMTV-PYVT小鼠的肺组织的重量、形态、HE染色和免疫组化染色的分析结果。图7C的结果显示,YXY101可以抑制乳腺癌引起的肺转移。
[0420]
图7A-7C的这些实验结果表明,YXY101能够抑制乳腺癌肿瘤的增殖与转移。
[0421]
图8A显示了,在动物水平上,野生型的mmtv-PyMT小鼠和Nur77敲除的mmtv-PyMT小鼠在60天内的存活率曲线,图8D显示了,在动物水平上检测YXY101对mmtv-PyMT小鼠存活率的影响。结果表明,敲除了Nur77后小鼠的存活率显著提高,该结果预示着Nur77与乳腺癌的发生发展有显著地关联。图8B显示了上述两种小鼠的肿瘤组织重量的统计学结果,结果显示,敲除了Nur77后,乳腺癌瘤组织的重量能够明显下降,图8C也显示了这些瘤组织的外观形态比较,能够清晰地比较出敲除Nur77小鼠的瘤组织更小也更平滑。以上结果均表明Nur77在乳腺癌的发生发展过程中起着至关重要的作用。
[0422]
综上所述,我们创新性地以Nur77为靶点,运用SPR手段筛选得到能够特异性结合Nur77的药物分子YXY101,其具有显著的抑制肿瘤活性,特别是对于三阴性乳腺癌非常敏感,而这种对于乳腺癌的治疗活性是依赖于Nur77的。该化合物是非常具有前景的治疗三阴乳腺癌的活性分子,而这种筛选方法是一种发现特异性结合Nur77并靶向治疗三阴性乳腺癌化合物药物分子的有效方式。
[0423]
实施例7.炎症能一定程度上诱导肿瘤产生,该过程与Nur77相关
[0424]
在前期调研中,我们发现乳腺癌特别是三阴性乳腺癌的发生发展同样始终伴随着 炎症反应及mTOR信号通路的高度激活,慢性炎症同样是乳腺癌发生发展的重要基础,并且也有许多对其他肿瘤有效的非类固醇类消炎药,也被拿来用于乳腺癌的防治。
[0425]
图9A-9B显示,在饥饿条件下用TNFα处理MB-MDA-231、SKBR3这两种乳腺癌细胞1h、3h、6h后,运用免疫印迹的手段检测p-P70S6K,结果显示,在TNFα的诱导下p-P70S6K能够上调,并具有时间依赖性,结果表明在炎症环境下,mTOR信号通路被激活,这可能与肿瘤的发生密切相关。图9C显示,在饥饿条件下用TNFα浓度梯度或时间梯度地处理野生型或Nur77敲除型的MEF细胞,用免疫印迹手段检测p-mTOR、p-P70S6K、p-S6,结果显示,TNFα对mTOR信号通路的激活受时间和浓度调控,并且此种激活是依赖于Nur77的。
[0426]
结合实施例6和实施例7,Nur77不仅对于乳腺癌的发生发展而言至关重要,同时也能作为药物的靶点来治疗乳腺癌,故Nur77是一种具有价值的检测乳腺癌发生发展的生化指标,用以评估乳腺癌进程、评估乳腺癌的治疗策略等。
[0427]
实施例8.YXY101能够显著抑制mTOR活性,进而抑制肿瘤,该过程依赖于Nur77
[0428]
本部分实验模拟肿瘤内环境,即以TNFα这个引起急性炎症的细胞因子来模拟肿瘤发生,这种方法能够为之后筛选抑制肿瘤药物提供实验基础。通过这种方法筛选Nur77依赖性的抑制mTOR信号通路的化合物,从而找到有效治疗三阴性乳腺癌的靶向性药物。
[0429]
图10A显示了在饥饿条件下用TNFα(20ng/ml)、YXY101(1μM、2μM、4μM)处理MB-MDA-231乳腺癌细胞,并运用免疫印迹的技术检测p-mTOR、p-P70S6K的结果。结果表明,YXY101能显著下调由TNFα所激活的p-mTOR、p-P70S6K,预示着抑制mTOR的活性可能是其抑制肿瘤的内在机理。图10B显示了在MB-MDA-231乳腺癌细胞中外转Flag空载质粒或者Flag-Nur77质粒,并在饥饿条件下用TNFα、YXY101处理3h、6h,运用免疫印迹的技术检测p-mTOR、p-P70S6K、Nur77的结果。图10C显示了对MB-MDA-231细胞进行沉默Nur77处理,并在饥饿条件下用TNFα、YXY101处理,运用免疫印迹的技术检测p-P70S6K、Nur77的结果。图10D显示了用 TNFα、YXY101(0.5Mm、1μM)处理野生型或者Nur77敲除型的MEF细胞,运用免疫印迹的技术检测p-S6、p-mTOR、p62的结果。综合图10B-10D的结果,从过表达和敲除Nur77的两种方式同时表明YXY101下调mTOR活性的活性是依赖于Nur77的。
[0430]
综上,mTOR信号通路的抑制作用可作为筛选抗癌药物的有效指标,通过这种方法筛选出通过Nur77抑制mTOR信号通路强的化合物具有潜在的抗癌活性。
[0431]
实施例9.YXY101衍生物对三阴性乳腺癌细胞的促凋亡作用
[0432]
用不同浓度的YXY101衍生物XS0503(0.16μM,0.31μM,0.625μM,1.25μM,2.5μM,5μM,10.0μM)处理不同的乳腺癌细胞(MDA-MB-231和MCF-7)处理24h,并测定乳腺癌细胞的增殖比率。绘制癌细胞增殖比率对XS0503浓度的曲线,并测定YXY101的IC50。结果示于图11A中。
[0433]
图11A显示了不同的乳腺癌细胞(MDA-MB-231和MCF-7)的增殖比率对XS0503浓度的曲线,以及XS0503的IC50值;其中,MDA-MB-231用红色曲线表示;MCF-7为三阳性乳腺癌细胞,用蓝色曲线表示。结果显示,XS0503抑制三阴性乳腺癌细胞增殖的能力显著强于其抑制三阳性乳腺癌细胞增殖的能力;其中,XS0503抑制MDA-MB-231增殖的IC50为1.19μM,低于其抑制MCF-7增殖的IC50(2.65μM)。这表明YXY101可特别有利地用于治疗三阴性乳腺癌。
[0434]
进一步,用不同的YXY101衍生物XS0077、XS0335、XS0419、XS0474、XS0488(0.16μM,0.31μM,0.625μM,1.25μM,2.5μM,5μM,10.0μM)处理MDA-MB-231,随后测定MDA-MB-231的增殖比率。结果示于图11B中。结果显示,XS0077、XS0335、XS0419、XS0474、XS0488抑制MDA-MB-231增殖的IC50分别为1.84μM,1.88μM,1.27μM,2.93μM,1.90μM。
[0435]
图11C显示了用YXY101衍生物XS0284、XS0285、XS0394、XS0418、XS0419、XS0474、XS0486、XS0462、XS0491、XS0492、XS0488处理的BT474、ZR-75-1、BT549、HCC1937、HS578T、MCF-7、T47D这七株乳腺癌细胞的抑制率分析结果。结果显示,以上衍生物对不同的乳腺癌细胞均有一定的抑制作用,其中XS0284、XS0285、XS0418、 XS0419、XS0462、XS0488对多种乳腺癌细胞的抑制作用接近甚至强于YXY101。
[0436]
进一步的,用YXY101(4μM)和不同的YXY101衍生物(4μM)XS0394、XS0395、XS0419、XS0420、XS0421、XS0284、XS0335、XS0488、XS0491、XS0492、XS0418、XS0502、XS0503、XS0504、XS0506、XS0507、XS0508、XS0077以及TNFα(20ng/ml)处理的MDA-MB-231细胞中PARP的免疫印迹分析。结果如图12A中表明,红色字体标记的衍生物相比YXY101而言,更加显著地诱导三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞中PARP切割,包括XS0418、XS0419、XS0492、XS0508、XS0077。
[0437]
图12B显示了在使用无血清培养基饥饿处理10h情况下,用YXY101(2μM)和不同的YXY101衍生物(2μM)XS0284、XS0285、XS0335、XS0394、XS0418、XS0419、XS0454、XS0455、XS0462、XS0473、XS0474、XS0480、XS0486、XS0488、XS0491、XS0492以及TNFα(20ng/ml)处理的MDA-MB-231细胞中P-mTOR、P-p70S6K、P-S6的免疫印迹分析结果。红色字体标记的衍生物相比YXY101而言,更加显著地降低P-mTOR、P-p70S6K、P-S6,包括XS0335、XS0394、XS0418、XS0419、XS0455、XS0474、XS0486、XS0491、XS0492。
[0438]
图12C显示了用YXY101(2μM)和YXY101衍生物XS0455(1、2、4μM)以及TNFα(20ng/ml)处理的MDA-MB-231细胞中P-mTOR、P-p70S6K、P-S6和IκBα的免疫印迹分析结果。结果显示XS0455能够浓度依赖地下调P-mTOR、P-p70S6K、P-S6,而不会明显引起PARP切割和IκBα的降解逆转。结合前期数据,XS0455能够选择性下调P-mTOR、P-p70S6K、P-S6,但不会明显引起PARP切割和IκBα的降解逆转,该化合物有望成为新型专一性抗癌的药物分子。
[0439]
实施例10.表面等离子共振术(SPR)对其他化合物的表征
[0440]
根据实施例1和2中所描述的方法,使用Biacore T200仪器,通过SPR来检测多种YXY101衍生物物(XS0418、XS0419、XS0474、XS0394、XS0492、XS0491、XS0488)与Nur77-LBD的结合。结果示于图13中。
[0441]
图13显示了用Biacore T200仪器检测不同化合物(XS0418、XS0419、XS0474、XS0394、XS0492、XS0491、XS0488)与Nur77-LBD的结合的实验结果。结果显示, 化合物XS0418与Nur77-LBD结合的解离常数(Kd)为3.67μM;化合物XS0419与Nur77-LBD结合的解离常数(Kd)为404nM;化合物XS0474与Nur77-LBD结合的解离常数(Kd)为2.60μM;化合物XS0394与Nur77-LBD结合的解离常数(Kd)为1.26μM;化合物XS0492与Nur77-LBD结合的解离常数(Kd)为1.30μM;化合物XS0491与Nur77-LBD结合的解离常数(Kd)为0.336μM;化合物XS0488与Nur77-LBD结合的解离常数(Kd)为1.28μM。
[0442]
实施例11.XS0284对高脂诱导的乳腺癌的治疗作用强于YXY101
[0443]
为了证明YXY101衍生物也能抑制乳腺癌,我们选取其中抑制P-mTOR、P-p70S6K、P-S6效果明显的XS0284进行验证。图14A-14D的结果显示,无论是低脂条件或是高脂条件饲养下,YXY101和XS0284均能明显抑制乳腺癌的发展,其中在低脂饲养条件下,XS0284的抑制乳腺癌的作用接近于YXY101,而在高脂饲养条件下,XS0284的抑制作用强于YXY101,以上结论可从瘤组织大小和小鼠体重变化等方面体现。
[0444]
这些结果表明,YXY101的系列衍生物(例如XS0284)亦能抑制肿瘤的发展,甚至肿瘤抑制的效果优于YXY101。
[0445]
实施例12.YXY101及其衍生物的抑制肿瘤作用是依赖于Nur77的
[0446]
为了验证YXY101及其衍生物发挥抑制肿瘤作用与Nur77的依赖关系,我们选取其中抑制P-mTOR、P-p70S6K、P-S6效果明显的YXY101及其衍生物XS0284进行验证。图15A-15B显示了两种PYVT小鼠,野生型和Nur77敲除型,分别灌胃给药YXY101(5mg/kg)、XS0284(10mg/kg)两周。通过对比各实验组瘤组织大小,结果表明,在野生型小鼠中,YXY101以及XS0284均能有效抑制肿瘤,但在Nur77缺失小鼠中,两种化合物均不能发挥出抑制作用。
[0447]
以上结果表明,YXY101及其衍生物发挥其肿瘤抑制作用是依赖于Nur77的。
[0448]
实施例13.XS0284的药物急性毒副作用低于YXY101
[0449]
本实施例采用,一次性灌胃注射200mg/kg的YXY101及其衍生物XS0284或腹腔注射20mg/kg的YXY101及其衍生物XS0284后诱发的小鼠急性毒性模型。在本实施例中,灌胃或腹腔注射YXY101和XS0284后,分别观察各组小鼠进食量、饮水、自发活动能力、精神状态、四肢活动、大小便质量、毛发光泽等,并且详细记录可能出现的一些毒性反应化及开始和消失时间点。组织病理学观察心脏、肝脏、小肠、白色脂肪和肾脏的组织形态。
[0450]
实验结果如图16所示。图16A显示了灌胃组:1)空白组小鼠的心脏心肌细胞界限清晰,胞核多且明显,心肌纤维排列整齐,界限明显;肝组织中肝窦数量多且清楚,肝小叶界限明显;肠组织界限清晰,细胞饱满,肠绒毛排列整齐、界限明显;脂肪组织细胞界限清晰、排列整齐。2)与空白组比,YXY101组小鼠的心肌细胞和心肌纤维排列杂乱;肝小叶界限模糊,胞浆减少,肝细胞多数出现死亡;肠组织肿胀明显,细胞死亡增多,炎症反应明显,肠绒毛排列紊乱;脂肪组织细胞排列杂乱,个别纤维断裂。3)与空白组比,XS0284组小鼠的心脏心肌细胞界限相对清晰,心肌纤维相对排列整齐,界限明显;肝组织中肝细胞界限明显,结构清晰;肠组织界限清晰,细胞饱满,肠绒毛排列整齐、界限明显;脂肪组织细胞界限清晰、排列整齐,纤维断裂减少。由此可以得出衍生物XS0284组显示对肝脏和小肠的毒性作用比YXY101更弱。
[0451]
图16B显示了腹腔注射组1)空白组小鼠的心脏心肌细胞界限清晰,胞核多且明显,心肌纤维排列整齐,界限明显;肝组织中肝窦数量多且清楚,肝小叶界限明显;脂肪组织细胞界限清晰、排列整齐;肾脏组织肾小球界限清晰,细胞饱满,排列整齐、界限明显。2)与空白组比,YXY101组小鼠的心肌细胞和心肌纤维排列杂乱;肝小叶界限基本明显,肝细胞饱满形态正常;但脂肪组织细胞排列杂乱,且有大量炎性细胞浸润;肾脏组织肾小球界限模糊,且有大量炎性细胞浸润,排列不整齐。3)与空白组比,XS0284组小鼠的心脏心肌细胞界限相对清晰,心肌纤维相对排列整齐,界限明显;肝组织中肝细胞界限明显,结构清晰;脂肪组织细胞界限清晰、排列整齐,纤维断裂减少;肾脏组织肾小球界限清晰,细胞饱满,有少量炎性细胞浸润。由此可以得出腹腔注射组衍生物XS0284组显示对肾脏和脂肪的毒性作用比YXY101更弱。
[0452]
这些结果表明YXY101的系列衍生物,例如XS0284具有比YXY101更低的动物 急性毒作用。进一步提示着这系列化合物具有比YXY101更强的靶向性和专一性,以及这系列YXY101衍生物作为开发成更安全的抗癌药的可能。
[0453]
实施例14.
[0454]
利用计算机辅助分子对接技术,以Nur77为靶点。对海洋天然产物进行虚拟筛选从中获得一些结合较好的化合物,具体如下所示。
[0455]
[0456]
该实例中利用计算机辅助进行虚拟筛选的步骤如下:下载蛋白共晶结构PDB ID:3V3Q,蛋白预处理,加氢,去除结晶水分子和晶体结构中甘油小分子;选中配体,以配体为中心,12angstrom的大小构建对接grid格点文件;运行Glide docking,选中事先构建的grid格点文件和处理好的Seaweed Metabolism Database进行对接;根据对接打分和化合物与蛋白受体之间的相互作用,对对接结果进行综合评价。模拟结合的作用模式图示例见图17。
[0457]
化合物XS0077的制备
[0458]
[0459]
首先将化合物YXY101(50mg,0.11mmol)搅拌溶解于2mL DMF中,随后加入碳酸氢钠(56mg,0.66mmol),碘甲烷(42μL,0.66mmol)室温搅拌反应12小时。1mol/L HCl(1mL)淬灭反应,加入9mL纯水,用乙酸乙酯萃取3次(每次5mL),收集有机层,无水硫酸钠干燥后,用减压蒸馏法除去有机溶剂乙酸乙酯,得到橘红色固体混合粗品。以正己烷和乙酸乙酯(hexane/ethyl acetate=10∶1)为洗脱剂,300-400目硅胶填充柱层析分离,得到橘红色固体产物。
[0460]
1H NMR(600MHz,DMSO-d 6)δppm 0.44(s,3H),0.91(d,J=14.31Hz,1H),1.07(s,3H),1.12(s,3H),1.21(s,3H),1.30-1.35(m,1H),1.38(s,3H),1.41-1.46(m,1H),1.50-1.59(m,3H),1.61-1.72(m,4H),1.78-1.86(m,1H),1.95(td,J=13.98,3.76Hz,1H),2.06(d,J=14.12Hz,1H),2.09(s,3H),2.17-2.22(m,1H),2.31(d,J=15.77Hz,1H),3.48(s,3H),6.35(d,J=7.15Hz,1H),6.39(d,J=1.28Hz,1H),7.07(dd,J=7.15,1.10Hz,1H),8.72(s,1H).
[0461]
13C NMR(151MHz,DMSO-d 6)δppm 10.10,17.96,21.41,28.08,29.19,29.42,30.12,30.34,31.34,32.23,32.91,34.39,36.02,37.83,38.8,39.83,41.99,43.64,44.48,51.44,117.26,118.05,120.18,126.89,133.13,146.42,162.94,167.80,177.93,177.96.
[0462]
实施例15.化合物XS0284的制备
[0463]
[0464]
在氮气环境下,在搅拌条件下,将化合物YXY101(50mg,0.11mmol)溶于甲醇(2.5mL)。加入亚硫酸氢钠水溶液(14mg,0.13mmol,溶解于1mL水中),并于室温下反应3小时。反应后,用旋转蒸发仪浓缩反应体系得无色晶体。用甲醇/水对无色晶体进行重结晶,所获得的产物经真空干燥得呈白色固体的化合物XS0284(56.6mg)。
[0465]
1H NMR(600MHz,DMSO-d 6)δppm 0.59(s,3H)0.86(d,J=12.10Hz,1H)1.05(s,3H)1.09(s,3H)1.18(s,3H)1.43-1.60(m,6H)1.62(s,3H)1.78-1.85(m,1H)1.93-2.04(m,3H)2.21(s,3H)2.32(d,J=15.22Hz,1H)4.48(d,J=6.24Hz,1H)5.81(d,J=6.60Hz,1H)6.58(s,1H)7.61(br.s.,1H)8.81(br.s.,1H).
[0466]
13C NMR(151MHz,DMSO-d 6)δppm 13.57,18.46,21.64,29.04,29.98,30.47,30.60,30.64,31.94,32.92,34.80,35.11,36.90,36.96,37.90,38.07,43.95,44.39,60.19,108.96,118.87,123.26,124.39,140.89,141.93,144.02,150.07,180.00.
[0467]
实施例16.化合物XS0285的制备
[0468]
[0469]
在搅拌条件下,将化合物YXY101(50mg,0.11mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)。加入碳酸氢钠(50.4mg,0.6mmol),然后加入苄基溴(0.17mg,20μL),并于室温下搅拌反应24小时。停止反应,向反应体系中加入去离子水(15mL),并用 乙酸乙酯萃取3次。合并乙酸乙酯层,用饱和NaCl水溶液洗涤3次,用无水Na 2SO 4干燥,用旋转蒸发仪浓缩得粗产物(深红棕色油状物)。粗产物经快速柱层析法(乙酸乙酯∶正己烷)分离纯化,真空干燥得呈红色固体的化合物XS-0285(44mg)。
[0470]
1H NMR(600MHz,CHLOROFORM-d)δppm 0.50(s,3H)0.97(d,J=13.75Hz,1H)1.09(s,3H)1.21(s,3H)1.22-1.25(m,3H)1.25-1.28(m,1H)1.41(s,3H)1.47-1.58(m,3H)1.58-1.72(m,5H)1.87(d,J=6.05Hz,1H)1.99-2.11(m,3H)2.21(d,J=1.65Hz,3H)2.24(d,J=14.12Hz,1H)2.44(d,J=15.77Hz,1H)4.93(d,J=12.29Hz,1H)5.02(d,J=12.47Hz,1H)6.32(d,J=7.15Hz,1H)6.49(s,1H)7.01(d,J=6.97Hz,1H)7.27-7.30(m,2H)7.30-7.36(m,3H).
[0471]
13C NMR(151MHz,CHLOROFORM-d)δppm 10.29,18.53,21.58,28.61,29.53,29.90,30.55,30.76,31.57,32.76,33.27,34.69,36.35,38.25,39.43,40.44,42.93,44.25,45.03,66.32,117.36,118.12,119.62,127.38,128.24,128.32,128.64,134.24,135.68,146.06,164.79,170.27,177.95,178.36.
[0472]
实施例17.化合物XS0335的制备
[0473]
[0474]
在搅拌条件下,将化合物YXY101(50mg,0.11mmol)溶于二氯甲烷(1mL)。加入钯碳(5mg),再加入二氯甲烷(1mL),持续通入氢气,并在室温下搅拌反应24小时。停止反应,向反应体系中加入去离子水(15mL),并用乙酸乙酯萃取3次。合并乙酸乙酯层,然后用饱和NaCl洗3次,用无水Na 2SO 4干燥,用旋转蒸发仪浓缩得粗产物(无色油状物)。粗产物经快速柱层析法(乙酸乙酯∶正己烷)分离纯化,真空干燥得呈白色固体的化合物XS-0335(46mg)。
[0475]
1H NMR(600MHz,METHANOL-d 4)δppm 0.93-1.00(m,2H)1.03(s,3H)1.11 (s,3H)1.19(t,J=3.48Hz,4H)1.26(s,3H)1.41-1.45(m,6H)1.47-1.55(m,2H)1.57(d,J=8.25Hz,1H)1.59-1.68(m,2H)1.83-1.98(m,3H)2.06-2.11(m,4H)2.11-2.20(m,4H)2.43(d,J=15.77Hz,1H)2.68(d,J=14.67Hz,1H)6.67(s,1H).
[0476]
13C NMR(151MHz,METHANOL-d 4)δppm 11.94,18.51,20.54,26.82,28.66,30.74,31.15,31.57,31.61,32.02,32.09,32.32,33.63,34.65,37.09,37.56,38.53,39.45,39.85,41.69,58.12,58.48,112.24,121.74,129.36,141.47,142.39,144.19,182.95.
[0477]
实施例18.化合物XS0366,XS0434-XS0438,XS0440,XS0441,XS0443,XS0463和XS0464的制备
[0478]
[0479]
以XS0366为例,在搅拌条件下,将化合物YXY101(100mg,0.22mmol)溶于二氯甲烷(4mL)。加入吲哚(52mg,0.44mmol),再加入六水合三氯化铝(5.3mg,0.022mmol),并在室温下搅拌反应5小时。停止反应,向反应体系中加入去离子水(15mL),并用乙酸乙酯萃取3次。合并乙酸乙酯层,然后用饱和NaCl洗3次,用无水Na 2SO 4干燥,用旋转蒸发仪浓缩得粗产物(棕色油状物)。粗产物经快速柱层析法(乙酸乙酯∶正己烷)分离纯化,真空干燥得呈紫红色固体的化合物XS0366(122.2mg)。
[0480]
1H NMR(600MHz,CHLOROFORM-d)δppm 0.73(br.s.,3H)0.87-0.90(m,1H)0.95-1.00(m,3H)1.01(br.s.,3H)1.14(br.s.,3H)1.19(t,J=7.06Hz,1H)1.25-1.27(m,1H)1.34(br.s.,3H)1.42-1.57(m,4H)1.57-1.76(m,4H)1.90(s,3H)1.99-2.07(m,2H)2.10-2.17(m,1H)2.40(d,J=15.04Hz,1H)4.90(d,J=5.69Hz,1H) 6.21(d,J=6.24Hz,1H)6.23(br.s.,1H)6.79(br.s.,1H)7.11(t,J=7.43Hz,1H)7.16(t,J=7.43Hz,1H)7.28(d,J=7.89Hz,1H)7.75(d,J=7.70Hz,1H)7.88(br.s.,1H).
[0481]
13C NMR(151MHz,CHLOROFORM-d)δppm 11.53,18.84,21.93,28.89,29.63,29.75,30.40,30.54,30.72,31.55,32.84,34.62,35.50,36.74,36.94,37.76,40.35,43.62,44.28,108.93,111.30,119.09,119.28,120.23,121.55,121.58,121.67,127.10,127.84,136.49,139.92,142.17,142.83,147.48,184.30.
[0482]
根据上述方法,本发明还合成了下述化合物:
[0483]
[0484]
实施例19.化合物XS0395的制备
[0485]
[0486]
称取化合物YXY101(50mg,0.11mmol)于25ml反应瓶中,加入4ml丙酮搅拌溶解,再加入一滴浓盐酸作催化剂,室温条件下反应12h。反应停止,直接将反应液减压浓缩溶剂,用乙酸乙酯∶正己烷=4∶1体系经硅胶柱层析分离纯化,得白色固体,产率51%。
[0487]
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.62(s,3H),0.82-1.86(m,1H),1.04(s,3H),1.09(s,3H),1.15(s,3H),1.25-1.38(m,4H),1.39(s,3H),1.42-1.50(m,2H),1.55-1.71(m,4H),1.77(td,J=13.9,6.1Hz,1H),1.93-2.02(m,2H),2.03(s,3H),2.09(s,3H),2.27-2.36(m,2H),2.67(dd,J=16.2,2.7Hz,1H),3.71-3.78(m,1H),5.72(d,J=6.4Hz,1H),6.63(s,1H),7.91(s,1H),8.94(s,1H),12.06(br.s.,1H).
[0488]
13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δppm 11.64,18.43,22.63,29.01,29.90,30.36,30.47,30.62,30.77,31.44,31.87,32.88,32.92,34.94,35.60,36.79,36.85,36.98,37.74,39.87,43.74,44.36,51.72,109.06,120.00,122.04,126.53,140.46,141.62,143.85,149.91,179.96.208.01.
[0489]
实施例20.化合物XS0419的制备
[0490]
[0491]
将化合物YXY101(50mg,0.11mmol)搅拌溶解于2mL氘代甲醇溶剂中,随后加 入硼氢化钠(44mg,1.1mmol),室温搅拌反应30min。1mol/L HCl(1mL)猝灭反应,加入9mL纯水,用二氯甲烷萃取三次(每次5mL),收集有机层,无水硫酸钠干燥后,用减压蒸馏快速除去有机溶剂二氯甲烷,得到白色固体的化合物XS0419(50.1mg)。
[0492]
1H NMR(600MHz,DMSO-d 6)ppm 0.66(s,3H)0.85(d,J=13.9Hz,1H)1.05(s,3H)1.11(s,3H)1.17(s,3H)1.22(s,3H)1.29(ddd,J=13.7,4.4Hz,1H)1.36-1.41(m,1H)1.43-1.51(m,3H)1.53-1.59(m,1H)1.59-1.63(m,1H)1.63-1.69(m,1H)1.79(ddd,J=13.8,6.5Hz,1H)1.86(ddd,J=13.8,5.0Hz,1H)1.94-2.00(m,2H)2.01(s,3H)2.04(d,J=13.6Hz,1H)2.34(d,J=15.6Hz,1H)2.91(dd,J=20.0,1.5Hz,1H)3.18(dd,J=20.5,6.2Hz,1H)5.72(dd,J=6.1,1.8Hz,1H)6.61(s,1H)7.82(s,1H)8.80(s,1H)12.05(br.s.,1H).
[0493]
13C NMR(151MHz,DMSO-d 6)ppm 11.53,18.10,22.70,27.30,28.45,29.46,29.77,30.08,30.19,31.39,32.44,34.06,34.09,34.40,36.07,36.56,37.14,39.44,43.25,43.83,108.17,117.67,120.10,123.10,139.35,140.56,143.11,149.22,179.51.
[0494]
实施例21.化合物XS0462的制备
[0495]
[0496]
首先将雷公藤红素(135.2mg,0.3mmol)搅拌溶解于2mL DMF中,随后加入碳酸氢钠(138.6mg,1.65mmol),溴乙烷(234μL,0.15mmol)室温搅拌反应12小时。1mol/L HCl(1mL)淬灭反应,加入9mL纯水,用乙酸乙酯萃取3次(每次15mL),收集有机层,无水硫酸钠干燥后,用减压蒸馏法除去有机溶剂乙酸乙酯,得到橘红色固体混合粗品。以正己烷和乙酸乙酯(hexane/ethyl acetate=10∶1)为洗脱剂,300-400目硅胶填充柱层析分离,得到橘红色固体产物。
[0497]
1H NMR(600MHz,DMSO-d 6)δppm 0.47(s,3H),0.91(d,J=14.1Hz,1H),1.07(s, 3H),1.11(s,3H),1.12-1.15(m,3H),1.21(s,3H),1.31-1.36(m,1H),1.38(s,3H),1.41-1.46(m,1H),1.52-1.58(m,3H),1.61-1.71(m,4H),1.78-1.87(m,1H),1.90-1.99(m,1H),2.03-2.08(m,1H),2.09(s,3H),2.21(d,J=11.2Hz,1H),2.34(d,J=15.6Hz,1H),3.91(m,2H),6.35(d,J=7.2Hz,1H),6.39(s,1H),7.05-7.10(m,1H),8.73(s,1H).
[0498]
13C NMR(151MHz,DMSO-d 6)δppm 10.53,14.28,18.50,21.84,28.55,29.57,29.75,30.58,31.76,32.76,33.32,34.78,36.43,38.20,39.27,40.13,40.44,42.43,44.04,44.93,60.33,117.74,118.51,120.56,127.29,133.67,146.86,163.40,168.31,177.83,178.41.
[0499]
实施例22.化合物XS0474的制备
[0500]
[0501]
将化合物YXY101(50mg,0.11mmol)搅拌溶解于2mL氘代甲醇溶剂中,随后加入硼氘化钠(48.4mg,1.1mmol),室温搅拌反应30min。1mol/L HCl(1mL)猝灭反应,加入9mL纯水,用二氯甲烷萃取三次(每次5mL),收集有机层,无水硫酸钠干燥后,用减压蒸馏快速除去有机溶剂二氯甲烷,得到白色固体的化合物XS0474(50.2mg)。
[0502]
1H NMR(600MHz,DMSO-d 6)ppm 0.66(s,3H)0.85(d,J=12.84Hz,1H)1.04(s,3H)1.10(s,3H)1.17(s,3H)1.22(s,3H)1.29(td,J=13.66,4.40Hz,1H)1.35-1.41(m,1H)1.43-1.52(m,3H)1.53-1.58(m,1H)1.58-1.63(m,1H)1.63-1.69(m,1H)1.79(td,J=13.66,6.60Hz,1H)1.86(td,J=13.71,5.04Hz,1H)1.94-1.99(m,2H)2.01(s,3H)2.04(d,J=12.10Hz,1H)2.34(d,J=15.59Hz,1H)3.16(d,J=6.05Hz,1H)5.71(d,J=6.24Hz,1H)6.61(s,1H)7.82(s,1H)8.83(s,1H)12.03(br.s.,1H).
[0503]
13C NMR(151MHz,DMSO-d 6)ppm 11.60,18.15,22.74,26.98,28.52,29.51,29.83,30.14,30.25,31.45,32.50,34.15,34.21,34.46,36.14,36.62,37.21,39.49,43.31,43.89, 108.23,117.68,120.20,123.11,139.45,140.60,143.18,149.32,179.59.
[0504]
实施例23.化合物XS0503的制备
[0505]
[0506]
首先将扁蒴藤素(250mg,0.54mmol)溶解于20mL四氢呋喃中,随后加入LiAlH 4(1.2mL,1.1mmol),室温搅拌反应2h,加入10mL去离子水猝灭反应,1mol/L HCl(5mL)酸化,用乙酸乙酯萃取3次(每次15mL),收集有机层,无水硫酸钠干燥后,用减压蒸馏法除去有机溶剂乙酸乙酯,得到橙黄色固体混合粗品。以正己烷和乙酸乙酯(hexane/ethyl acetate=2∶1)为洗脱剂,300-400目硅胶填充柱层析分离,得到橙黄色固体产物。
[0507]
1H NMR(600MHz,DMSO-d 6)ppm 0.76(s,3H)0.83-0.87(m,1H)0.89(s,3H)1.11(s,3H)1.21(s,3H)1.23-1.25(m,1H)1.26(s,3H)1.27-1.34(m,2H)1.48(dd,J=6.7,3.9Hz,1H)1.50-1.54(m,1H)1.55-1.59(m,1H)1.60(d,J=5.0Hz,1H)1.64(dd,J=9.2,4.6Hz,2H)1.65-1.69(m,2H)1.69-1.72(m,1H)1.91(d,J=5.3Hz,1H)1.93-1.97(m,1H)2.02(s,3H)2.92(d,J=19.4Hz,1H)2.96(dd,J=10.3,4.8Hz,1H)3.15-3.20(m,1H)3.21(t,J=6.0Hz,1H)4.44(t,J=5.0Hz,1H)5.73(dd,J=6.1,1.7Hz,1H)6.61(s,1H)7.80(s,1H)8.78(s,1H).
[0508]
13C NMR(151MHz,CHLOROFORM-d)ppm 11.49,19.35,25.65,27.80,28.10,28.75,29.36,30.31,30.45,30.57,32.27,32.89,33.58,34.24,36.55,36.82,36.95,37.68,42.91,43.15,71.82,108.42,118.15,120.42,125.27,139.96,141.09,141.87,151.04.
[0509]
实施例24.化合物XS0508的制备
[0510]
[0511]
称取XS0077(50mg,0.11mmol)于50ml圆底瓶中,加入3ml甲醇溶解,置换气体,氮气保护,加入亚硫酸氢钠溶液(28mg NaHSO 3-1ml H 2O,0.26mmol),室温下氮气保护反应3h,停止反应,减压蒸馏浓缩溶剂,加入吡啶溶解残留固体,抽滤,减压浓缩得白色固体,产率90%。
[0512]
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.57(s,3H)1.07(s,3H)1.12-1.14(m,1H)1.14-1.16(m,1H)1.17(s,3H)1.21(s,3H)1.22-1.23(m,2H)1.24-1.28(m,4H)1.28-1.32(m,2H)1.38(s,3H)1.40-1.46(m,2H)1.47-1.52(m,2H)1.57(d,J=6.79Hz,1H)1.59-1.63(m,4H)1.64-1.72(m,6H)1.75-1.83(m,4H)1.92-1.96(m,1H)1.97-2.01(m,1H)2.03-2.07(m,1H)2.09(s,3H)2.18(d,J=10.82Hz,2H)2.73(d,J=15.04Hz,1H)3.40-3.49(m,1H)3.80-3.89(m,1H)6.36(d,J=7.34Hz,1H)6.40(d,J=0.92Hz,1H)7.07(dd,J=6.97,0.92Hz,1H)7.73(d,J=8.07Hz,1H)8.71(s,1H).
[0513]
13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δppm 10.08,18.32,21.83,24.68,24.75,25.13,25.29,25.63,25.67,28.38,28.59,29.91,30.13,31.02,31.08,31.39,31.82,31.91,31.93,32.36,33.10,36.02,36.13,37.67,38.99,42.16,42.81,44.45,44.49,50.05,54.77,117.23,117.93,120.04,126.75,133.25,146.43,153.97,163.09,168.74,175.44,177.83.
[0514]
实施例25.化合物XS0536的制备
[0515]
[0516]
称取XS0077(150mg,0.32mmol)于厚壁耐压管中,加入碳酸钾(220mg,1.6mmol),加入4ml丙酮室温下搅拌溶解样品,再加入100μL硫酸二甲酯溶液,转移至70℃油浴加热8h。加入1mol/L HCl淬灭,加水,乙酸乙酯萃取3次,无水硫酸钠干燥,旋转蒸发仪浓缩溶剂,用乙酸乙酯∶正己烷=1∶20体系经硅胶柱层析分离纯化得到纯品,白色固体,产率为21%。
[0517]
1H NMR(600MHz,CHLOROFORM-d)d ppm 0.61(s,3H)0.94(d,J=13.75Hz,1H)1.08(s,3H)1.17(s,3H)1.22(s,3H)1.34(s,3H)1.40(dd,J=14.12,4.22Hz,1H)1.44(dd,J=14.40,2.84Hz,1H)1.51-1.57(m,2H)1.57-1.63(m,1H)1.63-1.69(m,2H)1.73(d,J=11.37Hz,1H)1.85(td,J=13.71,6.33Hz,1H)2.01-2.07(m,1H)2.07-2.13(m,2H)2.17(s,3H)2.18-2.23(m,1H)2.44(d,J=15.59Hz,1H)3.02(d,J=19.99Hz,1H)3.28(dd,J=20.00,5.87Hz,1H)3.54(s,3H)3.77(s,3H)3.87(s,3H)5.77(d,J=4.58Hz,1H)6.78(s,1H).
[0518]
13C NMR(151MHz,CHLOROFORM-d)d ppm 11.77,18.28,22.73,27.85,28.85,29.87,30.29,30.50,30.85,31.55,32.88,34.16,34.51,34.79,36.83,37.15,37.52,40.45,43.69,44.33,51.47,55.88,60.30,106.30,117.63,125.49,127.80,144.62,144.80,149.13,150.89,179.05.
[0519]
实施例26.化合物XS0286的制备
[0520]
[0521]
在搅拌条件下,将化合物YXY101(50mg,0.11mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)。加入催化剂EDCI(85.4mg,0.55mmol)和HOBT(74.3mg,0.55mmol),搅拌使其溶解;加入对叔丁基苯胺(49.2mg,0.33mmol),并在室温下搅拌反应36小时。停止反应,向反应体系中加入去离子水(15mL),并用乙酸乙酯萃取3次。 合并乙酸乙酯层,然后用饱和NaCl洗3次,用无水Na 2SO 4干燥,用旋转蒸发仪浓缩得粗产物(暗红色油状物)。粗产物经快速柱层析法(乙酸乙酯∶正己烷)分离纯化,真空干燥得呈暗红色固体的化合物XS0286(10mg)。
[0522]
1H NMR(600MHz,CHLOROFORM-d)δppm 0.64(s,3H)1.08(d,J=13.20Hz,1H)1.15(s,3H)1.24-1.27(m,6H)1.40-1.42(m,4H)1.48-1.57(m,3H)1.63(m,5H)1.65-1.79(m,5H)1.85(d,J=11.92Hz,1H)1.91(d,J=6.24Hz,1H)1.98-2.06(m,3H)2.08(d,J=12.10Hz,2H)2.18(d,J=1.65Hz,3H)2.54(d,J=15.77Hz,1H)6.29(d,J=6.79Hz,1H)6.45(s,1H)6.92-7.00(m,2H)7.30-7.34(m,2H)7.34-7.37(m,2H)7.37-7.41(m,1H).
[0523]
13C NMR(151MHz,CHLOROFORM-d)δppm 10.21,18.49,21.75,28.58,29.63,29.69,30.41,30.83,31.33,33.24,33.73,34.35,34.98,36.32,38.06,39.38,41.10,42.96,44.47,45.11,76.81,77.02,77.23,116.99,117.95,119.53,119.81,125.89,127.38,133.95,135.11,146.01,147.26,164.68,170.02,175.83,178.38.
[0524]
实施例27.化合物XS0287的制备
[0525]
[0526]
在搅拌条件下,将化合物YXY101(50mg,0.11mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)。加入催化剂EDCI(85.4mg,0.55mmol)和HOBT(74.3mg,0.55mmol),搅拌使其溶解;加入对甲氧基苯胺(40.6mg,0.33mmol),并在室温下搅拌反应36小时。停止反应,向反应体系中加入去离子水(15mL),并用乙酸乙酯萃取3次。合并乙酸乙酯层,然后用饱和NaCl洗3次,用无水Na 2SO 4干燥,用旋转蒸发仪浓缩得粗产物(暗红色油状物)。粗产物经快速柱层析法(乙酸乙酯∶正己烷)分离纯化,真空干燥得呈暗红色固体的化合物XS-0287(20mg)。
[0527]
1H NMR(600MHz,CHLOROFORM-d)δppm 0.53(s,3H)1.05(d,J=13.94Hz,1H)1.13(s,3H)1.21(s,3H)1.24(s,3H)1.26(s,3H)1.35(s,3H)1.48-1.54(m,2H)1.58(d,J=7.34Hz,2H)1.64-1.72(m,2H)1.78-1.89(m,3H)2.03-2.11(m,2H)2.18(s,3H)2.55(d,J=15.77Hz,1H)3.79(s,3H)6.25(d,J=7.15Hz,1H)6.34(s,1H)6.91(m,J=8.99Hz,2H)6.96(d,J=7.15Hz,1H)7.40(m,J=8.80Hz,2H)7.48(s,1H).
[0528]
13C NMR(151MHz,CHLOROFORM-d)δppm 10.23,18.30,21.75,28.46,29.39,29.70,30.30,30.79,31.52,32.86,33.81,34.89,36.21,37.99,39.28,40.96,42.96,44.43,45.12,55.48,114.21,117.18,117.82,119.38,121.99,127.34,130.98,134.06,146.06,156.41,164.80,170.23,175.88,178.42.
[0529]
实施例28.化合物XS0394的制备
[0530]
[0531]
在搅拌条件下,将化合物YXY101(50mg,0.11mmol)和三乙胺(37μL)溶于重蒸四氢呋喃中(3.0mL,0.26mmol),然后冷却至低温下-30℃,10分钟后加入逐滴加入氯甲酸乙酯(22μL,0.23mmol)加入至反应液中。-30℃搅拌反应12小时后,停止反应,砂芯漏斗过滤除去不溶物,四氢呋喃洗涤,得黄色滤液。向黄色滤液中加入10mL纯水,用乙酸乙酯萃取3次(每次15mL),合并有机层,将有机层用饱和食盐水洗三次(每次30mL),有机相无水硫酸钠干燥后,用减压蒸馏法除去有机溶剂,得到橘黄色油状液体混合粗品。以正己烷和乙酸乙酯(hexane/ethyl acetate=10∶1)为洗脱剂,300-400目硅胶填充柱层析分离,得到黄色固体产物。
[0532]
1H NMR(600MHz,DMSO-d 6)ppm 1.05-1.07(m,1H)1.08(s,3H)1.09-1.12(m,1H)1.18(s,3H)1.23(s,3H)1.27(t,J=7.06Hz,3H)1.28-1.31(m,1H)1.41(s,3H)1.43-1.50(m,4H)1.53(dd,J=12.10,5.69Hz,1H)1.59(d,J=7.89Hz,1H)1.65(d,J=10.64Hz, 2H)1.70-1.78(m,2H)1.79-1.85(m,1H)1.90(td,J=13.98,3.39Hz,1H)1.95-2.01(m,1H)2.01-2.06(m,1H)2.15(s,3H)2.26(d,J=15.22Hz,1H)4.21(q,J=1.00Hz,2H)6.30(d,J=7.15Hz,1H)6.40(d,J=0.73Hz,1H)7.29(dd,J=7.52,0.73Hz,1H)12.07(br.s,1H).
[0533]
13C NMR(151MHz,CHLOROFORM-d)ppm 11.17,14.09,19.00,21.96,28.60,29.35,29.36,30.47,30.67,31.49,32.67,33.38,34.53,36.20,38.24,39.13,40.16,42.88,44.05,45.34,65.05,117.76,117.78,122.70,126.08,133.37,142.54,152.62,163.30,172.96,183.86.183.90.
[0534]
实施例29.化合物XS0418的制备
[0535]
[0536]
首先将化合物YXY101(50mg,0.11mmol)搅拌溶解于2mL四氢呋喃中,随后加入碳酸钾(15.2mg,0.11mmol),溴乙酸乙酯(18.37mg,0.11mmol)溶于1mL四氢呋喃中,然后逐滴加入反应液,室温搅拌反应4小时。1mol/L HCl(1mL)淬灭反应,加入9mL纯水,用乙酸乙酯萃取3次(每次15mL),收集有机层,无水硫酸钠干燥后,用减压蒸馏法除去有机溶剂乙酸乙酯,得到橘红色固体混合粗品。以正己烷和乙酸乙酯(hexane/ethyl acetate=10∶1)为洗脱剂,300-400目硅胶填充柱层析分离,得到橘红色固体产物。
[0537]
1H NMR(600MHz,CHLOROFORM-d)ppm 0.53(s,3H)0.99(d,J=14.31Hz,1H)1.11(s,3H)1.25(t,J=7.20Hz,3H)1.27(s,3H)1.28(s,3H)1.39-1.44(m,1H)1.45(s,3H)1.51(dd,J=14.95,4.13Hz,1H)1.54-1.58(m,1H)1.60(d,J=7.89Hz,1H)1.63-1.67(m,1H)1.67-1.71(m,1H)1.75(dd,J=15.96,8.07Hz,1H)1.80-1.82(m,1H)1.83-1.85(m,1H)1.85-1.92(m,1H)2.06(td,J=14.12,3.85Hz,1H)2.13-2.18(m,1H)2.21 (s,3H)2.25(d,J=14.31Hz,1H)2.48(d,J=15.96Hz,1H)4.19(q,J=7.15Hz,2H)4.41(d,J=15.77Hz,1H)4.54(d,J=15.96Hz,1H)6.35(d,J=7.15Hz,1H)6.53(d,J=1.10Hz,1H)7.02(dd,J=7.06,1.19Hz,1H)
[0538]
13C NMR(151MHz,CHLOROFORM-d)ppm 10.23,14.04,18.57,21.61,28.59,29.57,29.74,30.47,30.63,31.55,32.56,33.50,34.67,36.31,38.24,39.39,40.40,42.91,44.19,45.01,60.52,61.28,117.15,118.13,119.52,127.37,134.09,145.98,164.74,167.70,170.03,177.53,178.31
[0539]
实施例30.化合物XS0421,XS0457,XS0473和XS0493的制备
[0540]
[0541]
以XS0421合成为例:称取化合物YXY101(50mg,0.11mmol)于50ml密封管中,加入亚磷酸二甲酯(123mg,1.1mmol)、六水合氯化铝2.7mg(0.1eq),加入2mL DCM溶解,密封,室温条件下反应6h。反应停止时,加入饱和NaCl淬灭,乙酸乙酯萃取三次,合并有机相,无水Na 2SO 4干燥,将有机相减压浓缩溶剂,用乙酸乙酯∶正己烷=1∶2体系经硅胶柱层析分离纯化,得白色固体,产率55%。
[0542]
1H NMR(600MHz,DMSO-d 6)ppm 0.61(3H,s)0.86(1H,d,J=12.84Hz)1.06(3H,s)1.10(3H,s)1.19(3H,s)1.22-1.27(1H,m)1.27-1.32(1H,m)1.40(1H,d,J=4.95Hz)1.43(1H,d,J=5.32Hz)1.49(1H,d,J=8.07Hz)1.51-1.55(1H,m)1.57(3H,s)1.59-1.60(1H,m)1.60-1.64(1H,m)1.76-1.85(1H,m)1.93-1.97(1H,m)1.99(1H,d,J=2.20Hz)2.00-2.02(1H,m)2.02-2.06(1H,m)2.13(3H,s)2.32(1H,d,J=15.59Hz)3.49(3H,d,J=8.80Hz)3.51(3H,d,J=8.99Hz)4.19(1H,dd,J=23.66,6.24Hz)5.64(1H, dd,J=6.33,3.21Hz)6.66(1H,s)7.97(1H,s)9.04(1H,br.s.)12.04(1H,s).
[0543]
13C NMR(151MHz,DMSO-d 6)ppm 12.60,14.00(1C,s)18.04,21.58(1C,d,J=6.60Hz)22.11,28.78,29.48,30.02(1C,d,J=13.20Hz)30.18,31.00,31.45,32.42,33.49,33.57,34.57,36.42,37.43,37.89,38.79,43.88,52.31(1C,d,J=6.60Hz)52.81(1C,d,J=6.60Hz)109.32,114.64(1C,d,J=12.10Hz)117.90(1C,d,J=7.70Hz)121.35(1C,d,J=4.40Hz)140.50(1C,d,J=6.60Hz)141.05(1C,d,J=3.30Hz)144.08(1C,d,J=3.30Hz)150.62(1C,d,J=12.10Hz)179.51.
[0544]
根据上述制备方法,本发明还合成了以下化合物:
[0545]
[0546]
实施例31.化合物XS0439,XS0442,XS0444-XS0449,XS0478-XS0480,XS0487和XS0490的制备
[0547]
[0548]
制备方法以XS0439为例:在搅拌条件下,将化合物YXY101(100mg,0.22mmol)溶于二氯甲烷(4mL)。加入7-甲氧基取代吲哚(65.3mg,0.44mmol),再加入六水合三氯化铝(5.3mg,0.022mmol),并在室温下搅拌反应5小时。停止反应,向反应体系中加入去离子水(15mL),并用乙酸乙酯萃取3次。合并乙酸乙酯层,然后用饱和NaCl洗3次,用无水Na 2SO 4干燥,用旋转蒸发仪浓缩得粗产物(棕色油状物)。粗产物经快速柱层析法(乙酸乙酯∶正己烷=1∶4)分离纯化,真空干燥得呈紫红色固体的化合物。
[0549]
1H-NMR(DMSO-d 6)δppm 0.71(s,3H),0.86(d,J=9.9Hz,1H),0.96(s,3H),1.01(s,3H),1.10(s,3H),1.22-1.29(m,2H),1.32(s,3H),1.34-1.40(m,2H),1.45(d,J=8.1Hz,1H),1.50-1.61(m,3H),1.62-1.75(m,2H),1.79(s,3H),1.96-2.08(m,3H),2.34(d,J=15.4Hz,1H),3.88(s,3H),4.79(d,J=5.9Hz,1H),6.12(d,J=6.2Hz,1H),6.18(s,1H),6.62(d,J=7.7Hz,1H),6.73(s,1H),6.90(t,J=7.9Hz,1H),7.22(d,J=7.9Hz,1H),7.88(br.s.,1H),8.99(br.s.,1H),10.69(s,1H),12.04(br.s.,1H).
[0550]
13C-NMR(DMSO-d 6)δppm 11.9,18.5,22.3,29.1,29.9,30.4,30.5,30.6,31.8,32.9,34.9,35.4,35.5,35.6,36.8,36.9,37.8,43.5,44.3,55.4,101.8,108.8,112.2,119.2,119.8,121.1,121.6,122.6,126.3,126.7,128.5,140.8,141.4,144.0,146.6,147.0,180.0.
[0551]
实施例32.化合物XS0486,XS0491和XS0492的制备
[0552]
[0553]
以化合物XS0486为例:首先将化合物YXY101(50mg,0.11mmol)溶于二氧六环(600μL)中,加入三乙胺(150μL,0.33mmol),再加入二氧六环(100μL)洗涤反应瓶壁上残留,冷却至0℃,然后将亚磷酸二甲酯(110mg,1.1mmol)溶解于50μL四氯化碳中,在将溶解后的亚磷酸二甲酯慢慢滴入到溶有雷公藤红素的反应液中,0℃搅拌反应12h,加入10mL冰冷的去离子水,10mL饱和氯化铵溶液猝灭反应,用乙酸乙酯萃取3次(每次15mL),收集有机层,无水硫酸钠干燥后,用减压蒸馏法除去有机溶剂乙酸乙酯,得到红色固体混合粗品。以正己烷和乙酸乙酯(hexane/ethyl acetate=1∶1)为洗脱剂,300-400目硅胶填充柱层析快速分离,得到红色固体产物。
[0554]
1H NMR(600MHz,DMSO-d 6)δppm 0.60(s,3H)0.96(d,J=13.57Hz,1H)1.08(s,3H)1.23(s,3H)1.24(s,3H)1.38(s,3H)1.41-1.48(m,2H)1.55-1.60(m,3H)1.61-1.67(m,2H)1.69-1.74(m,1H)1.78(dd,J=16.14,7.89Hz,1H)1.81-1.88(m,1H)1.95(td, J=14.12,3.85Hz,1H)2.02(d,J=13.94Hz,1H)2.09(s,3H)2.21-2.24(m,1H)2.27(d,J=15.96Hz,1H)3.74(dd,J=11.55,5.14Hz,6H)6.36(d,J=7.15Hz,1H)6.39(d,J=1.28Hz,1H)7.08(dd,J=6.97,1.10Hz,1H)8.75(s,1H).
[0555]
13C NMR(151MHz,DMSO-d 6)δppm 10.07,18.53,21.43,28.03,29.09,29.24,29.71,30.07,31.21,31.46,32.76,33.92,35.85,37.71,38.78,41.23(d,J=5.50Hz,)41.97,43.37,44.45,55.15(dd,J=17.61,5.50Hz,2C)117.24,118.13,120.12,126.89,133.12,146.44,162.82,167.43,172.21(d,J=11.00Hz)177.98.
[0556]
实施例33.化合物XS0488的制备
[0557]
[0558]
首先将化合物XS0077(80mg,0.17mmol)溶于四氢呋喃(4mL)中,加入三乙胺(370μL,2.5mmol),再加入4-DMAP(24.7mg,0.22mmol),搅拌均匀,加入正丁酰氯(113μL,1.1mmol),室温搅拌反应30min,加入10mL饱和氯化铵溶液猝灭反应,用乙酸乙酯萃取3次(每次15mL),收集有机层,无水硫酸钠干燥后,用减压蒸馏法除去有机溶剂乙酸乙酯,得到红色固体混合粗品。以正己烷和乙酸乙酯(hexane/ethyl acetate=4∶1)为洗脱剂,300-400目硅胶填充柱层析快速分离,得到明黄色固体产物。
[0559]
1H NMR(600MHz,DMSO-d 6)ppm 0.46-0.51(m,3H)0.91(d,J=1.00Hz,1H)0.95-1.01(m,3H)1.08(s,3H)1.12(s,3H)1.23(s,3H)1.36(ddd,J=13.80,4.20Hz,1H)1.42(s,3H)1.44-1.48(m,1H)1.54-1.60(m,3H)1.63(s,2H)1.66-1.68(m,2H)1.70(d,J=9.17Hz,2H)1.83(dd,J=13.57,7.70Hz,1H)1.93-1.99(m,1H)2.06(d,J=13.94Hz,1H)2.10(s,3H)2.22(d,J=7.34Hz,1H)2.32(d,J=15.59Hz,1H)2.55(t,J=7.15Hz,2H)3.49(s,3H)6.38(s,1H)6.41(d,J=7.15Hz,1H)7.31(d,J=6.97Hz,1H).
[0560]
13C NMR(151MHz,DMSO-d 6)ppm 13.41,18.05,21.59,28.06,29.11,29.42,30.11, 30.16,30.32,31.32,32.21,32.31,33.06,34.36,34.91,36.00,37.90,38.77,39.83,42.22,43.64,44.85,51.48,117.99,122.13,125.21,133.52,136.69,142.26,162.81,170.65,171.21,176.21,177.91.
[0561]
实施例34.化合物XS0506的制备
[0562]
[0563]
称取化合物YXY101(50mg,0.11mmol)于50ml圆底瓶中,加入二环己基碳二亚胺(23mg,0.11mmol)、葡萄糖(24mg,0.11mmol),加入2ml DCM溶解,室温反应12h。加入大量水淬灭,乙酸乙酯萃取三次,合并有机相,无水Na 2SO 4干燥,将有机相减压浓缩溶剂,用乙酸乙酯∶正己烷=1∶4体系经硅胶柱层析分离纯化,得橙红色固体,产率42%。
[0564]
1H NMR(600MHz,DMSO-d 6)δppm 0.57(s,3H)1.07(s,3H)1.12-1.14(m,1H)1.14-1.16(m,1H)1.17(s,3H)1.21(s,3H)1.22-1.23(m,2H)1.24-1.28(m,4H)1.28-1.32(m,2H)1.38(s,3H)1.40-1.46(m,2H)1.47-1.52(m,2H)1.57(d,J=6.79Hz,1H)1.59-1.63(m,4H)1.64-1.72(m,6H)1.75-1.83(m,4H)1.92-1.96(m,1H)1.97-2.01(m,1H)2.03-2.07(m,1H)2.09(s,3H)2.18(d,J=10.82Hz,2H)2.73(d,J=15.04Hz,1H)3.40-3.49(m,1H)3.80-3.89(m,1H)6.36(d,J=7.34Hz,1H)6.40(d,J=0.92Hz,1H)7.07(dd,J=6.97,0.92Hz,1H)7.73(d,J=8.07Hz,1H)8.71(s,1H).
[0565]
13C NMR(151MHz,DMSO-d 6)δppm 10.08,18.32,21.83,24.68,24.75,25.13,25.29,25.63,25.67,28.38,28.59,29.91,30.13,31.02,31.08,31.39,31.82,31.91,31.93,32.36,33.10,36.02,36.13,37.67,38.99,42.16,42.81,44.45,44.49,50.05,54.77,117.23,117.93, 120.04,126.75,133.25,146.43,153.97,163.09,168.74,175.44,177.83.
[0566]
实施例35.化合物XS0507的制备
[0567]
[0568]
称取化合物YXY101(50mg,0.11mmol)于50ml圆底瓶中,加入2ml DCM溶解,转移至-78℃搅拌,加入DAST(150ul,10eq),-78℃反应1h。将反应液直接倒入大量冰中停止反应,加入DCM萃取水相三次,合并有机相,无水Na 2SO 4干燥,将有机相减压浓缩溶剂,用乙酸乙酯∶正己烷=1∶4体系经硅胶柱层析分离纯化,得橙红色固体,产率58%。
[0569]
1H NMR(600MHz,DMSO-d 6)δppm 0.56(s,3H)0.98(d,J=11.92Hz,1H)1.08(s,3H)1.22(s,3H)1.29(s,3H)1.38(s,3H)1.43-1.47(m,1H)1.48-1.52(m,1H)1.55-1.59(m,2H)1.60-1.64(m,1H)1.67(d,J=4.03Hz,1H)1.71(d,J=3.85Hz,1H)1.80(dd,J=16.41,8.16Hz,1H)1.83-1.87(m,1H)1.88-1.92(m,1H)1.96(d,J=17.61Hz,1H)1.95-1.95(m,1H)2.09(s,3H)2.20(d,J=1.83Hz,2H)6.35(d,J=7.34Hz,1H)6.38(d,J=1.28Hz,1H)7.06(dd,J=6.97,1.28Hz,1H)8.73(s,1H).
[0570]
13C NMR(151MHz,DMSO-d 6)δppm 10.07,18.85,21.41,27.89,29.26,29.33,29.46,29.94,31.16,32.71,33.79,35.78,37.87,38.74,40.04,40.22,41.89,43.26,44.33,117.21,118.14,120.15,126.99,132.88,146.41,162.78,167.39(d,J=418.15Hz,1C),166.71,177.97.
[0571]
实施例36.化合物XS0509的制备
[0572]
[0573]
称取化合物YXY101(50mg,0.11mmol)于25ml厚壁耐压管中,加入四丁基溴化铵(Tetrabutylammonium bromide,TBAB,17.5mg,0.05mmol),加入2ml二氯甲烷(dichloromethane,DCM)溶解,再逐滴加入5%NaOH(180μl),室温条件下反应30min,再转移至50℃油浴下,逐滴加入2,3,4,6-四乙酰氧基-α-D吡喃葡萄糖溴化物-二氯甲烷溶液(57mg-1ml,0.138mmol),50℃反应12h,停止反应,加入大量水和饱和食盐水,加入DCM萃取3次,合并有机相,无水Na 2SO 4干燥,将有机相减压浓缩,用乙酸乙酯∶正己烷=4∶1体系经硅胶层析柱进行纯化,得黄色固体,产率25%。
[0574]
1H NMR(600MHz,DMSO-d 6)δppm 0.51(s,3H)0.95(d,J=13.57Hz,1H)1.08(d,J=6.24Hz,6H)1.22(s,3H)1.23(br.s.,1H)1.38(s,3H)1.41(d,J=4.22Hz,1H)1.46(d,J=11.92Hz,1H)1.56(d,J=7.52Hz,2H)1.58(s,3H)1.60-1.63(m,1H)1.64(d,J=4.95Hz,2H)1.66-1.69(m,1H)1.81-1.87(m,1H)1.91(s,3H)1.94(d,J=3.67Hz,1H)1.97(s,3H)2.00-2.04(m,1H)2.08(s,3H)2.12(s,3H)2.19(d,J=8.80Hz,1H)2.31(d,J=15.59Hz,1H)3.85-3.90(m,1H)3.92-3.96(m,1H)4.30(dd,J=8.16,4.13Hz,1H)5.05(dd,J=10.09,8.44Hz,1H)5.23(d,J=3.48Hz,1H)5.29(dd,J=10.45,3.67Hz,1H)5.83(d,J=8.25Hz,1H)6.36(d,J=7.15Hz,1H)6.37(d,J=0.92Hz,1H)7.06(d,J=6.97Hz,1H)8.71(s,1H).
[0575]
13C NMR(151MHz,DMSO-d 6)δppm 10.06,18.63,19.97,20.31,20.42,21.57,28.11,28.59,29.22,29.97,30.07,31.31,32.62,32.84,34.57,35.93,37.76,38.52,40.05,40.24,41.97,43.46,44.54,61.76,67.35,67.85,69.78,71.21,91.64,117.29,118.08,120.11,126.93,133.07,146.36,162.86,167.78,169.24,169.41,169.57,169.97,176.51,177.93.
[0576]
实施例37.化合物XS0514,XS0515的制备
[0577]
[0578]
以合成XS0514为例:称取XS0419(50mg,0.11mmol)于50ml圆底瓶中,加入2ml DCM溶解,转移至-78℃搅拌,加入二乙胺基三氟化硫(Diethylaminosulfurtrifluoride,DAST,150ul,10eq),-78℃反应1h。将反应液直接倒入大量冰中停止反应,加入DCM萃取水相三次,合并有机相,用饱和NaHCO 3洗涤有机相,无水Na 2SO 4干燥有机相,将有机相减压浓缩,用乙酸乙酯∶正己烷=1∶8体系经硅胶柱层析进行分离纯化,得橙红色固体,产率58%。
[0579]
1H NMR(600MHz,DMSO-d 6)δppm 0.61(s,3H)0.95(d,J=14.49Hz,1H)1.06(s,3H)1.18(s,3H)1.23(s,3H)1.28(s,3H)1.41(d,J=14.86Hz,2H)1.47(dd,J=13.85,4.31Hz,2H)1.54(d,J=7.70Hz,1H)1.58-1.63(m,2H)1.74-1.84(m,2H)1.88(d,J=6.05Hz,1H)1.94(d,J=10.64Hz,1H)1.98(d,J=10.09Hz,1H)2.01(s,3H)2.07(d,J=17.97Hz,1H)2.24(d,J=15.96Hz,1H)2.89-2.94(m,1H)3.16-3.21(m,1H)5.74(d,J=4.77Hz,1H)6.61(s,1H)7.81(br.s.,1H)8.78(br.s.,1H).
[0580]
13C NMR(151MHz,DMSO-d 6)δppm 11.56,18.66,22.57,27.30,28.27,29.21,29.54,29.98,30.02,30.08,31.18,33.69,33.99,34.13,36.05,36.27,37.14,40.25,43.12,43.42,108.21,118.07,120.13,123.02,139.23,140.61,143.17,148.76,167.64(d,J=380.73Hz,1C).
[0581]
实施例38.化合物XS0516的制备
[0582]
[0583]
称取XS0077(50mg,0.11mmol)于25ml厚壁耐压管中,加入四丁基溴化铵(Tetrabutylammonium bromide,TBAB,17.5mg,0.05mmol),加入2ml二氯甲烷(dichloromethane,DCM)溶解,再逐滴加入5%NaOH(180μL),室温条件下反应30min,再转移至50℃油浴下,逐滴加入2,3,4,6-四乙酰氧基-α-D吡喃葡萄糖溴化物-二氯甲烷溶液(57mg-1ml,0.138mmol),50℃反应12h,停止反应,加入大量水和饱和食盐水,加入DCM萃取3次,合并有机相,无水Na 2SO 4干燥,将有机相减压浓缩,用乙酸乙酯∶正己烷=4∶1体系经硅胶层析柱进行纯化,得黄色固体,产率25%。
[0584]
1H NMR(600MHz,CHLOROFORM-d)δppm 0.53(s,3H)0.97(d,J=14.31Hz,1H)1.10(s,3H)1.18(s,3H)1.26(s,3H)1.38(td,J=14.03,4.58Hz,1H)1.47(s,3H)1.50(dd,J=15.59,4.58Hz,1H)1.53-1.56(m,1H)1.58(d,J=8.25Hz,1H)1.62-1.65(m,2H)1.66(d,J=5.32Hz,1H)1.67-1.72(m,2H)1.76-1.80(m,1H)1.82-1.87(m,1H)1.87-1.91(m,1H)1.98(s,3H)2.01(s,3H)2.10-2.14(m,1H)2.15(s,3H)2.18(s,3H)2.23(s,3H)2.42(d,J=15.77Hz,1H)3.55(s,3H)3.86(t,J=7.34Hz,1H)4.06(dd,J=11.10,7.61Hz,1H)4.16(dd,J=11.10,6.14Hz,1H)5.11(dd,J=10.36,3.58Hz,1H)5.31(d,J=7.89Hz,1H)5.38-5.43(m,2H)6.31(d,J=7.15Hz,1H)6.39(d,J=1.10Hz,1H)7.02(dd,J=7.06,1.01Hz,1H).
[0585]
13C NMR(151MHz,CHLOROFORM-d)δppm 11.54,18.33,20.61,20.70,21.02,21.86,28.57,29.57,29.85,30.52,30.82,31.55,32.65,33.67,34.70,36.34,38.20,39.24,40.37,42.30,44.27,45.07,51.54,60.81,66.90,69.09,70.49,70.84,100.37,117.93,123.33,126.92,134.32,134.96,145.71,162.50,170.07,170.33,170.35,170.37,170.61,178.68,179.14.
[0586]
实施例39.化合物XS0534的制备
[0587]
[0588]
称取XS0077(150mg,0.32mmol)溶于4mL丙酮中,搅拌溶解,加入无水碳酸钾(180mg,1.3mmol),搅拌加入硫酸二甲酯(95μL,0.96mmol),油浴70℃反应12h;用1mol/L的HCl猝灭反应,并调节PH=7,乙酸乙酯萃取三次,合并有机相,无水Na 2SO 4干燥,将有机相减压浓缩溶剂,用乙酸乙酯∶正己烷=1∶10体系经硅胶柱层析分离纯化,得白色固体,产率24.3%。
[0589]
1H NMR(600MHz,DMSO-d 6)δppm 0.51(s,3H)0.87-0.92(m,1H)1.06(s,3H)1.12(s,3H)1.18(s,3H)1.27(s,3H)1.32-1.37(m,1H)1.37-1.42(m,1H)1.47-1.52(m,3H)1.55-1.61(m,2H)1.65(dd,J=15.68,8.16Hz,1H)1.80(td,J=13.43,7.24Hz,1H)1.84-1.90(m,1H)1.97(td,J=13.75,4.03Hz,1H)2.02(s,3H)2.06(d,J=13.57Hz,1H)2.12-2.18(m,1H)2.33(d,J=15.77Hz,1H)2.95(dd,J=20.17,1.40Hz,1H)3.21(dd,J=20.72,6.24Hz,1H)3.46-3.50(m,3H)3.77(s,3H)5.72(dd,J=6.42,1.28Hz,1H)6.72(s,1H)8.10(s,1H).
[0590]
13C NMR(151MHz,DMSO-d 6)δppm 11.35,17.69,22.41,27.31,28.41,29.42,29.90,30.13,30.25,31.36,32.37,34.01,34.21,34.36,36.41,36.49,37.11,39.85,43.23,43.80,51.37,55.82,105.29,117.48,119.79,124.58,139.03,141.52,145.83,148.73,178.04.
[0591]
实施例40.化合物XS0455,XS0504的制备
[0592]
[0593]
以XS0455为例:首先将化合物YXY101(40mg,0.09mmol)搅拌溶解于1.2mL THF中,随后加入钐粉(70mg,0.36mmol),对甲基苯磺酸(67mg,0.36mmol),室温搅拌反应4小时。砂芯漏斗过滤催化剂钐粉以及不溶物,用乙酸乙酯洗涤3次(每次10mL),收集滤液,无水硫酸钠干燥后,用减压蒸馏法除去有机溶剂乙酸乙酯和四氢呋喃,得到黄褐色固体混合粗品。以正己烷和乙酸乙酯(hexane/ethyl acetate=2∶1)为洗脱剂,300-400目硅胶填充柱层析分离,得到黄褐色固体产物。
[0594]
1H NMR(600MHz,DMSO-d 6)δppm 0.82(1H,d,J=13.39Hz)0.89(3H,s)0.94(3H,br.s.)0.94(3H,br.s.)1.02(3H,s)1.13(3H,s)1.22(1H,d,J=15.96Hz)1.29-1.34(1H,m)1.36(1H,dd,J=13.39,3.12Hz)1.63-1.76(4H,m)1.92(1H,ddd,J=13.60,4.00Hz)1.96-2.00(1H,m)2.02(1H,d,J=6.97Hz)2.06(3H,s)2.12(2H,dd,J=13.66,7.06Hz)5.41(1H,d,J=5.87Hz)6.21(1H,d,J=9.90Hz)6.31(1H,d,J=9.90Hz)6.56(1H,s)8.03(1H,s)9.20(1H,s)12.03(1H,br.s).
[0595]
13C NMR(151MHz,DMSO-d 6)δppm 11.18,18.81,19.25,22.49,23.39,29.25,30.51,30.75,31.24,32.68,32.82,36.79,37.26,38.37,40.04,40.24,43.38,46.31,108.52,119.50,119.71,121.02,122.84,128.56,137.37,142.00,142.94,144.16,179.82.
[0596]
实施例41.化合物XS0420的制备
[0597]
[0598]
称取化合物YXY101(50mg,0.11mmol)于50ml圆底瓶中,加入PTSA(100mg,过量),加入甲苯2mL,室温搅拌6h。加入饱和NaHCO 3溶液淬灭,加入乙酸乙酯萃取3次,合并有机相,无水Na 2SO 4干燥,将有机相减压浓缩溶剂,用乙酸乙酯∶正己烷=1∶4体系经硅胶柱层析分离纯化,得灰白色固体,产率70%。
[0599]
1H NMR(600MHz,DMSO-d 6)δppm 1.03(s,3H)1.06(s,3H)1.07-1.11(m,1H)1.15(s,3H)1.18(s,3H)1.21-1.24(m,1H)1.28-1.32(m,1H)1.37(td,J=13.75,5.32Hz,1H)1.46(dd,J=8.62,4.03Hz,2H)1.48-1.50(m,2H)1.51-1.55(m,1H)1.58(dd,J=12.93,1.93Hz,1H)1.83-1.90(m,3H)2.33(t,J=1.00Hz,1H)2.36(s,3H)2.38(s,3H)2.80-2.92(m,2H)2.80-2.92(m,2H)7.06(d,J=8.62Hz,1H)7.18(s,1H)7.49(d,J=8.44Hz,1H)8.48(br.s.,1H)9.92(s,1H).
[0600]
13C NMR(151MHz,DMSO-d 6)δppm 10.96,19.45,21.73,21.95,23.51,24.03,25.45,30.89,30.96,34.59,35.08,36.41,37.98,38.30,40.71,41.70,43.50,99.01,102.91,115.74,120.73,126.07,127.17,127.30,129.03,132.36,143.60,146.12,175.68.
[0601]
实施例42.化合物XS0502的制备
[0602]
[0603]
称取化合物XS0077(50mg,0.11mmol)于50ml圆底瓶中,加入SeO 2(200mg,过量),加入二氧六环2mL,55℃搅拌12h。加入去离子水淬灭反应,加入乙酸乙酯萃取3次,合并有机相,无水Na 2SO 4干燥,将有机相减压浓缩溶剂,用乙酸乙酯∶正己烷=1∶10体系经硅胶柱层析分离纯化,得灰白色固体,产率16.8%。
[0604]
1H NMR(600MHz,DMSO-d 6)δppm 0.75(s,3H)0.93-0.97(m,1H)1.10(s,3H)1.21(s,3H)1.22(s,3H)1.40(td,J=14.08,4.13Hz,1H)1.49(dt,J=14.53,4.65Hz,1H)1.71-1.79(m,2H)1.79-1.82(m,1H)1.82-1.88(m,1H)2.07-2.10(m,1H)2.10-2.12(m,1H)2.13(s,3H)2.29(d,J=14.31Hz,1H)2.46(t,J=4.77Hz,1H)2.54(s,3H)3.50(s,3H)6.20(d,J=9.54Hz,1H)6.45(d,J=9.54Hz,1H)7.11(s,1H)9.44(s,1H).
[0605]
13C NMR(151MHz,DMSO-d 6)δppm 11.88,17.45,19.70,21.88,26.78,29.04,30.34,30.42,30.47,31.02,34.19,36.47,40.05,40.43,41.84,46.15,51.58,122.97,125.72,125.78,129.24,136.20,139.22,142.11,142.43,144.61,146.30,176.92,178.25,181.38.
[0606]
尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述,根据已经公开的所有教导,本领域技术人员可以对本发明技术方案的细节进行各种修改和替换,这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。

权利要求书

[权利要求 1]
如式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯的用途,其用作孤儿核受体Nur77的配体,或者用于制备用作孤儿核受体Nur77的配体的药物: 其中,X代表-NH-、-N(R)-、-O-、-CH 2-或卤素;其中,当X为卤素时,R 1不存在; 当Y和与之相连的碳原子之间为单键时,Y代表H、卤素、-OR、-SR或-NRR’;当Y和与之相连的碳原子之间为双键时,Y代表O、S或NR; R 1不存在,或代表H、-PO(OR) 2、C 1-6烷基、糖基、C 1-6烷氧羰基-C 1-6烷基、3-8元环烷基-氨酰基、芳基-C 1-6烷基或芳基,其中所述C 1-6烷基、糖基、C 1-6烷氧羰基-C 1-6烷基、3-8元环烷基-氨酰基、芳基-C 1-6烷基和芳基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:卤素、羟基、氨基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷氨基和C 1-6烷酰基;优选地,所述芳基为6-14元芳基,例如6-10元芳基;更优选地为苯基或萘基; R 2代表H、D、-PO(OR) 2、-CONH 2、-NH 2、-NHR、-NRR’、-NHCOR、-NRCOR、-NHCOOR、-NHCONHR、-NHCONRR’、-NRCONHR、-NRCONRR’、-OH、-OR、-OCONHR、-OCONRR’、-SH、-SR、-SOR、-SOOR、-SO 2NHR”、硝基、卤素、糖基、氰基、三氟甲基、C 1-6烷基、3-8元环烷基、3-8元杂环烷基、芳基、C 1-6烷基取代的芳基、6-15元杂芳基、链烯基、炔基、亚磺基、磺酸或磺酸盐;其中所述C 1-6烷基、3-8元环烷基、3-8元杂环烷基、芳基、C 1-6烷基取代的芳基、6-15元杂芳基、链烯基和炔基未被取 代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:氨基、卤素、羟基、氧基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6烷酰基、3-8元环烷基(例如环丙基)、氧代3-8元环烷基(例如氧代环丁基)、氰基、三氟甲基、C 1-6烷氧羰基、C 1-6烷基酰胺基、脲基、氨基甲酸酯基、羧基以及芳基; R 3和R 4各自独立地表示不存在,或代表H、C 1-6烷基、C 1-6烷酰基、C 1-6烷氧羰基、糖基、芳基-C 1-6烷基或芳基,其中所述C 1-6烷基、C 1-6烷酰基、C 1-6烷氧羰基、糖基、芳基-C 1-6烷基和芳基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:卤素、羟基、氨基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷氨基和C 1-6烷酰基;优选地,所述芳基为6-14元芳基,例如6-10元芳基;更优选地为苯基或萘基; R和R’各自独立地选自H、C 1-6烷基、3-8元环烷基、芳基-C 1-6烷基或芳基,其中所述C 1-6烷基、3-8元环烷基、芳基-C 1-6烷基和芳基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:卤素、羟基、氨基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和C 1-6烷氨基; R”代表C 1-6烷基或芳基(例如6-10元芳基,优选苯基); 式(I)中的虚实双键 代表单键或者双键;优选地,环A包含0、1、2或3个碳碳双键;环B包含0、1或2个碳碳双键。
[权利要求 2]
权利要求1的用途,其中,Y和与之相连的碳原子之间为双键,且Y代表O。
[权利要求 3]
权利要求1或2的用途,其中,所述化合物中的X代表-NH-、-N(R)-、-O-、-CH 2-或卤素;R代表C 1-6烷基或3-8元环烷基(优选环己基);其中,当X为卤素时,R 1不存在; 优选地,X代表-NH-、-N(R)-、-O-或卤素;R代表环己基。
[权利要求 4]
权利要求1-3任一项的用途,其中,所述化合物中的R 1不存在,或代表氢、C 1-4烷基、-PO(OR) 2、单糖基、C 1-4烷氧羰基-C 1-4烷基、3-6元环烷基-氨酰基、芳基-C 1-4烷基或芳基;其中,所述C 1-4烷基、单糖基、C 1-4烷氧羰基-C 1-4烷基、3-6元环烷基-氨酰基、芳基-C 1-4烷基和芳基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自 下述的取代基取代:卤素、羟基、氨基、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 1-4烷氨基和C 1-4烷酰基;优选地,所述芳基为6-14元芳基,例如6-10元芳基;更优选地为苯基或萘基; R代表C 1-4烷基; 优选地,R 1不存在,或代表氢、C 1-4烷基、-PO(OR) 2、葡萄糖基、C 1-2烷氧羰基-C 1-2烷基、环己基-氨酰基、苯基-C 1-2烷基、萘基-C 1-2烷基、苯基或萘基;其中,所述甲基、乙基、葡萄糖基、C 1-2烷氧羰基-C 1-2烷基、环己基-氨酰基、苯基-C 1-2烷基、萘基-C 1-2烷基、苯基或萘基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:C 1-2烷基、C 1-2烷氧基和C 1-2烷酰基; R代表C 1-4烷基; 优选地,R 1不存在,或代表氢、C 1-4烷基、-PO(OR) 2、苯基-C 1-2烷基、C 1-2烷氧羰基-C 1-2烷基、3-6元环烷基-氨酰基; R代表C 1-3烷基; 优选地,R 1不存在,或代表氢、甲基、乙基、-PO(OMe) 2、-PO(OEt) 2、-PO(O iPr) 2、2,3,4,6-四乙酰氧基-α-D-吡喃葡萄糖基、EtOCOCH 2-、环己基-氨酰基、苄基、甲氧基苯基或叔丁基苯基。
[权利要求 5]
权利要求1-4任一项的用途,其中,所述化合物中的R 2代表H、D、-OH、-PO(OR) 2、C 1-6烷基、9-15元稠杂芳基或磺酸盐;其中所述C 1-6烷基或6-15元杂芳基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:氨基、卤素、羟基、氧基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷酰基、氰基、三氟甲基和羧基; R代表H、C 1-6烷基或芳基; 优选地,R 2代表H、D、-PO(OR) 2、C 1-4烷基、9-15元苯并稠杂芳基或磺酸盐;其中,所述C 1-4烷基或9-15元苯并稠杂芳基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:氨基、卤素、羟基、氧基、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 1-4烷酰基、氰基、三氟甲基和羧基; R代表H、C 1-4烷基或苯基; 优选地,R 2代表H、D、-PO(OR) 2、C 1-4烷基、9-15元苯并稠杂芳基或磺酸盐;其中,所述C 1-4烷基和9-15元苯并稠杂芳基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4 个)选自下述的取代基取代:氨基、卤素、羟基、氧基、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 1-4烷酰基、氰基、三氟甲基和羧基; R代表H、C 1-4烷基或苯基; 优选地,R 2代表H、D、-PO(OR) 2、2-氧代苯基、吲哚基或磺酸钠;其中,所述吲哚基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:氨基、氟、氯、溴、羟基、甲基、甲氧基、甲酰基、氰基、三氟甲基和羧基; R代表H、甲基、乙基、异丙基或苯基。
[权利要求 6]
权利要求1-5任一项的用途,其中,所述化合物的7位和8位碳原子之间为碳碳双键。
[权利要求 7]
权利要求1-6任一项的用途,其中,所述化合物Y和与之相连的碳原子之间为碳碳双键。
[权利要求 8]
权利要求1-6任一项的用途,其中,所述化合物Y和与之相连的碳原子之间为碳碳单键。
[权利要求 9]
权利要求1-8任一项的用途,其中,所述化合物具有如下结构: 其中,R 3和R 4各自独立地代表H、C 1-6烷基或C 1-6烷酰基; 优选地,R 3和R 4各自独立地代表H、C 1-4烷基或C 1-4烷酰基; 优选地,R 3和R 4各自独立地代表H、甲基或丁酰基。
[权利要求 10]
权利要求1-8任一项的用途,其中,所述化合物具有如下结构: 其中,R 4代表H、C 1-6烷酰基、C 1-6烷氧羰基或被一个或多个(例如1、2、3或4个)C 1-6烷酰基取代的单糖基; 优选地,R 4代表H、C 1-4烷酰基、C 1-4烷氧羰基或被一个或多个(例如1、2、3或4个)C 1-4烷酰基取代的葡萄糖糖基; 优选地,R 4代表H或C 1-2烷氧羰基; 优选地,R 4代表H、丁酰基、乙氧羰基或2,3,4,6-四乙酰氧基-α-D-吡喃葡萄糖糖基。
[权利要求 11]
权利要求1的用途,其中,所述化合物选自下列化合物:
[权利要求 12]
权利要求1-11任一项的用途,其中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用作孤儿核受体Nur77的配体,用于抑制Nur77的转录活性; 优选地,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用于抑制Nur77在细胞中的转录活性; 优选地,所述细胞表达Nur77; 优选地,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[权利要求 13]
权利要求1-11任一项的用途,其中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用作孤儿核受体Nur77的配体,用于抑制TNFα在细胞中的生物学效应; 优选地,TNFα的生物学效应为κB抑制蛋白(IκB)激酶α/β(IKKα/β)的磷酸化,IκBα的降解,NF-κB亚基p65的入核转运,和/或NF-κB的激活; 优选地,所述细胞表达Nur77; 优选地,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[权利要求 14]
权利要求1-11任一项的用途,其中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用作孤儿核受体Nur77的配体,用于抑制细胞中mTOR通路(例如下调P-mTOR、p-P70S6K和/或p-S6活性); 优选地,所述细胞表达Nur77; 优选地,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[权利要求 15]
权利要求1-11任一项的用途,其中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用作孤儿核受体Nur77的配体,用于在有此 需要的受试者中预防或治疗与Nur77相关的疾病; 优选地,所述与Nur77相关的疾病为癌症(例如三阴乳腺癌)。
[权利要求 16]
一种抑制孤儿核受体Nur77的转录活性的方法,其包括,将Nur77与如式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯相接触的步骤: 其中,X代表-NH-、-N(R)-、-O-、-CH 2-或卤素;其中,当X为卤素时,R 1不存在; 当Y和与之相连的碳原子之间为单键时,Y代表H、卤素、-OR、-SR或-NRR’;当Y和与之相连的碳原子之间为双键时,Y代表O、S或NR; R 1不存在,或代表H、-PO(OR) 2、C 1-6烷基、糖基、C 1-6烷氧羰基-C 1-6烷基、3-8元环烷基-氨酰基、芳基-C 1-6烷基或芳基,其中所述C 1-6烷基、糖基、C 1-6烷氧羰基-C 1-6烷基、3-8元环烷基-氨酰基、芳基-C 1-6烷基和芳基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:卤素、羟基、氨基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷氨基和C 1-6烷酰基;优选地,所述芳基为6-14元芳基,例如6-10元芳基;更优选地为苯基或萘基; R 2代表H、D、-PO(OR) 2、-CONH 2、-NH 2、-NHR、-NRR’、-NHCOR、-NRCOR、-NHCOOR、-NHCONHR、-NHCONRR’、-NRCONHR、-NRCONRR’、-OH、-OR、-OCONHR、-OCONRR’、-SH、-SR、-SOR、-SOOR、-SO 2NHR”、硝基、卤素、糖基、氰基、三氟甲基、C 1-6烷基、3-8元环烷基、3-8元杂环烷基、芳基、C 1-6烷基取代的芳基、6-15元杂芳基、链烯基、炔基、亚磺基、磺酸或磺酸盐;其中所述C 1-6烷基、3-8元环烷基、3-8元杂环烷基、芳基、C 1-6烷基取代的芳基、6-15元杂芳基、链烯基和炔基未被取 代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:氨基、卤素、羟基、氧基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6烷酰基、3-8元环烷基(例如环丙基)、氧代3-8元环烷基(例如氧代环丁基)、氰基、三氟甲基、C 1-6烷氧羰基、C 1-6烷基酰胺基、脲基、氨基甲酸酯基、羧基以及芳基; R 3和R 4各自独立地表示不存在,或代表H、C 1-6烷基、C 1-6烷酰基、C 1-6烷氧羰基、糖基、芳基-C 1-6烷基或芳基,其中所述C 1-6烷基、C 1-6烷酰基、C 1-6烷氧羰基、糖基、芳基-C 1-6烷基和芳基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:卤素、羟基、氨基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷氨基和C 1-6烷酰基;优选地,所述芳基为6-14元芳基,例如6-10元芳基;更优选地为苯基或萘基; R和R’各自独立地选自H、C 1-6烷基、3-8元环烷基、芳基-C 1-6烷基或芳基,其中所述C 1-6烷基、3-8元环烷基、芳基-C 1-6烷基和芳基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:卤素、羟基、氨基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和C 1-6烷氨基; R”代表C 1-6烷基或芳基(例如6-10元芳基,优选苯基); 式(I)中的虚实双键 代表单键或者双键;优选地,环A包含0、1、2或3个碳碳双键;环B包含0、1或2个碳碳双键。
[权利要求 17]
权利要求16的方法,其中,式I所示的化合物如权利要求2-11任一项中所定义; 优选地,所述方法用于抑制Nur77在细胞中的转录活性; 优选地,所述方法包括,给有此需要的细胞施用有效量的所述化合物,从而抑制Nur77在细胞中的转录活性; 优选地,所述细胞表达Nur77; 优选地,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[权利要求 18]
一种抑制TNFα在细胞中的生物学效应的方法,其包括,给有此需要的细胞施用有效量的如式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐 或酯: 其中,X代表-NH-、-N(R)-、-O-、-CH 2-或卤素;其中,当X为卤素时,R 1不存在; 当Y和与之相连的碳原子之间为单键时,Y代表H、卤素、-OR、-SR或-NRR’;当Y和与之相连的碳原子之间为双键时,Y代表O、S或NR; R 1不存在,或代表H、-PO(OR) 2、C 1-6烷基、糖基、C 1-6烷氧羰基-C 1-6烷基、3-8元环烷基-氨酰基、芳基-C 1-6烷基或芳基,其中所述C 1-6烷基、糖基、C 1-6烷氧羰基-C 1-6烷基、3-8元环烷基-氨酰基、芳基-C 1-6烷基和芳基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:卤素、羟基、氨基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷氨基和C 1-6烷酰基;优选地,所述芳基为6-14元芳基,例如6-10元芳基;更优选地为苯基或萘基; R 2代表H、D、-PO(OR) 2、-CONH 2、-NH 2、-NHR、-NRR”、-NHCOR、-NRCOR、-NHCOOR、-NHCONHR、-NHCONRR’、-NRCONHR、-NRCONRR’、-OH、-OR、-OCONHR、-OCONRR’、-SH、-SR、-SOR、-SOOR、-SO 2NHR”、硝基、卤素、糖基、氰基、三氟甲基、C 1-6烷基、3-8元环烷基、3-8元杂环烷基、芳基、C 1-6烷基取代的芳基、6-15元杂芳基、链烯基、炔基、亚磺基、磺酸或磺酸盐;其中所述C 1-6烷基、3-8元环烷基、3-8元杂环烷基、芳基、C 1-6烷基取代的芳基、6-15元杂芳基、链烯基和炔基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:氨基、卤素、羟基、氧基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6烷酰基、3-8元环烷基(例如环丙基)、氧代3-8元环烷基(例如氧代环丁基)、氰基、三氟甲基、C 1-6烷氧羰基、C 1-6烷基酰胺基、脲基、氨基甲酸酯基、羧基以及芳基; R 3和R 4各自独立地表示不存在,或代表H、C 1-6烷基、C 1-6烷酰基、C 1-6烷氧羰基、糖基、芳基-C 1-6烷基或芳基,其中所述C 1-6烷基、C 1-6烷酰基、C 1-6烷氧羰基、糖基、芳基-C 1-6烷基和芳基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:卤素、羟基、氨基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷氨基和C 1-6烷酰基;优选地,所述芳基为6-14元芳基,例如6-10元芳基;更优选地为苯基或萘基; R和R’各自独立地选自H、C 1-6烷基、3-8元环烷基、芳基-C 1-6烷基或芳基,其中所述C 1-6烷基、3-8元环烷基、芳基-C 1-6烷基和芳基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:卤素、羟基、氨基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和C 1-6烷氨基; R”代表C 1-6烷基或芳基(例如6-10元芳基,优选苯基); 式(I)中的虚实双键 代表单键或者双键;优选地,环A包含0、1、2或3个碳碳双键;环B包含0、1或2个碳碳双键。
[权利要求 19]
权利要求18的方法,其中,式I所示的化合物如权利要求2-11任一项中所定义; 优选地,TNFα的生物学效应为κB抑制蛋白(IκB)激酶α/β(IKKα/β)的磷酸化,IκBα的降解,NF-κB亚基p65的入核转运,和/或NF-κB的激活; 优选地,所述方法用于抑制TNFα诱导的IκBα降解; 优选地,所述细胞表达Nur77; 优选地,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[权利要求 20]
一种抑制mTOR信号通路的方法,其包括,给有此需要的细胞施用有效量的如式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯: 其中,X代表-NH-、-N(R)-、-O-、-CH 2-或卤素;其中,当X为卤素时,R 1不存在; 当Y和与之相连的碳原子之间为单键时,Y代表H、卤素、-OR、-SR或-NRR’;当Y和与之相连的碳原子之间为双键时,Y代表O、S或NR; R 1不存在,或代表H、-PO(OR) 2、C 1-6烷基、糖基、C 1-6烷氧羰基-C 1-6烷基、3-8元环烷基-氨酰基、芳基-C 1-6烷基或芳基,其中所述C 1-6烷基、糖基、C 1-6烷氧羰基-C 1-6烷基、3-8元环烷基-氨酰基、芳基-C 1-6烷基和芳基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:卤素、羟基、氨基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷氨基和C 1-6烷酰基;优选地,所述芳基为6-14元芳基,例如6-10元芳基;更优选地为苯基或萘基; R 2代表H、D、-PO(OR) 2、-CONH 2、-NH 2、-NHR、-NRR’、-NHCOR、-NRCOR、-NHCOOR、-NHCONHR、-NHCONRR’、-NRCONHR、-NRCONRR’、-OH、-OR、-OCONHR、-OCONRR’、-SH、-SR、-SOR、-SOOR、-SO 2NHR”、硝基、卤素、糖基、氰基、三氟甲基、C 1-6烷基、3-8元环烷基、3-8元杂环烷基、芳基、C 1-6烷基取代的芳基、6-15元杂芳基、链烯基、炔基、亚磺基、磺酸或磺酸盐;其中所述C 1-6烷基、3-8元环烷基、3-8元杂环烷基、芳基、C 1-6烷基取代的芳基、6-15元杂芳基、链烯基和炔基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:氨基、卤素、羟基、氧基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6烷酰基、3-8元环烷基(例如环丙基)、氧代3-8元环烷基(例如氧代环丁基)、氰基、三氟甲基、C 1-6烷氧羰基、C 1-6烷基酰胺基、脲基、氨基甲酸酯基、羧基以及芳基; R 3和R 4各自独立地表示不存在,或代表H、C 1-6烷基、C 1-6烷酰基、C 1-6烷氧羰 基、糖基、芳基-C 1-6烷基或芳基,其中所述C 1-6烷基、C 1-6烷酰基、C 1-6烷氧羰基、糖基、芳基-C 1-6烷基和芳基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:卤素、羟基、氨基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷氨基和C 1-6烷酰基;优选地,所述芳基为6-14元芳基,例如6-10元芳基;更优选地为苯基或萘基; R和R’各自独立地选自H、C 1-6烷基、3-8元环烷基、芳基-C 1-6烷基或芳基,其中所述C 1-6烷基、3-8元环烷基、芳基-C 1-6烷基和芳基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:卤素、羟基、氨基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和C 1-6烷氨基; R”代表C 1-6烷基或芳基(例如6-10元芳基,优选苯基); 式(I)中的虚实双键 代表单键或者双键;优选地,环A包含0、1、2或3个碳碳双键;环B包含0、1或2个碳碳双键。
[权利要求 21]
权利要求20的方法,其中,式I所示的化合物如权利要求2-11任一项中所定义; 优选地,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用于下调细胞中P-mTOR、p-P70S6K和/或p-S6的活性; 优选地,所述细胞表达Nur77; 优选地,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[权利要求 22]
一种预防或治疗与Nur77相关的疾病的方法,其包括,给有此需要的受试者施用有效量的如式I所示的化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯: 其中,X代表-NH-、-N(R)-、-O-、-CH 2-或卤素;其中,当X为卤素时,R 1不存在; 当Y和与之相连的碳原子之间为单键时,Y代表H、卤素、-OR、-SR或-NRR’;当Y和与之相连的碳原子之间为双键时,Y代表O、S或NR; R 1不存在,或代表H、-PO(OR) 2、C 1-6烷基、糖基、C 1-6烷氧羰基-C 1-6烷基、3-8元环烷基-氨酰基、芳基-C 1-6烷基或芳基,其中所述C 1-6烷基、糖基、C 1-6烷氧羰基-C 1-6烷基、3-8元环烷基-氨酰基、芳基-C 1-6烷基和芳基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:卤素、羟基、氨基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷氨基和C 1-6烷酰基;优选地,所述芳基为6-14元芳基,例如6-10元芳基;更优选地为苯基或萘基; R 2代表H、D、-PO(OR) 2、-CONH 2、-NH 2、-NHR、-NRR’、-NHCOR、-NRCOR、-NHCOOR、-NHCONHR、-NHCONRR’、-NRCONHR、-NRCONRR’、-OH、-OR、-OCONHR、-OCONRR’、-SH、-SR、-SOR、-SOOR、-SO 2NHR”、硝基、卤素、糖基、氰基、三氟甲基、C 1-6烷基、3-8元环烷基、3-8元杂环烷基、芳基、C 1-6烷基取代的芳基、6-15元杂芳基、链烯基、炔基、亚磺基、磺酸或磺酸盐;其中所述C 1-6烷基、3-8元环烷基、3-8元杂环烷基、芳基、C 1-6烷基取代的芳基、6-15元杂芳基、链烯基和炔基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:氨基、卤素、羟基、氧基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6烷酰基、3-8元环烷基(例如环丙基)、氧代3-8元环烷基(例如氧代环丁基)、氰基、三氟甲基、C 1-6烷氧羰基、C 1-6烷基酰胺基、脲基、氨基甲酸酯基、羧基以及芳基; R 3和R 4各自独立地表示不存在,或代表H、C 1-6烷基、C 1-6烷酰基、C 1-6烷氧羰 基、糖基、芳基-C 1-6烷基或芳基,其中所述C 1-6烷基、C 1-6烷酰基、C 1-6烷氧羰基、糖基、芳基-C 1-6烷基和芳基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:卤素、羟基、氨基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷氨基和C 1-6烷酰基;优选地,所述芳基为6-14元芳基,例如6-10元芳基;更优选地为苯基或萘基; R和R’各自独立地选自H、C 1-6烷基、3-8元环烷基、芳基-C 1-6烷基或芳基,其中所述C 1-6烷基、3-8元环烷基、芳基-C 1-6烷基和芳基未被取代或被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下述的取代基取代:卤素、羟基、氨基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和C 1-6烷氨基; R”代表C 1-6烷基或芳基(例如6-10元芳基,优选苯基); 式(I)中的虚实双键 代表单键或者双键;优选地,环A包含0、1、2或3个碳碳双键;环B包含0、1或2个碳碳双键。
[权利要求 23]
权利要求22的方法,其中,式I所示的化合物如权利要求2-11任一项中所定义; 优选地,所述与Nur77相关的疾病为癌症(例如三阴乳腺癌)。
[权利要求 24]
如式IV所示的化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯的用途,其用作孤儿核受体Nur77的配体,或者用于制备用作孤儿核受体Nur77的配体的药物: 其中,X代表NH、O或CH 2; Y代表O、S或NR; R 5和R 6各自独立地代表代表H或C 1-6烷基; 当R 7和与之相连的碳原子之间为单键时,R 7代表OH,当R 7和与之相连的碳原子之间为双键时,R 7代表O; R 8代表H或C 1-6烷基; 式(IV)中的虚实双键 代表单键或者双键。
[权利要求 25]
权利要求24的用途,其中所述化合物选自下列化合物:
[权利要求 26]
权利要求24或25的用途,其中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用作孤儿核受体Nur77的配体,用于抑制Nur77的转录活性; 优选地,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用于抑制Nur77在细胞中的转录活性; 优选地,所述细胞表达Nur77; 优选地,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[权利要求 27]
权利要求24或25的用途,其中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用作孤儿核受体Nur77的配体,用于抑制TNFα在细胞中的生物学效应; 优选地,TNFα的生物学效应为κB抑制蛋白(IκB)激酶α/β(IKKα/β)的磷酸化,IκBα的降解,NF-κB亚基p65的入核转运,和/或NF-κB的激活; 优选地,所述细胞表达Nur77; 优选地,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[权利要求 28]
权利要求24或25的用途,其中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用作孤儿核受体Nur77的配体,用于抑制细胞中mTOR通路(例如下调P-mTOR、p-P70S6K和/或p-S6活性); 优选地,所述细胞表达Nur77; 优选地,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[权利要求 29]
权利要求25或26的用途,其中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用作孤儿核受体Nur77的配体,用于在有此需要的受试者中预防或治疗与Nur77相关的疾病; 优选地,所述与Nur77相关的疾病为癌症(例如三阴乳腺癌)。
[权利要求 30]
一种抑制孤儿核受体Nur77的转录活性的方法,其包括,将Nur77与如式IV所示的化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯相接触的步骤: 其中,X代表NH、O或CH 2; Y代表O、S或NR; R 5和R 6各自独立地代表代表H或C 1-6烷基; 当R 7和与之相连的碳原子之间为单键时,R 7代表OH,当R 7和与之相连的碳原子之间为双键时,R 7代表O; R 8代表H或C 1-6烷基; 式(IV)中的虚实双键 代表单键或者双键。
[权利要求 31]
权利要求30的方法,其中,式IV所示的化合物如权利要求25中所定义; 优选地,所述方法用于抑制Nur77在细胞中的转录活性; 优选地,所述方法包括,给有此需要的细胞施用有效量的所述化合物,从而抑制Nur77在细胞中的转录活性; 优选地,所述细胞表达Nur77; 优选地,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[权利要求 32]
一种抑制TNFα在细胞中的生物学效应的方法,其包括,给有此需要的细胞施用有效量的如式IV所示的化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯: 其中,X代表NH、O或CH 2; Y代表O、S或NR; R 5和R 6各自独立地代表代表H或C 1-6烷基; 当R 7和与之相连的碳原子之间为单键时,R 7代表OH,当R 7和与之相连的碳原子之间为双键时,R 7代表O; R 8代表H或C 1-6烷基; 式(IV)中的虚实双键 代表单键或者双键。
[权利要求 33]
权利要求32的方法,其中,式I所示的化合物如权利要求26中所定义; 优选地,TNFα的生物学效应为κB抑制蛋白(IκB)激酶α/β(IKKα/β)的磷酸化,IκBα的降解,NF-κB亚基p65的入核转运,和/或NF-κB的激活; 优选地,所述方法用于抑制TNFα诱导的IκBα降解; 优选地,所述细胞表达Nur77; 优选地,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[权利要求 34]
一种抑制mTOR通路的方法,其包括,给有此需要的细胞施用有效量的如式IV所示的化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯: 其中,X代表NH、O或CH 2; Y代表O、S或NR; R 5和R 6各自独立地代表代表H或C 1-6烷基; 当R 7和与之相连的碳原子之间为单键时,R 7代表OH,当R 7和与之相连的碳原子之间为双键时,R 7代表O; R 8代表H或C 1-6烷基; 式(IV)中的虚实双键 代表单键或者双键。
[权利要求 35]
权利要求34的方法,其中,式I所示的化合物如权利要求25中所定义; 优选地,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用于下调P-mTOR、p-P70S6K和/或p-S6活性; 优选地,所述细胞表达Nur77; 优选地,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[权利要求 36]
一种预防或治疗与Nur77相关的疾病的方法,其包括,给有此需要的受试者施用有效量的如式IV所示的化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯: 其中,X代表NH、O或CH 2; Y代表O、S或NR; R 5和R 6各自独立地代表代表H或C 1-6烷基; 当R 7和与之相连的碳原子之间为单键时,R 7代表OH,当R 7和与之相连的碳原子之间为双键时,R 7代表O; R 8代表H或C 1-6烷基; 式(IV)中的虚实双键 代表单键或者双键。
[权利要求 37]
权利要求36的方法,其中,式IV所示的化合物如权利要求25中所定义; 优选地,所述与Nur77相关的疾病为癌症(例如三阴乳腺癌)。
[权利要求 38]
下列化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯的用途,其用作孤儿核受体Nur77的配体,或者用于制备用作孤儿核受体Nur77的配体的药物:
[权利要求 39]
权利要求38的用途,其中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用作孤儿核受体Nur77的配体,用于抑制Nur77的转录活性; 优选地,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用于抑制Nur77在细胞中的转录活性; 优选地,所述细胞表达Nur77; 优选地,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[权利要求 40]
权利要求38的用途,其中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用作孤儿核受体Nur77的配体,用于抑制TNFα在细胞中的生物学效应; 优选地,TNFα的生物学效应为κB抑制蛋白(IκB)激酶α/β(IKKα/β)的磷酸化,IκBα的降解,NF-κB亚基p65的入核转运,和/或NF-κB的激活; 优选地,所述细胞表达Nur77; 优选地,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[权利要求 41]
权利要求38的用途,其中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用作孤儿核受体Nur77的配体,用于抑制细胞中mTOR通路(例如下调P-mTOR、p-P70S6和/或p-S6活性); 优选地,所述细胞表达Nur77; 优选地,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[权利要求 42]
权利要求38的用途,其中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用作孤儿核受体Nur77的配体,用于在有此需要的受试者中预防或治疗与Nur77相关的疾病; 优选地,所述与Nur77相关的疾病为癌症(例如三阴乳腺癌)。
[权利要求 43]
一种抑制孤儿核受体Nur77的转录活性的方法,其包括,将Nur77与下列化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯相接触的步骤:
[权利要求 44]
权利要求43的方法,其中,所述方法用于抑制Nur77在细胞中的转录活性; 优选地,所述方法包括,给有此需要的细胞施用有效量的所述化合物,从而抑制Nur77在细胞中的转录活性; 优选地,所述细胞表达Nur77; 优选地,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[权利要求 45]
一种抑制TNFα在细胞中的生物学效应的方法,其包括,给有此需要的细胞施用有效量的下列所示的化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯:
[权利要求 46]
权利要求45的方法,其中,TNFα的生物学效应为κB抑制蛋白(IκB)激酶α/β(IKKα/β)的磷酸化,IκBα的降解,NF-κB亚基p65的入核转运,和/或NF-κB的激活; 优选地,所述方法用于抑制TNFα诱导的IκBα降解; 优选地,所述细胞表达Nur77; 优选地,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[权利要求 47]
一种抑制mTOR通路的方法,其包括,给有此需要的细胞施用有效量的下列所示的化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯:
[权利要求 48]
权利要求47的方法,其中,所述化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯或者所述药物用于下调P-mTOR、p-P70S6K和/或p-S6活性; 优选地,所述细胞表达Nur77; 优选地,所述细胞为三阴乳腺癌细胞及其他癌细胞(例如肝癌细胞,宫颈癌细胞,肺癌细胞、三阳乳腺癌细胞、结直肠癌细胞或前列腺癌细胞)。
[权利要求 49]
一种预防或治疗与Nur77相关的疾病的方法,其包括,给有此需要的受试者施用有效量的如下所示的化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯:
[权利要求 50]
权利要求49的方法,其中所述与Nur77相关的疾病为癌症(例如三阴乳腺癌)。
[权利要求 51]
如下所示化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯: 其中, R 9和R 10各自独立地选自氢、C 1-6烷基和芳基; 优选地,R 9和R 10各自独立地选自氢、C 1-4烷基、苯基和萘基; 优选地,R 9和R 10各自独立地选自甲基、乙基和异丙基。
[权利要求 52]
下列化合物、其互变异构体、立体异构体或药学上可接受的盐或酯:
[权利要求 53]
一种具有抗癌活性的药物的筛选方法,其包括以下步骤: (1)提供表达孤儿核受体Nur77的癌细胞(例如三阴乳腺癌细胞),设立阴性对照(即不表达Nur77); (2)将所述细胞用TNFα和候选试剂处理; (3)检测(例如通过免疫印迹法进行检测)处理后的细胞中P-mTOR、p-P70S6K和p-S6的水平; (4)比较所述细胞与阴性对照细胞中相应蛋白的水平,如有至少一种蛋白水平降低即判断所述候选试剂具有抗癌活性。

附图

[ 图 0001]   [根据细则26改正 18.09.2017] 
[ 图 0002]   [根据细则26改正 18.09.2017] 
[ 图 0003]   [根据细则26改正 18.09.2017] 
[ 图 0004]   [根据细则26改正 18.09.2017] 
[ 图 0005]   [根据细则26改正 18.09.2017] 
[ 图 0006]   [根据细则26改正 18.09.2017] 
[ 图 0007]   [根据细则26改正 18.09.2017] 
[ 图 0008]   [根据细则26改正 18.09.2017] 
[ 图 0009]   [根据细则26改正 18.09.2017] 
[ 图 0010]   [根据细则26改正 18.09.2017] 
[ 图 0011]   [根据细则26改正 18.09.2017] 
[ 图 0012]   [根据细则26改正 18.09.2017] 
[ 图 0013]   [根据细则26改正 18.09.2017] 
[ 图 0014]   [根据细则26改正 18.09.2017] 
[ 图 0015]   [根据细则26改正 18.09.2017] 
[ 图 0016]   [根据细则26改正 18.09.2017] 
[ 图 0017]   [根据细则26改正 18.09.2017]