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Pub. No.:    WO/2017/189844    International Application No.:    PCT/US2017/029831
Publication Date: 02.11.2017 International Filing Date: 27.04.2017
C07H 21/04 (2006.01), C12N 15/11 (2006.01), C12N 15/113 (2010.01), C12N 15/79 (2006.01), C12Q 1/68 (2006.01), C40B 40/08 (2006.01), G01N 33/48 (2006.01), G01N 33/50 (2006.01)
Applicants: BIO-RAD LABORATORIES, INC. [US/US]; 1000 Alfred Nobel Drive Hercules, California 94547 (US)
Inventors: FU, Rongdian; (US)
Agent: ROBERGE, Christopher; (US).
HINSCH, Matthew E.; (US).
FLANAGAN, Lisa Dornbach; (US).
LOCKYER, Jean M.; (US).
BOYD, David W.; (US)
Priority Data:
62/328,504 27.04.2016 US
Abstract: front page image
(EN)Methods, polynucleotides, kits, and reaction mixtures are disclosed for the enriching of short polynucleotide molecules that have a length within a desired target length range. A Type IIS or Type III restriction enzyme is used to cleave polynucleotides at cleavage sites located at a distance from the restriction enzyme recognition sites. For example, a mixture of polynucleotides can be formed by inserting DNA molecules between a recognition site for the restriction enzyme and a region of non-naturally-occurring nucleotides that block cleavage by the restriction enzymes. If a polynucleotide contains a DNA molecule with a length within a target range, then the cleavage site will be within the blocking region, and cleavage will not occur. Polynucleotides containing DNA molecules with lengths outside the target range can be cleaved. By selectively enriching, through PCR or other means, polynucleotides that are intact, a concentrated population of polynucleotides of a target length can be formed.
(FR)L'invention concerne des procédés, des polynucléotides, des kits et des mélanges réactionnels pour l'enrichissement de molécules de polynucléotide courtes qui ont une longueur dans une plage de longueur cible désirée. Une enzyme de restriction de type IIS ou de type III est utilisée pour cliver des polynucléotides au niveau de sites de clivage situés à une distance des sites de reconnaissance d'enzyme de restriction. Par exemple, un mélange de polynucléotides peut être formé en insérant des molécules d'ADN entre un site de reconnaissance de l'enzyme de restriction et une région de nucléotides non naturels qui bloquent le clivage par les enzymes de restriction. Si un polynucléotide contient une molécule d'ADN ayant une longueur dans une plage cible, alors le site de clivage se trouvera dans la région de blocage, et le clivage ne se produira pas. Des polynucléotides contenant des molécules d'ADN ayant des longueurs à l'extérieur de la plage cible peuvent être clivés. Par enrichissement sélectif, par PCR ou d'autres moyens, de polynucléotides qui sont intacts, une population concentrée de polynucléotides d'une longueur cible peut être formée.
Designated States: AE, AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BH, BN, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CL, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DJ, DK, DM, DO, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, GT, HN, HR, HU, ID, IL, IN, IR, IS, JP, KE, KG, KH, KN, KP, KR, KW, KZ, LA, LC, LK, LR, LS, LU, LY, MA, MD, ME, MG, MK, MN, MW, MX, MY, MZ, NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PA, PE, PG, PH, PL, PT, QA, RO, RS, RU, RW, SA, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, ST, SV, SY, TH, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, ZA, ZM, ZW.
African Regional Intellectual Property Organization (BW, GH, GM, KE, LR, LS, MW, MZ, NA, RW, SD, SL, ST, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
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African Intellectual Property Organization (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, KM, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Publication Language: English (EN)
Filing Language: English (EN)