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1. (WO2017066943) METHOD AND KIT FOR DNA FRAGMENT ASSEMBLING IN VITRO
Latest bibliographic data on file with the International Bureau   

Pub. No.:    WO/2017/066943    International Application No.:    PCT/CN2015/092438
Publication Date: 27.04.2017 International Filing Date: 21.10.2015
IPC:
C12N 15/64 (2006.01), C12N 15/10 (2006.01), C12N 15/66 (2006.01), C12P 19/34 (2006.01)
Applicants: BGI SHENZHEN [CN/CN]; Main Building, Beishan Industrial Zone, Yantian District Shenzhen, Guangdong 518083 (CN)
Inventors: CHEN, Tai; (CN).
ZHAO, Hongcui; (CN).
FAN, Chuyao; (CN).
CHEN, Shihong; (CN).
WANG, Yun; (CN).
SHEN, Yue; (CN).
XU, Xun; (CN)
Agent: DHC IP ATTORNEYS; Suite 2201, Modern International Commercial Building,Cross of Fuhua Road and Jintian Road, Futian District Shenzhen, Guangdong 518048 (CN)
Priority Data:
Title (EN) METHOD AND KIT FOR DNA FRAGMENT ASSEMBLING IN VITRO
(FR) PROCÉDÉ ET KIT POUR L'ASSEMBLAGE IN VITRO DE FRAGMENTS D'ADN
(ZH) 一种DNA片段体外组装方法和试剂盒
Abstract: front page image
(EN)Disclosed in the present invention are a method and a kit for DNA fragment assembling in vitro, being able to assemble a plurality of DNA fragments with an assembling vector in a set fragment order. The upstream of the first fragment and the downstream of the last fragment respectively carry an overlapping sequence being same as the assembling vector. With respect to the other fragments, the upstream of each fragment carries an overlapping sequence being same as the downstream of the previous fragment, and the downstream of each fragment carries an overlapping sequence being same as the upstream of the next fragment. The inner side of the overlapping sequence of the assembling vector optionally carries restriction enzyme cutting sites respectively, and optionally carries selectable markers between the restriction enzyme cutting sites. The method of the present invention enables a plurality of DNA fragments and the assembling vector to react with DNA endonuclease, DNA exonuclease, DNA polymerase and DNA ligase, so as to accomplish the assembly.
(FR)La présente invention concerne un procédé et un kit pour l'assemblage in vitro de fragments d'ADN, à même d'assembler une pluralité de fragments d'ADN avec un vecteur d'assemblage dans un ordre déterminé des fragments. L'amont du premier fragment et l'aval du dernier fragment portent respectivement une séquence chevauchante qui est identique au vecteur d'assemblage. En ce qui concerne les autres fragments, l'amont de chaque fragment porte une séquence chevauchante identique à l'aval du fragment précédent et l'aval de chaque fragment porte une séquence chevauchante identique à l'amont du fragment suivant. Le côté intérieur de la séquence chevauchante du vecteur d'assemblage porte respectivement, éventuellement, des sites de coupe par une enzyme de restriction et porte éventuellement des marqueurs sélectionnables entre les sites de coupe par une enzyme de restriction. Le procédé de la présente invention permet la réaction d'une pluralité de fragments d'ADN et du vecteur d'assemblage avec une ADN-endonucléase, une ADN-exonucléase, une ADN-polymérase et une ADN-ligase de manière à réaliser l'assemblage.
(ZH)一种DNA片段体外组装方法和试剂盒,能够将多个DNA片段和组装载体按照设定的顺序组装起来,其中第一个片段上游和最后一个片段下游分别带有与组装载体相同的重叠序列,其它片段上游带有与上一个片段下游相同的重叠序列,下游带有与下一个片段上游相同的重叠序列;组装载体的重叠序列的内侧任选地分别带有酶切位点,任选地在酶切位点之间带有筛选标记;该方法使多个DNA片段和组装载体与DNA内切酶、DNA外切酶、DNA聚合酶和DNA连接酶进行反应,实现组装。
Designated States: AE, AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BH, BN, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CL, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DK, DM, DO, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, GT, HN, HR, HU, ID, IL, IN, IR, IS, JP, KE, KG, KN, KP, KR, KZ, LA, LC, LK, LR, LS, LU, LY, MA, MD, ME, MG, MK, MN, MW, MX, MY, MZ, NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PA, PE, PG, PH, PL, PT, QA, RO, RS, RU, RW, SA, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, ST, SV, SY, TH, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, ZA, ZM, ZW.
African Regional Intellectual Property Organization (BW, GH, GM, KE, LR, LS, MW, MZ, NA, RW, SD, SL, ST, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
Eurasian Patent Organization (AM, AZ, BY, KG, KZ, RU, TJ, TM)
European Patent Office (AL, AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HR, HU, IE, IS, IT, LT, LU, LV, MC, MK, MT, NL, NO, PL, PT, RO, RS, SE, SI, SK, SM, TR)
African Intellectual Property Organization (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, KM, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Publication Language: Chinese (ZH)
Filing Language: Chinese (ZH)