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1. (WO2013155361) METHODS FOR MEASURING POLYMERASE ACTIVITY USEFUL FOR SENSITIVE, QUANTITATIVE MEASUREMENTS OF ANY POLYMERASE EXTENSION ACTIVITY AND FOR DETERMINING THE PRESENCE OF VIABLE CELLS
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Pub. No.: WO/2013/155361 International Application No.: PCT/US2013/036264
Publication Date: 17.10.2013 International Filing Date: 12.04.2013
IPC:
C12Q 1/68 (2006.01)
C CHEMISTRY; METALLURGY
12
BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
Q
MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES OR MICRO-ORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
1
Measuring or testing processes involving enzymes or micro-organisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
68
involving nucleic acids
Applicants:
ZEUS SCIENTIFIC, INC. [US/US]; P.O. Box 38 Raritan, NJ 08869-0038, US
Inventors:
O'HARA, Shawn, Mark; US
ZWEITZIG, Daniel; US
Agent:
WILCOX, James; 1767 Route 313 Perkasie, PA 18944, US
Priority Data:
61/623,11412.04.2012US
Title (EN) METHODS FOR MEASURING POLYMERASE ACTIVITY USEFUL FOR SENSITIVE, QUANTITATIVE MEASUREMENTS OF ANY POLYMERASE EXTENSION ACTIVITY AND FOR DETERMINING THE PRESENCE OF VIABLE CELLS
(FR) PROCÉDÉS DE MESURE DE L'ACTIVITÉ DE LA POLYMÉRASE POUVANT ÊTRE UTILISÉS EN VUE DE MESURES QUANTITATIVES SENSIBLES D'UNE QUELCONQUE ACTIVITÉ D'EXTENSION PAR LA POLYMÉRASE ET POUR DÉTERMINER LA PRÉSENCE DE CELLULES VIABLES
Abstract:
(EN) A novel, highly sensitive, quantitative and rapid DPE-PCR assay is disclosed that can be used to enumerate prokaryotic cells when presenting a purified or selected cell type and that has the capability to reproducibly measure DNA polymerase extension activity from less than 10 cfu of bacteria via coupling to bead lysis. Also disclosed is the potential for the DPE-PCR assay of the invention to universally detect microbes by testing a panel of microorganisms comprised of gram-negative bacteria, gram-positive bacteria and Candida species. Furthermore, it is disclosed that the DPE-PCR assay of the invention can be used to assess bacterial cell viability, provided via the reproducibly strong correlation between DNA polymerase extension activity and proliferation as indicated by the presence of cfu. It is believed that the disclosed assay of the invention can be a useful quantitative tool for a wide range of testing applications within pharmaceutical, environmental, food and clinical settings.
(FR) La présente invention concerne un dosage DPE-PCR quantitatif inédit, hautement sensible et rapide pouvant être utilisé pour dénombrer les cellules procaryotes lors de la présentation d'un type cellulaire purifié ou sélectionné et permettant de mesurer de façon reproductible l'activité d'extension par l'ADN polymérase à partir de moins de 10 ufc de bactéries, par liaison à des billes de lyse. L'invention concerne également la possibilité pour le dosage DPE-PCR de l'invention de détecter tout type de microbe en testant une batterie de microorganismes comprenant des bactéries Gram négatif, de bactéries Gram positif et des espèces de Candida. L'invention concerne, en outre, la possibilité d'utiliser le dosage DPE-PCR de l'invention pour évaluer la viabilité de cellules bactériennes, du fait de la forte corrélation en termes de reproductibilité entre l'activité d'extension par l'ADN polymérase et la prolifération comme indiquée par la présence d'ufc. On pense que le dosage selon l'invention peut constituer un outil quantitatif utile pour une grande diversité d'applications d'essai dans les domaines pharmaceutique, environnemental, alimentaire et clinique.
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Publication Language: English (EN)
Filing Language: English (EN)