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1. (WO2017147946) HIGH-THROUGHPUT SEQUENCING METHOD FOR METHYLATED CPG ISLAND IN TRACE DNA
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Pub. No.: WO/2017/147946 International Application No.: PCT/CN2016/075864
Publication Date: 08.09.2017 International Filing Date: 08.03.2016
IPC:
C12Q 1/68 (2006.01)
[IPC code unknown for C12Q 1/68]
Applicants:
上海易毕恩基因科技有限公司 SHANGHAI EPICAN GENETECH CO. LTD. [CN/CN]; 中国上海市 自由贸易试验区爱迪生路328号201-2室 Room 201-2 328 Aidisheng Road, China (Shanghai) Pilot Free Trade Zone Shanghai 201210, CN
Inventors:
陆星宇 LU, Xingyu; CN
宋艳群 SONG, Yanqun; CN
Agent:
上海精晟知识产权代理有限公司 SHANGHAI CPTO INTELLECTUAL PROPERTY AGENCY CO., LTD; 中国上海市 杨浦区控江路1555号A座2518室 Room 2518 Building A No.1555 Kong Jiang Road, Yangpu District Shanghai 200092, CN
Priority Data:
201610119392.202.03.2016CN
Title (EN) HIGH-THROUGHPUT SEQUENCING METHOD FOR METHYLATED CPG ISLAND IN TRACE DNA
(FR) PROCÉDÉ DE SÉQUENÇAGE À HAUT DÉBIT POUR UN ÎLOT DE CPG MÉTHYLÉ DANS UN ADN À L'ÉTAT DE TRACE
(ZH) 微量DNA中甲基化CpG岛高通量测序方法
Abstract:
(EN) Disclosed is a high-throughput sequencing method for a methylated CpG island in trace DNA, comprising the steps of: 1) treating a DNA sample with sulphite; 2) adding the treated sample obtained in step 1) to a PCR system containing a primer A for linear amplification; 3) adding an exonuclease having single-stranded DNA cleaving activity to the PCR product in step 2) and inactivating the exonuclease after the reaction; 4) adding the product in step 3) to a PCR system containing a primer B for linear amplification; 5) adding the product in step 4) to a PCR system containing the corresponding linker primer C and linker primer D for amplification; and 6) purifying the PCR product in step 5) to obtain a DNA library with a specific length and carrying out the sequencing.
(FR) L'invention concerne un procédé de séquençage à haut débit pour un îlot de CpG méthylé dans un ADN à l'état de trace, comprenant les étapes suivantes : 1) le traitement d'un échantillon d'ADN par du sulfite; 2) l'ajout de l'échantillon traité obtenu à l'étape 1) à un système de PCR contenant une amorce A pour une amplification linéaire; 3) l'ajout d'une exonucléase présentant une activité de clivage d'ADN monocaténaire au produit de PCR de l'étape 2) et l'inactivation de l'exonucléase après la réaction; 4) l'ajout du produit de l'étape 3) à un système de PCR contenant une amorce B pour une amplification linéaire; 5) l'ajout du produit de l'étape 4) à un système de PCR contenant l'amorce de liaison C et l'amorce de liaison D correspondantes pour une amplification; et 6) la purification du produit de PCR de l'étape 5) pour obtenir une banque d'ADN ayant une longueur spécifique et effectuer le séquençage.
(ZH) 一种微量DNA中甲基化CpG岛高通量测序方法,包括步骤:1)将DNA样品进行亚硫酸盐处理;2)将步骤1)中获取的处理样品加入到含有引物A的PCR体系中进行线性扩增;3)向步骤2)中的PCR产物中加入具有单链DNA剪切活性的核酸外切酶,反应后使核酸外切酶失活;4)将步骤3)中的产物加入到含有引物B的PCR体系中进行线性扩增;5)将步骤4)中的产物加入含有相应接头引物C和接头引物D的PCR体系中进行扩增;6)将步骤5)中的PCR产物进行纯化获得具有特异长度的DNA文库,并进行测序。
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Publication Language: Chinese (ZH)
Filing Language: Chinese (ZH)