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1. (WO2013163451) STAIN-FREE PROTEIN QUANTIFICATION AND NORMALIZATION
Latest bibliographic data on file with the International Bureau   

Pub. No.:    WO/2013/163451    International Application No.:    PCT/US2013/038250
Publication Date: 31.10.2013 International Filing Date: 25.04.2013
IPC:
G01N 21/64 (2006.01), G01N 21/76 (2006.01), G01N 21/33 (2006.01), G01N 33/52 (2006.01), G01N 33/68 (2006.01), G06F 19/20 (2011.01), G01J 1/18 (2006.01), G01J 3/443 (2006.01), C12Q 1/06 (2006.01)
Applicants: BIO-RAD LABORATORIES, INC. [US/US]; 1000 Alfred Nobel Drive Hercules, CA 94547 (US)
Inventors: FREEBY, Steve; (US).
LIU, Ning; (US).
MCDONALD, Kevin; (US).
PAULUS, Aran; (US).
POSCH, Anton; (DE)
Agent: ANTHONY, Peter; Kilpatrick Townsend and Stockton LLP 2 Embarcadero Center, 8th Floor San Francisco, CA 94111 (US)
Priority Data:
61/639,692 27.04.2012 US
61/639,686 27.04.2012 US
Title (EN) STAIN-FREE PROTEIN QUANTIFICATION AND NORMALIZATION
(FR) DÉTERMINATION QUANTITATIVE ET NORMALISATION DE PROTÉINES SANS COLORATION
Abstract: front page image
(EN)Disclosed herein are methods of protein quantification and normalization using haloalkylated tryptophan fluorescence. Complex protein samples, i.e., samples that each contain 1,000 or more distinct proteins, from diverse sources that do not have common protein profiles are treated with a halo-substituted organic compound (i.e. haloalkane) that reacts with tryptophan residues to form fluorescent products. Irradiation of the samples with ultraviolet light and the detection and quantification of the resultant fluorescent emissions from all proteins in each sample are then used to obtain comparative values for total protein content among the various samples. The values thus obtained are found to be valid indications of comparative total protein content, despite the fact that the tryptophan levels vary widely among the various proteins in any single sample and the samples, due to the diversity of their origins, tend to differ among themselves in the identities and relative amounts of the proteins that they contain. Protein samples are also normalized to correct for differences in sample dilution, sample loading, and protein transfer inconsistencies, by using stain-free detection of total protein in each of the samples, or detection of subsamples within each sample.
(FR)La présente invention concerne des procédés de détermination quantitative et de normalisation de protéines à l'aide de la fluorescence du tryptophane halogénoalkylé. Des échantillons de protéines complexes, à savoir des échantillons qui contiennent chacun 1 000 protéines distinctes ou plus, de diverses sources qui ne présentent pas de profils protéiques communs, sont traités avec un composé organique à substitution halo (c'est-à-dire halogénoalcane) qui réagit avec des résidus tryptophanes pour former des produits fluorescents. L'irradiation des échantillons avec un rayon ultraviolet et la détection et la détermination quantitative des émissions fluorescentes obtenues de toutes les protéines dans chaque échantillon sont alors utilisées pour obtenir des valeurs comparatives pour la teneur totale en protéines parmi les divers échantillons. Les valeurs ainsi obtenues s'avèrent être des indications valables de la teneur totale en protéines comparative, malgré le fait que les concentrations de tryptophane varient largement parmi les diverses protéines dans n'importe quel échantillon unique et que les échantillons, en raison de la diversité de leurs origines, ont tendance à différer entre eux dans les identités et les quantités relatives des protéines qu'ils contiennent. Les échantillons de protéines sont également normalisés pour corriger les différences de dilution d'échantillon, de charge d'échantillon et d'incohérences de transfert de protéines, en utilisant la détection sans coloration des protéines totales dans chacun des échantillons, ou la détection de sous-échantillon au sein de chaque échantillon.
Designated States: AE, AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BH, BN, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CL, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DK, DM, DO, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, GT, HN, HR, HU, ID, IL, IN, IS, JP, KE, KG, KM, KN, KP, KR, KZ, LA, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LY, MA, MD, ME, MG, MK, MN, MW, MX, MY, MZ, NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PA, PE, PG, PH, PL, PT, QA, RO, RS, RU, RW, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, ST, SV, SY, TH, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, ZA, ZM, ZW.
African Regional Intellectual Property Organization (BW, GH, GM, KE, LR, LS, MW, MZ, NA, RW, SD, SL, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
Eurasian Patent Organization (AM, AZ, BY, KG, KZ, RU, TJ, TM)
European Patent Office (AL, AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HR, HU, IE, IS, IT, LT, LU, LV, MC, MK, MT, NL, NO, PL, PT, RO, RS, SE, SI, SK, SM, TR)
African Intellectual Property Organization (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Publication Language: English (EN)
Filing Language: English (EN)