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1. (WO2016082135) METHOD FOR PORCINE H11 SITE-SPECIFIC INSERTION BY USING SITE-SPECIFIC CLEAVAGE SYSTEM
Latest bibliographic data on file with the International Bureau   

Pub. No.:    WO/2016/082135    International Application No.:    PCT/CN2014/092321
Publication Date: 02.06.2016 International Filing Date: 27.11.2014
IPC:
C12N 15/11 (2006.01), C40B 50/06 (2006.01), C12N 15/63 (2006.01)
Applicants: INSTITUTE OF ANIMAL SCIENCES, CHINESE ACADEMY OF AGRICULTURAL SCIENCES [CN/CN]; No. 2 Yuanmingyuan West Road, Haidian Beijing 100193 (CN)
Inventors: LI, Kui; (CN).
RUAN, Jinxue; (CN).
YANG, Shulin; (CN).
MU, Yulian; (CN).
LI, Hegang; (CN).
WU, Tianwen; (CN).
WEI, Jingliang; (CN).
XU, Kui; (CN).
HUANG, Lei; (CN).
ZHOU, Rong; (CN).
LIU, Nan; (CN)
Agent: BEIJING JINGDA LAW FIRM; Room 410,ZhongGuanCun Building No.27 ZhongGuanCun Road, Haidian Beijing 100080 (CN)
Priority Data:
Title (EN) METHOD FOR PORCINE H11 SITE-SPECIFIC INSERTION BY USING SITE-SPECIFIC CLEAVAGE SYSTEM
(FR) PROCÉDÉ D'INSERTION SPÉCIFIQUE DU SITE H11 PORCIN FAISANT APPEL À UN SYSTÈME DE CLIVAGE SPÉCIFIQUE DE SITE
(ZH) 一种利用定点切割系统对猪H11位点定点插入的方法
Abstract: front page image
(EN)A method for porcine H11 site-specific insertion by using a site-specific cleavage system comprises the following steps: 1) determining in a porcine target genome sequence a target sequence targeted by a targeted cleavage system; 2) constructing a targeting sequence of the corresponding cleavage system according to target site design; 3) constructing a targeting vector; and 4) performing cell transfection and then PCR amplification to identify the efficiency of site-specific insertion. The method relies on the porcine H11 site-specific cleavage system to realize site-specific insertion of target genes into target sites, in order to solve the problems of low efficiency in traditional targeting techniques, inconvenience in designing PCR detection primers and high detection difficulty. The site-specific insertion method allows exogenous genes to be stably expressed at the H11 site, thereby setting up a high-efficiency platform for creating transgenic pigs.
(FR)L'invention concerne un procédé d'insertion spécifique du site H11 porcin faisant appel à un système de clivage spécifique de site comprenant les étapes suivantes : 1) détermination dans une séquence de génome cible porcin d'une séquence cible ciblée par un système de clivage ciblé ; 2) construction d'une séquence de ciblage du système de clivage correspondant selon la conception du site cible ; 3) construction d'un vecteur de ciblage ; et 4) mise en œuvre d'une transfection cellulaire, puis d'une amplification par PCR pour identifier l'efficacité de l'insertion spécifique de site. Le procédé repose sur le système de clivage spécifique du site H11 porcin pour réaliser l'insertion spécifique de site de gènes cibles dans des sites cibles, afin de résoudre les problèmes de faible rendement des techniques de ciblage classiques, les inconvénients liés à la conception d'amorces de détection de PCR et l'importante difficulté de détection. Le procédé d'insertion spécifique de site selon l'invention permet l'expression stable de gènes exogènes sur le site H11, offrant ainsi une plate-forme à haut rendement pour la création de porcs transgéniques.
(ZH)一种利用定点切割系统对猪H11位点定点插入的方法,包括以下步骤:1)在猪目标基因组序列中确定靶向切割系统所靶向的靶序列;2)根据靶位点设计、构建相应的切割系统的打靶序列;3)构建打靶载体;4)转染细胞,PCR扩增鉴定定点插入效率。该方法依托猪H11位点定点切割系统,将目的基因定点插入到靶位点,以解决传统打靶技术效率低下,PCR检测引物不便设计,检测难度大的问题。该定点插入方法能让外源基因在H11位点处稳定表达,为转基因猪制作搭建了高效的平台。
Designated States: AE, AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BH, BN, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CL, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DK, DM, DO, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, GT, HN, HR, HU, ID, IL, IN, IR, IS, JP, KE, KG, KN, KP, KR, KZ, LA, LC, LK, LR, LS, LU, LY, MA, MD, ME, MG, MK, MN, MW, MX, MY, MZ, NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PA, PE, PG, PH, PL, PT, QA, RO, RS, RU, RW, SA, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, ST, SV, SY, TH, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, ZA, ZM, ZW.
African Regional Intellectual Property Organization (BW, GH, GM, KE, LR, LS, MW, MZ, NA, RW, SD, SL, ST, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
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African Intellectual Property Organization (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, KM, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Publication Language: Chinese (ZH)
Filing Language: Chinese (ZH)