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Pub. No.:    WO/2017/199991    International Application No.:    PCT/JP2017/018472
Publication Date: 23.11.2017 International Filing Date: 17.05.2017
C12N 15/09 (2006.01), C12P 19/34 (2006.01)
Applicants: JAPAN SCIENCE AND TECHNOLOGY AGENCY [JP/JP]; 4-1-8, Honcho, Kawaguchi-shi, Saitama 3320012 (JP)
Inventors: SU'ETSUGU, Masayuki; (JP).
TSUJIMOTO, Hiroko; (JP).
SHINOHARA, Takeshi; (JP)
Agent: ONO, Shinjiro; (JP).
YAMAMOTO, Osamu; (JP).
MIYAMAE, Toru; (JP).
NAKANISHI, Motoharu; (JP).
HIROSE, Shinobu; (JP)
Priority Data:
2016-099157 17.05.2016 JP
(JA) 環状DNAの増幅方法
Abstract: front page image
(EN)Provided is a method for amplifying cyclic DNA, particularly long-chain cyclic DNA, simply and exponentially in a cell-free system. More specifically, a cyclic DNA amplification method is provided, which comprises allowing to react a reaction mixture produced by mixing cyclic DNA having an origin sequence of chromosomal replication (an origin of chromosome (oriC)) with a reaction solution, wherein the reaction solution contains enzymes (1) to (3) as mentioned below, a buffer solution, NTP, dNTP, a magnesium ion source and an alkali metal ion source: (1) a first group enzyme which can catalyze the replication of cyclic DNA; (2) a second group enzyme which can catalyze an Okazaki fragment connection reaction to synthesize two sister cyclic DNA molecules capable of forming a catenane; and (3) a third group enzyme which can catalyze a reaction of separating two sister cyclic DNA molecules from each other.
(FR)L'invention concerne un procédé d'amplification d'ADN cyclique, en particulier d'ADN cyclique à chaîne longue, de manière simple et exponentielle dans un système acellulaire. Plus spécifiquement, l'invention porte sur un procédé d'amplification d'ADN cyclique, qui consiste à permettre la réaction d'un mélange réactionnel produit par mélange d'ADN cyclique ayant une séquence d'origine de réplication chromosomique (une origine du chromosome (oriC)) avec une solution de réaction, la solution de réaction contenant des enzymes (1) à (3) comme mentionné ci-dessous, une solution tampon, NTP, dNTP, une source d'ions magnésium et une source d'ions de métal alcalin : (1) une enzyme du premier groupe qui peut catalyser la réplication de l'ADN cyclique ; (2) une enzyme du second groupe qui peut catalyser une réaction de liaison de fragments d'Okazaki pour synthétiser deux molécules d'ADN cyclique sœurs capables de former une caténane ; et (3) une enzyme du troisième groupe qui peut catalyser une réaction de séparation entre deux molécules d'ADN cyclique sœurs.
(JA)無細胞系において、環状DNA、特に長鎖環状DNAを簡便かつ指数的に増幅することのできる方法を提供する。 具体的には、複製開始配列(origin of chromosome(oriC))を有する環状DNAを、以下の酵素群: (1)環状DNAの複製を触媒する第一の酵素群; (2)岡崎フラグメント連結反応を触媒して、カテナンを形成する2つの姉妹環状DNAを合成する第二の酵素群;および (3)2つの姉妹環状DNAの分離反応を触媒する第三の酵素群 ならびに、緩衝液、NTP、dNTP、マグネシウムイオン源、およびアルカリ金属イオン源を含む反応液と混合して生成した反応混合物を反応させることを含む、環状DNAの増幅方法を提供する。
Designated States: AE, AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BH, BN, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CL, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DJ, DK, DM, DO, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, GT, HN, HR, HU, ID, IL, IN, IR, IS, JP, KE, KG, KH, KN, KP, KR, KW, KZ, LA, LC, LK, LR, LS, LU, LY, MA, MD, ME, MG, MK, MN, MW, MX, MY, MZ, NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PA, PE, PG, PH, PL, PT, QA, RO, RS, RU, RW, SA, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, ST, SV, SY, TH, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, ZA, ZM, ZW.
African Regional Intellectual Property Organization (BW, GH, GM, KE, LR, LS, MW, MZ, NA, RW, SD, SL, ST, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
Eurasian Patent Organization (AM, AZ, BY, KG, KZ, RU, TJ, TM)
European Patent Office (AL, AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HR, HU, IE, IS, IT, LT, LU, LV, MC, MK, MT, NL, NO, PL, PT, RO, RS, SE, SI, SK, SM, TR)
African Intellectual Property Organization (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, KM, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Publication Language: Japanese (JA)
Filing Language: Japanese (JA)