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1. (WO2016082129) METHOD AND REAGENT FOR CONSTRUCTING NUCLEIC ACID DOUBLE-LINKER SINGLE-STRAND CYCLIC LIBRARY
Latest bibliographic data on file with the International Bureau   

Pub. No.:    WO/2016/082129    International Application No.:    PCT/CN2014/092296
Publication Date: 02.06.2016 International Filing Date: 26.11.2014
IPC:
C40B 50/06 (2006.01), C40B 50/18 (2006.01), C12N 15/11 (2006.01), C12N 15/10 (2006.01), C12Q 1/68 (2006.01)
Applicants: BGI SHENZHEN [CN/CN]; Main Building, Beishan Industrial Zone Yantian District Shenzhen, Guangdong 518083 (CN).
BGI SHENZHEN CO., LIMITED [CN/CN]; Main Building 11F-3, Beishan Industrial Zone, Beishan Road 146 Yantian District Shenzhen, Guangdong 518033 (CN)
Inventors: JIANG, Yuan; (CN).
LI, Qiaoling; (CN).
ALEXEEV, Andrei; (US).
HUROWITZ, Evan; (US).
ZHAO, Xia; (CN).
WANG, Tong; (CN).
DONG, Chao; (CN).
LI, Dong; (CN).
DRMANAC, Radoje; (US).
ZHANG, Wenwei; (CN).
JIANG, Hui; (CN)
Agent: DHC IP ATTORNEYS; Suite 2201, Modern International Commercial Building,Cross of Fuhua Road and Jintian Road Futian District Shenzhen, Guangdong 518048 (CN)
Priority Data:
Title (EN) METHOD AND REAGENT FOR CONSTRUCTING NUCLEIC ACID DOUBLE-LINKER SINGLE-STRAND CYCLIC LIBRARY
(FR) PROCÉDÉ ET RÉACTIF POUR LA CONSTRUCTION D'UNE BANQUE CYCLIQUE D'ACIDE NUCLÉIQUE SIMPLE BRIN À DOUBLE SÉQUENCE DE LIAISON
(ZH) 一种核酸的双接头单链环状文库的构建方法和试剂
Abstract: front page image
(EN)A method and reagent for constructing a nucleic acid double-linker single-strand cyclic library. The method comprises: breaking a nucleic acid into nucleic acid fragments; connecting a first linker sequence; producing by amplification a first product provided with the first linker sequence at either end, where a U nucleobase site is provided on primer sequences and a nicking enzyme recognition sequence is either provided or not provided on same, and a first affinity tag is provided on one of the primer sequences; using USER enzyme to cleave the first product; cyclizing the cleaved first product; treating the cyclization product with either a phosphatase or a nicking enzyme; using a solid-phase vector for combination with a cyclized molecule; performing a restrictive gap translation reaction; removing by digestion any portion that did not undergo the restrictive gap translation reaction; connecting a second linker sequence; producing by amplification a second product provided with the second linker sequence at either end; denaturing the second product, and cyclizing a single-strand nucleic acid molecule. The method allows an increase in the length of library insert fragments, a simplified library construction process, reduced library construction time, and reduced library construction costs.
(FR)L'invention concerne un procédé et un réactif pour construire une banque cyclique d'acide nucléique simple brin à double séquence de liaison. Ledit procédé comprend les étapes suivantes : décomposer un acide nucléique en fragments d'acide nucléique; relier une première séquence de liaison; produire par amplification un premier produit comportant la première séquence de liaison à chaque extrémité, un site de nucléobase U se situant sur des séquences d'amorce et une séquence de reconnaissance d'enzymes de coupure étant prévue ou non sur lesdites séquences et une première étiquette d'affinité est placée sur une des séquences d'amorce; utiliser l'enzyme USER pour cliver le premier produit; cycliser le premier produit clivé; traiter le produit de cyclisation, soit avec une phosphatase soit avec une enzyme de coupure; utiliser un vecteur en phase solide à combiner avec une molécule cyclisée; effectuer une réaction de translation de brèche restrictive; éliminer par digestion toute partie n'ayant pas été soumise à la réaction de translation de brèche restrictive; relier une deuxième séquence de liaison; produire par amplification un second produit comportant la seconde séquence de liaison à chaque extrémité; dénaturer le second produit et cycliser une molécule d'acide nucléique simple brin. Ledit procédé permet d'augmenter la longueur de fragments d'insertion dans la banque, d'obtenir un procédé de construction simplifiée de banques, une réduction du temps de construction de banques ainsi qu'une diminution des coûts de construction de banques.
(ZH)一种核酸的双接头单链环状文库的构建方法和试剂,该方法包括:将核酸打断成核酸片段;连接第一接头序列;扩增得到两端具有第一接头序列的第一产物,其中引物序列上具有U碱基位点且具有或不具有切口酶识别序列,并且其中一条引物序列上具有第一亲和标记;使用USER酶酶切第一产物;环化酶切后的第一产物;去磷酸化酶或切口酶处理环化产物;使用固相载体与环化分子结合;进行限制性缺口平移反应;消化除去未发生限制性缺口平移反应的部分;连接第二接头序列;扩增得到两端具有第二接头序列的第二产物;变性第二产物,并对单链核酸分子进行环化。该方法能够提高文库插入片段长度,简化建库流程,缩短建库时间,降低建库成本。
Designated States: AE, AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BH, BN, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CL, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DK, DM, DO, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, GT, HN, HR, HU, ID, IL, IN, IR, IS, JP, KE, KG, KN, KP, KR, KZ, LA, LC, LK, LR, LS, LU, LY, MA, MD, ME, MG, MK, MN, MW, MX, MY, MZ, NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PA, PE, PG, PH, PL, PT, QA, RO, RS, RU, RW, SA, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, ST, SV, SY, TH, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, ZA, ZM, ZW.
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African Intellectual Property Organization (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, KM, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Publication Language: Chinese (ZH)
Filing Language: Chinese (ZH)