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1. WO2014101276 - METHOD, KIT AND PRIMERS FOR DETERMINING WHETHER TWO PREDETERMINED SITES IN NUCLEIC ACID SAMPLE HAVE KNOWN MUTATIONS

Publication Number WO/2014/101276
Publication Date 03.07.2014
International Application No. PCT/CN2013/001453
International Filing Date 27.11.2013
IPC
C12Q 1/68 2006.1
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
1Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
68involving nucleic acids
C12N 15/11 2006.1
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
15Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
09Recombinant DNA-technology
11DNA or RNA fragments; Modified forms thereof
CPC
C12Q 1/6883
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS
1Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms
68involving nucleic acids
6876Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
6883for diseases caused by alterations of genetic material
C12Q 2600/156
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS
2600Oligonucleotides characterized by their use
156Polymorphic or mutational markers
Applicants
  • 厦门人瑞生物医药科技有限公司 XIAMEN MEMORIGEN CO., LTD [CN]/[CN]
Inventors
  • 许华曦 XU, Huaxi
  • 卜国军 BU, Guojun
  • 张含 ZHANG, Han
  • 张云武 ZHANG, Yunwu
  • 刘家珍 LIU, Jiazhen
Agents
  • 厦门市诚得知识产权代理事务所(普通合伙) XIAMEN CHENGDE INTELLECTUAL PROPERTY LAW FIRM (GENERAL PARTNERSHIP)
Priority Data
201210592416.831.12.2012CN
Publication Language Chinese (zh)
Filing Language Chinese (ZH)
Designated States
Title
(EN) METHOD, KIT AND PRIMERS FOR DETERMINING WHETHER TWO PREDETERMINED SITES IN NUCLEIC ACID SAMPLE HAVE KNOWN MUTATIONS
(FR) PROCÉDÉ, TROUSSE ET AMORCES POUR LA DÉTERMINATION DE SAVOIR SI DEUX SITES PRÉDÉTERMINÉS DANS UN ÉCHANTILLON D'ACIDE NUCLÉIQUE ONT DES MUTATIONS CONNUES
(ZH) 确定核酸样本的两个预定位点是否具有已知突变的方法、试剂盒以及引物
Abstract
(EN) Disclosed in the present invention are a method, a kit and primers for determining whether two predetermined sites in a nucleic acid sample have known mutations. The method comprises the following steps: PCR amplifying the nucleic acid sample by using a first primer and a second primer; adding a nucleic acid probe to the PCR amplification system, wherein the nucleic acid probe corresponds to at least part of the corresponding nucleic acid sequence between the two predetermined sites; and detecting light emitted by the reaction system in order to determine whether the predetermined sites in the nucleic acid sample have the known mutations, wherein bases corresponding to one known mutation at one of the two predetermined sites are contained near the 3' end of the first primer, bases corresponding to the other known mutation are contained near the 3' end of the second primer, and the nucleic acid probe comprises a luminescent group formed at the 5' end thereof and a regulation group formed at the 3' end thereof with the ability to regulate light emitted by the luminescent group. By using the method, it can be determined effectively whether two predetermined sites in a nucleic acid sample have known mutations.
(FR) La présente invention concerne un procédé, une trousse et des amorces pour la détermination de savoir si deux sites prédéterminés dans un échantillon d'acide nucléique ont des mutations connues. Le procédé comprend les étapes suivantes : amplification par PCR de l'échantillon d'acide nucléique par l'utilisation d'une première amorce et d'une seconde amorce; addition d'une sonde acide nucléique au système d'amplification par PCR, la sonde acide nucléique correspondant à au moins une partie de la séquence d'acide nucléique correspondante entre les deux sites prédéterminés; et détection de la lumière émise par le système de réaction afin de déterminer si les sites prédéterminés dans l'échantillon d'acide nucléique ont les mutations connues, des bases correspondant à une mutation connue au niveau d'un des deux sites prédéterminés étant contenues à proximité de l'extrémité 3' de la première amorce, des bases correspondant à l'autre mutation connue étant contenues à proximité de l'extrémité 3' de la seconde amorce, et la sonde acide nucléique comprenant un groupe luminescent formé à l'extrémité 5' de celle-ci et un groupe de régulation formé à l'extrémité 3'de celle-ci ayant la capacité à réguler la lumière émise par le groupe luminescent. Par l'utilisation du procédé, il peut être déterminé efficacement si deux sites prédéterminés dans un échantillon d'acide nucléique ont des mutations connues.
(ZH) 本发明公开了确定核酸样本的两个预定位点是否具有已知突变的方法、试剂盒以及引物。其中,该方法包括:利用第一引物和第二引物对核酸样本进行PCR扩增,并且在PCR扩增体系中加入核酸探针,核酸探针对应两个预定位点之间至少一部分对应的核酸序列;检测反应体系的发光,以便确定核酸样本的预定位点是否存在已知突变,第一引物的近3'端包含与两个预定位点之一已知突变对应的碱基,第二引物的近3'端包含与另一个已知突变对应的碱基,核酸探针具有:发光基团,发光基团形成于核酸探针的5'端,调节基团,调节基团形成于核酸探针的3'端,并且调节基团可以调节发光基团的发光。利用该方法能够有效地确定核酸样本的两个预定位点是否具有已知突变。
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