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1. WO2012130153 - QUINOLINONE DERIVATIVES AND USE THEREOF AS MEDICAMENT AGAINST SCHIZOPHRENIA

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[ ZH ]
喹啉酮衍生物及其作为抗精神分裂症药物的应用

技术领域

本发明涉及具有抗精神病活性的喹啉酮衍生物以及它们作为抗精 神分裂症药物的应用。

背景技术

精神分裂症是一种常见的重性精神病患,是所有精神疾病中最严 重、危害最大的一种,全球范围内的发病率约为 1%,随着社会生活节 奏的加快,发病率呈明显上升趋势。多数精神分裂患者由于治疗周期 长、费用高、副作用大而放弃治疗,往往会导致更严重的社会后果。

大量研究表明,脑内单胺递质,特别是多巴胺和 5-羟基色胺系统 与人体正常精神活动密切相关,这两类系统的紊乱可导致多种神经精 神类疾病如精神分裂症、神经性疼痛、躁狂症、焦虑症、各种抑郁症、 帕金森氏病等。

目前临床上使用的药物主要为传统抗精神病药(如多巴胺 D2受体 拮抗剂)和非典型抗精神病药(如 D2/5-HT2a双重拮抗剂),其中,传 统抗精神病药由于容易导致锥体外系症状(EPS ) 而逐渐被淘汰,非典 型抗精神病药种类繁多,但并没有哪一个药物对于精神分裂症整体谱 系的改善有绝对的优势,多数是对阳性或阴性症状中的某一症状有所 改善,或副作用降低。因此寻找毒副作用低,起效快,治疗谱宽的新 型抗精神分裂药一直是世界制药业的研究热点。

近年来,科学家发现多巴胺 D2部分激动剂能在多巴胺活动过度时 减少多巴胺的传递,而非全部阻断;反之,当多巴胺能活性低下时则 引起刺激作用,对精神病阳性和阴性症状都有显著疗效。 5-HT2a受体

拮抗剂可以改善阴性症状,同时与 D2的协同作用可以将 EPS副作用降 低到 1%左右的水平(经典抗精神分裂症药物 EPS发生率约为 30% ) , 5-HTla的部分激动作用及其与 5-HT2a的协同作用可以使得在治疗剂量 下 EPS降低到观测不到的水平,因此,具有 D2、 5-HT2a、 5HTla三靶点 协同作用的新型抗精神分裂药物是目前研发的重点和重要发展方向。

本发明涉及所述喹啉酮衍生物能稳定脑内多巴胺能、 5-羟色胺能 系统,可能对多种神经精神类疾病具有改善和治疗作用,可用于神经 性疼痛、躁狂症、精神分裂症、焦虑症、各种抑郁症、帕金森氏病, 尤其是精神分裂症的治疗。

发明内容

本发明需要解决的技术问题之一是公开一种喹啉酮衍生物,以克 服现有药物锥体外系症状明显、催乳素升高等副作用的缺陷,以解决 临床难题和满足临床用药需求。

本发明需要解决的技术问题之二是公开上述化合物作为在制备治 疗精神分裂症及相关的神经精神类疾病药物中的应用。

本发明所述的喹啉酮衍生物为具有如下结构通式 I 的化合物、通 式 I的化合物消旋体、通式 I的化合物光学异构体、通式 I的化合物的 游离碱或通式 I的化合物的盐:


通式 I

中:

=为单键或双键;

!^代表氢或甲基;

代表氢或甲氧基;

R3代表氢、甲基或乙基;

优选的:

当^为双键时, !^为甲基, R2、 R3分为两种情况,第一种: R2 为甲氧基, R3为氢;第二种, R2为氢, R3为氢或甲基;

当^为单键时, R2、 R3为氢,!^为甲基;

优选的:所述的喹啉酮衍生物为通式 I 的化合物光学异构体时, 当^为双键时, R1 甲基, R2为氢, R3为甲基或乙基;

当^为单键时, R2、 R3为氢, R1为甲基;

在上述结构化合物为游离碱的情况下,它们均能够与各种无机酸 和有机酸形成各种不同的盐。

所述的盐为含有药物上可接受的阴离子的盐,诸如盐酸盐、氢溴 酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐或硫酸氢盐、磷酸盐或酸式磷酸盐、 乙酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、富马酸盐、葡糖 酸盐、糖二酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲 苯磺酸盐,其中优选盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、三氟醋酸盐、酒石 酸盐或甲磺酸盐,所说的盐优选含 0.5-3分子的结晶水,优选为盐酸盐、 溴氢酸盐、硫酸盐、三氟醋酸盐或甲磺酸盐;

优选的,所述喹啉酮衍生物包括:

7-(3-(4-(6-氟苯并 [d]异哑唑 -3-基)哌啶 -1-基)丙氧基 )-3,4-二氢 -3-甲 基喹啉 -2(1H)-酮、

7— (3—(4-(6-氟苯并 [d]异哑唑 -3-基)哌啶 -1-基)丙氧基 )-3-甲基喹啉 -2(1H)-酮、

7— (3— (4-(6-氟苯并 [d]异哑唑 -3-基)哌啶 -1-基) -2-甲基丙氧基) -3-甲 基喹啉 -2(1H)-酮、

7-(3-(4-(6-氟苯并 [d]异哑唑 -3-基)哌啶 -1-基)丙氧基 )-6-甲氧基 -3-甲基喹啉 -2(1H)-酮。

(R)- 7-(3-(4-(6-氟苯并 [d]异哑唑 -3-基)哌啶 -1-基)丙氧基) -3-甲基 喹啉 -2(1H 酮或其盐、

(S)- 7-(3-(4-(6-氟苯并 [d]异哑唑 -3-基)哌啶 -1-基)丙氧基) -3-甲基喹 啉 -2(1H)-酮或其盐。

上述化合物的结构见表 1。

表 1、化合物结构


本发明将化合物 1-1、 1-2、 1-3、 1-4、(R)- I-l和 (S)- I-l简称为 "本 发明所述六个化合物" ,下同。

本发明还涉及一种用于治疗精神分裂症的组合物,所述组合物包 括治疗有效量的结构通式 (I)所示的化合物或该化合物的游离碱或盐和 医学上可接受的载体。

本发明还涉及化合物或其游离碱或盐在制备治疗精神分裂症及其 它神经精神疾病药物中的应

用。

所述的神经精神疾病包括神经性疼痛、躁狂症、精神分裂症、焦 虑症或各种抑郁症等。

本发明的化合物可采用如下的方法进行合成:


其中, 、 R2的涵义同上,化合物 B结构中的 1为卤素; 化合物 A可商购,不易商购的相关中间体可用通用的合成方法制 备,合成方法见具体化合物。

体外受体结合试验表明,本发明所涉及的化合物对多巴胺 D2、 5-HT2a、 5-HTla受体具有较高的亲和力,且相互之间的比例关系符合成 药性要求,具有深入研究的价值。

动物试验结果显示,这些化合物能改善阿朴吗啡模型、 MK-801 模型小鼠的相关症状。由于这些体外作用靶点和体内药理模型与多巴 胺功能紊乱导致的神经系统疾病,特别是精神分裂症密切相关,因此 提示本发明涉及的化合物具有对精神分裂症的治疗作用。动物僵住症 实验表明,该系列化合物在治疗剂量下诱发椎体外系副作用的概率低。

动物模型研究结果表明,本发明中所述六个化合物均具有明显抗 精神分裂症的作用,口服吸收较好,急性毒性与阿立哌唑和齐拉西酮 相当,远低于利培酮, Ames试验阴性,治疗指数较大,药代动力学性 质符合成药性要求,具备作为新型抗精神分裂症开发的潜在价值。

CN101302214报道了化合物 Π-1的一些药理数据,如该化合物对 阿扑吗啡模型的药效 (反映抗精神分裂症阳性症状的作用),但没有 抗精神分裂症阴性症状的试验结果,如对 MK-801诱导的旷场运动模型 的研


II- 1

本发明所涉及的六个化合物较 Π-1 具有更好的抗精神分裂症活性 和更高的安全性, 具备突出的成药性优点。具体阐述如下:按照

CN101302214说明书中方法合成了 11-1,与本发明所述六个化合物进行 了药效、药代及安全性的比对实验(结果见实施例 15〜实施例 25 ) , 结果表明:

1、阿扑吗啡诱导的刻板运动模型中,说明本发明所述六个化合物 具有较强的抗精神分裂症阳性症状作用,与 Π-1 相比在该模型下活性 相当。

2、 MK-801诱导的旷场运动模型中,本发明中所述六个化合物显 示出较强的抗精神分裂症阴性症状作用,活性均远强于 11-1。

3、本发明所述六个化合物 ED2Q值为其对应的抗精神分裂活性 ED5Q值 10倍左右,提示该系列化合物诱发共济失调的可能性较小。其 ED2Q剂量值远大于阳性药利培酮及 11-1,由于该系列化合物抗精神分裂 阳性症状活性与利培酮、 Π-1相当,所以其治疗窗较利培酮、 Π-1更宽, 又鉴于本发明所述化合物对精神分裂症阴性症状、药代特性显著优于 化合物 Π-1,因此,本发明所述六个化合物比 Π-1具有更强的抗精神分 裂症活性和更好的安全性,成药性更好,显示了本发明所述六个化合 物较 CN101302214, 具有技术优势、创造性、深入开发的价值及显著 的科学进步。

本发明的衍生物可以组合物的形式通过口服、注射等方式施用于 需要这种治疗的患者,剂量一般为 10〜500mg/天体重,具体可根据患 者的病情、年龄和性别由医师决定。

所说的组合物含有治疗有效量的所说的喹啉酮衍生物和医学上可 接受的载体。

所说的载体是指药学领域常规的载体,例如:稀释剂、赋形剂如 水等;粘合剂如纤维素衍生物、明胶、聚乙烯吡咯烷酮等;填充剂如 淀粉等;崩裂剂如碳酸钙、碳酸氢钠;润滑剂如硬脂酸钙或硬脂酸镁 等。另外,还可以在组合物中加入其他辅助剂如香味剂和甜味剂。用 于口服时,可将其制备成常规的固体制剂如片剂、粉剂或胶囊等;用 于注射时,可将其制备成注射液。

本发明的组合物的各种剂型可以采用医学领域常规的方法进行制 备,其中活性成分的含量为 0.1%〜99.5% (重量比)。

综上所述,本发明的喹啉酮衍生物对多巴胺 D2 受体具有较高的 亲和力,不仅具有较强的拮抗活性,且体现出对 D2 受体的部分激动 作用。体内试验表明,本发明的化合物能改善阿朴吗啡模型、 MK-801 模型小鼠的相关症状。由于这些体外作用靶点和体内药理模型与精神 分裂症密切相关,因此提示本发明涉及的化合物具有对精神分裂症的 治疗作用。另外该系列化合物口服吸收较好,其急性毒性较低(LD5()

> 1500mg/Kg,小鼠单次灌服)与阿立哌唑和齐拉西酮相当,远远低于 利培酮,具备作为一类新型抗神经精神疾病药物开发的潜在价值。

附图说明

图 1 化合物 1-1手性柱液相图谱。

图 2 化合物 (R)- 1-1手性柱液相图谱。

图 3 化合物 (S)- 1-1手性柱液相图谱。

图 4 化合物 (S)- 1-1单晶 X-Ray衍射正视图,分别为一个晶胞的两 个分子图。

图 5 化合物 (S)- 1-1单晶 X-Ray衍射侧视图,分别为一个晶胞的两 个分子图。

具体实施方式

本发明按下列方法制备。除非另外说明,取代基、 R2、 R3、的 定义同上。

实施例 1

1-1 7-(3-(4-(6-氟苯并 [d]异哑唑 -3-基)哌啶 -1-基)丙氧基 )-3,4-二氢 -3-甲基喹啉 -2(1H)-酮的制备

1 ) N-(3-甲氧基苯基)丙酰胺

将 3-甲氧基苯胺 (0.1mol)、二氯甲烷 (30mL)、三乙胺 (0.2mol),加 入到 lOOmL三口瓶中,冰浴下滴加丙酰氯 (0.12mol)的二氯甲烷溶液 30 mL,控温不超过 5 °C,加毕,撤去冰浴,室温搅拌 0.5h,体系依次用 水、稀盐酸、饱和食盐水洗涤,无水硫酸镁干燥,蒸干得白色粉末状 固体 17.01g,收率 95%。

2) 2-氯 -7-甲氧基 -3-甲基喹啉

将 DMF(20mL)加入到 250mL 三口瓶中, 冰盐浴下滴加 POCl3(100mL),控温不超过 0°C,加毕搅拌 0.5h,分批加入 N-(3-甲氧 基苯基)丙酰胺粉末 (31.0g),缓慢升温至 50°C,剧烈反应,待放热缓和 后,缓慢升温至回流,保温反应 2h,冷至室温,将体系倒入 800 g碎 冰中,以碳酸钠调节体系 pH至 7,析出黄色固体,以石油醚-乙酸乙酯 重结晶得纯品 20.86g,收率 58%。

3 ) 7-甲氧基 -3-甲基喹啉 -2(1H)-酮

将 2-氯 -7-甲氧基 -3-甲基喹啉 (20.76g)、冰醋酸 (150mL)置于 250mL 单口瓶中,加热回流 24h,回收醋酸,残余物以 95%乙醇重结晶,得白 色针状结晶 16.08g,收率 85%。

4) 7-甲氧基 -3,4-二氢 -3-甲基喹啉 -2(1H)-酮

将 7-甲氧基 -3-甲基喹啉 -2(1H)-酮(18.92g)、冰醋酸(150mL)、 10%Pd/C(lg)加入到 250mL三口瓶中,以氮气置换体系中的空气,再以 氢气置换氮气,然后加热至 80°C反应过夜,冷至室温,过滤,滤液蒸 干得白色粉末,水洗涤一次, 50°C真空干燥 4h,得白色粉末状固体 18.91g,收率 98.95%。

5 ) 7-羟基 -3,4-二氢 -3-甲基喹啉 -2(1H)-酮

将 7-甲氧基 -3,4-二氢 -3-甲基喹啉 -2(1H)-酮(19.12g)、 40%氢溴酸 (150mL)置于 250mL单口瓶中,加热回流 12h,冷却至室温,析出固体, 过滤,滤饼依次以氢溴酸、水洗涤, 50°C真空干燥 4h,得白色粉末状 固体 14.60g,收率 82.4%。

6 ) 3-(1-(3-氯丙基)哌啶 -4-基) -6-氟苯并 [d]异哑唑

将 6-氟 -3- (哌啶 -4-基)苯并 [d]异哑唑(22.00g)、 1-溴 -3-氯丙烷 (40mL)、无水碳酸钾 (40g)、丙酮 (250mL)加入到 500mL单口瓶中,回 流过夜,冷却至室温,过滤,滤饼用热的丙酮洗涤两次,合并滤液, 滴加入无水氯化氢的乙醇溶液,析出白色固体,过滤,滤饼用丙酮洗 涤一次后,溶解于 200mL水中,用碳酸钠调 pH值至 9,过滤,得白色 粉末状固体 15.94g,收率 48.0%

7) 7-(3-(4-(6-氟苯并 [d]异哑唑 -3-基)哌啶 -1-基)丙氧基 )-3,4-二氢 -3-甲基喹啉 -2(1H)-酮

将 3-(1-(3-氯丙基)哌啶 -4-基) -6-氟苯并 [d]异哑唑 (lmmol)、 7-羟基 —3,4-二氢 -3-甲基喹啉 -2(1H)-酮(1.0mmol)、无水碳酸钾 (3.0mmol)加入到 lOmLDMF中, 60°C反应过夜,滤除碳酸钾,母液蒸干,得淡黄色固体, 滤饼以 95%乙醇重结晶, 50°C真空干燥 4h,得白色粉末状固体 0.30g, 收率 69%。

1H NMR(DMSO-d6):l .27(d,3H,J=9.2Hz),2.06-2.32(m,9H),2.67-2.69 (t,2H),2.95(d*d,lH,J=3.2Hz,12.8Hz),3.15-3.17(m,2H),4.05(t,2H,J=6Hz),6. 37(d,lH,J=2.4Hz),6.56(d*d,lH,J=2.4Hz,8.0Hz),7.05-7.11(m,2H),7.25-7.29 (m,lH),7.73-7.76(m,lH),7.98(s,lH),11.43(brs,lH)

ESI-MS:438(M+1)

实施例 2

1-1盐酸盐的制备

将 7-(3-(4-(6-氟苯并 [d]异哑唑 -3-基)哌啶 -1-基)丙氧基 )-3,4-二氢 -3-甲基喹啉 -2(1H)-酮 (lmmol)溶解与乙酸乙酯 (50mL)中,缓慢滴加无水氯 化氢的乙酸乙酯溶液 (lmol/L,5mL),搅拌 2h,析出固体,过滤,滤饼 以乙酸乙酯洗涤, 50°C真空干燥 4h,得白色粉末状固体 0.436g,收率 92%。

ESI-MS:438(M+1)

元素分析结果:

计算值: C, 63.35%; H, 6.17%; Cl, 7.48%; F, 4.01%; N, 8.87%; O, 10.13%

实验值: C, 63.29%;H, 6.24%; CI, 7.43%; F, 4.05%; N, 8.82%; O, 10.17%

实施例 3

1-1 甲磺酸盐的制备

将 1-1 (lmmol)溶解与乙酸乙酯 (50mL)中,缓慢滴加甲磺酸的乙酸 乙酯溶液 (lmol/L,5mL),搅拌 2h,析出固体,过滤,滤饼以乙酸乙酯 洗涤, 50°C真空干燥 4h,得白色粉末状固体 0.487g,收率 91.3%。

ESI-MS:438(M+1, 正离子模式), 95(CH3SO3—,负离子模式) 元素分析结果:

计算值: C, 58.52%; H, 6.04%; F, 3.56%; N, 7.87%; 0, 17.99%; S, 6.01%

实验值: C, 58.49%; H, 6.09%; F, 3.50%; N, 7.81%; 0, 18.02%; S, 6.09%

实施例 4

1-2 7-(3-(4-(6-氟苯并 [d]异哑唑 -3-基)哌啶 -1-基)丙氧基 )-3-甲基 喹啉 -2(1H)-酮的制备

1 ) 7-羟基 -3-甲基喹啉 -2(1H)-酮

7-甲氧基 -3-甲基喹啉 -2(1H)-酮(O.lmol, 按照 1-1方法制备)、

40%氢溴酸(lOOmL)置于 250mL单口瓶中,加热回流 12h,冷却至室温, 析出固体,过滤,滤饼依次以氢溴酸、水洗涤, 50°C真空干燥 4h,得 白色粉末状固体 14.35g,收率 82%。

2 ) 7-(3-(4-(6-氟苯并 [d]异哑唑 -3-基)哌啶 -1-基)丙氧基 )-3-甲基喹啉

-2(1H)-酮

将 7-羟基 -3-甲基喹啉 -2(1H)-酮 (0.1mol)、 3-(1-(3-氯丙基)哌啶 -4-基)-6-氟苯并 [d]异哑唑(0.105mol),无水碳酸钾(0.3mol)加入到 250mLDMF 中, 60°C反应过夜,滤除碳酸钾,母液蒸干,得淡黄色固 体,以 95%乙醇热洗涤, 50°C真空干燥 4h,得白色粉末状固体 26.97g, 收率 62%。

1H NMR(DMSO-d6): 1.82-2.00(m,6H),2.02(s,3H),2.10-2.13(m,2H), 2.45-2.50(m,2H),2.936-2.965(m,2H),3.07-3.11(m,lH),4.03(t,2H,J=6.4Hz), 6.76(d*d,lH,J=2.4Hz,8.8Hz),6.805(d,lH,2.0Hz),7.22-7.27(m,lH),7.45(d,l H,J=8.8Hz),7.64-7.65(m,lH),7.973(d*d,lH,J=6.4Hz,8.4Hz), 11.49(brs,lH)

ESI-MS:436(M+1)。

实施例 5

1-2硫酸一氢盐的制备

将 I-2(lmmol)溶解于 50mL乙酸乙酯中,缓慢滴加 0.5MH2SO4的 乙酸乙酯溶液 (20mL),析出固体,过滤,滤饼以 10mL乙酸乙酯洗涤, 50°C真空干燥 4h,得白色粉末状固体 0.42g。

ESI-MS+: 436(M+1); ESI-MS—: 97(硫酸氢根)

元素分析结果:

计算值: C, 56.38%; H, 5.11%; F, 3.57%; N, 7.89%; 0, 21.03%; S,

6.02%

实验值: C, 56.33%; H, 5.15%; F, 3.54%; N, 7.91%; O, 21.01%; S, 6.06%。

实施例 6

1-2氢溴酸盐的制备

将 I-2(lmmol)溶解于 50mL乙酸乙酯中,缓慢滴加 0.5MHBr的乙 酸乙酯溶液 (20mL),析出固体,过滤,滤饼以 10mL乙酸乙酯洗涤, 50 °C真空干燥 4h,得白色粉末状固体 0.41g。

ESI-MS:436(M+1, 正离子模式), 79, 81 (Br", 负离子模式) 元素分析结果:

计算值: C, 58.15%; H, 5.27%; Br, 15.47%; F, 3.68%; N, 8.14%; 0, 9.29%

实验值: C, 58.10%; H, 5.29%; Br, 15.43%; F, 3.62%; N, 8.19%; 0, 9.37%。

实施例 7

1-3 7-(3-(4-(6-氟苯并 [d]异哑唑 -3-基)哌啶 - 1 -基 )-2-甲基丙氧 基) -3-甲基喹啉 -2(1H)-酮的制备

1 ) 3-(1-(3-氯 -2-甲基丙基)哌啶 -4-基) -6-氟苯并 [d]异哑唑

将 6-氟 -3- (哌啶 -4-基)苯并 [d]异哑唑 (O.lmol)、 2-甲基 -1-溴 -3-氯丙 烷 (0.4mol)、无水碳酸钾 (0.3mol)、丙酮 (300mL)加入到 500mL单口瓶中, 回流过夜,冷却至室温,过滤,滤饼用热的丙酮洗涤两次,合并滤液, 滴加入无水氯化氢的乙醇溶液,析出白色固体,过滤,滤饼用丙酮洗 涤一次后,溶解于 200mL水中,用碳酸钠调 pH值至 9,过滤,得白色 粉末状固体 19.36g,收率 62.3%。

2 ) 7-(3-(4-(6-氟苯并 [d]异哑唑 -3-基)哌啶 -1-基) -2-甲基丙氧基) -3-甲基喹啉 -2(1H)-酮

将 3-(1-(3-氯 -2-甲基丙基)哌啶 -4-基) -6-氟苯并 [d]异哑唑(10mmol)、 7-羟基 -3-甲基喹啉 -2(1H)-酮(lOmmol)、无水碳酸钾(30mmol)、 DMF(60mL)加入到 lOOmL单口瓶中, 60°C反应过夜,滤除碳酸钾,滤 液蒸干,得淡黄色固体,以 95%乙醇重结晶,得白色粉末状固体 3.25g, 收率 72.4%。

1H NMR(DMSO-d6):1.02(d,3H,J=6.4Hz),1.81-1.88(m,2H),2.00-2.03 (m,2H),2.037(s,3H),2.11-2.28(m,2H),2.39-2.44(m,lH),2.90-3.01(m,2H),3. l l-3.19(m,lH),3.826-3.865(m,lH),4.004-4.038(m,lH),6.772(d*d,lH,J=9.6 Hz,2.4Hz),6.805(d,lH,J=2.4Hz),7.225-7.276(m,lH),7.46(d,lH,J=8.8Hz),7. 63(s,lH),7.64(d,lH,J=8.8Hz),7.968(d*d,lH,J=8.8Hz,4.2Hz),11.47(brs,lH)

ESI-MS:450(M+1)。

实施例 8

1-3盐酸盐的制备

将 I-3(lmmol)溶解与乙酸乙酯 (50mL)中,缓慢滴加无水氯化氢的 乙酸乙酯溶液 (lmol/L,5mL),搅拌 2h,析出固体,过滤,滤饼以乙酸 乙酯洗涤, 50°C真空干燥 4h,得白色粉末状固体 0.44g。

元素分析结果:

计算值: C, 69.47%; H, 6.28%; F, 4.23%; N, 9.35%; 0, 10.68% 实验值: C, 69.42%; H, 6.30%; F, 4.29%; N, 9.31%; 0, 10.69%

实施例 9

1-3三氟甲磺酸盐的制备

将化合物 I-3(lmmol)溶解于 50mL乙酸乙酯中,缓慢滴加 0.5M三 氟甲磺酸的乙酸乙酯溶液 20mL,搅拌 0.5h后,析出固体,过滤,滤饼 以 10mL乙酸乙酯洗涤, 50°C真空干燥 4h,得白色粉末状固体 0.49g。

元素分析结果:

计算值: C, 54.08%; H, 4.88%; F, 12.67%; N, 7.01%; 0, 16.01%; S, 5.35%

实验值: C, 54.03%; H, 4.90%; F, 12.64%; N, 7.03%; 0, 15.96%; S,

5.44%

ESI-MS:450(M+1, 正离子模式), 149(CF3SO3—,负离子模式)。

实施例 10

1-4 7-(3-(4-(6-氟苯并 [d]异哑唑 -3-基)哌啶 -1-基)丙氧基 )-6-甲氧基 -3-甲基喹啉 -2(1H)-酮的制备

1 ) 2- (苄氧基) -1-甲氧基 -4-硝基苯

将 5-硝基愈创木酚钠 (20mmol)、氯化苄(19.5mmol)、无水碳酸钾 (30mmol)、 DMF(250mL)加入到 500mL 单口瓶中, 50°C反应过夜,滤 除碳酸钾,母液蒸干,用少量水洗涤后,以 95%乙醇重结晶,得淡黄 色固体 (4.29g),收率 85%。

2) 3-苄氧基 -4-甲氧基苯胺

2- (苄氧基) -1-甲氧基 -4-硝基苯(10mmol)、无水乙醇 (60mL)、乙酸 乙酯 (60mL)、加入到 250mL 四口瓶中,加热到 70°C,分批缓慢加入

SnCl2-H2O(40mmol),加毕保温反应 4h,蒸除溶剂,所得粘稠状物以 10% 氢氧化钠溶液 (200mL)、乙酸乙酯 (200mL)分配,水层以乙酸乙酯 (lOOmL) 萃取一次,合并有机层,依次用水(100mL*2)、饱和食盐水(100mL*2) 洗涤,无水硫酸钠干燥,蒸干得黑色固体 (1.66g),收率 72.5%。

3 ) N-(3- (苄氧基) -4-甲氧基苯基)丙酰胺

3-苄氧基 -4-甲氧基苯胺(10mmol)、 CH2Cl2(20mL)、三乙胺 (20mmol) 加入到 lOOmL三口瓶中,降温至 0°C,缓慢滴加溶有丙酰氯(15mmol) 的 CH2C12溶液 20mL,控温不超过 5°C,加毕室温搅拌 2h,反应液依 次以水、稀盐酸、饱和食盐水洗涤,无水硫酸镁干燥,蒸干得白色粉 末状固体 (2.63g),收率 92.3%。

4) 7- (苄氧基) -2-氯 -6-甲氧基 -3-甲基喹啉

将 DMF(20mL)加入到 250mL 三口瓶中, 冰盐浴下滴加 POCl3(100mL), 控温不超过 0°C,加毕搅拌 0.5h,分批加入 N-(3- (苄氧 基) -4-甲氧基苯基)丙酰胺粉末 (lOmmol), 缓慢升温至 50°C,剧烈反应, 待放热缓和后,缓慢升温至回流,保温反应 2h,蒸除大部分三氯氧磷, 冷至室温,将体系倒入 500g碎冰中,以碳酸钠调节体系 pH至 7,析 出黄色固体,以石油醚-乙酸乙酯重结晶得氮黄色粉末状固体 (1.60g), 收率 56.4%。

5 ) 7- (苄氧基) -6-甲氧基 -3-甲基喹啉 -2(1H)-酮

将 7- (苄氧基) -2-氯 -6-甲氧基 -3-甲基喹啉(10mmol)、冰醋酸 (150mL)置于 250mL单口瓶中,加热回流 24h,回收醋酸,残余物以 95% 乙醇重结晶,得白色粉末状固体 (2.23g),收率 84.2%。

6) 7-羟基 -6-甲氧基 -3-甲基喹啉 -2(1H)-酮

将 7- (苄氧基) -6-甲氧基 -3-甲基喹啉 -2(1H)-酮(10mmol)、甲酸铵 (40mmol)、 10%Pd/C(lg)、无水乙醇 (80mL)加入到 250mL单口瓶中,加 热回流过夜,滤除 Pd/C,滤液浓缩至干,以水洗涤 (20mL*2),自然晾 干,得白色粉末状固体 (1.69g),收率 96.3%。

7 ) 7-(3-(4-(6-氟苯并 [d]异哑唑 -3-基)哌啶 -1-基)丙氧基 )-6-甲氧基 -3-甲基喹啉 -2(1H)-酮

将 7-羟基 -6-甲氧基 -3-甲基喹啉 -2(1H)-酮(10mmol)、3-(l-(3-氯丙基) 哌啶 -4-基)-6-氟苯并 [d]异哑唑(lOmmol)、无水碳酸钾(30mmol)、 DMF(50mL)加入到 lOOmL单口瓶中, 60°C反应过夜,滤除碳酸钾,滤 液蒸干,以 10mL95%的乙醇搅拌洗涤,过滤,滤饼 50°C真空干燥,得 白色粉末状固体 (3.51g),收率 75.3%。

1H NMR(DMSO-d6):2.10-.46(m,l lH),2.71-2.92(m,2H),3.16-3.38

(m,2H),3.91(s,3H),4.24(t,2H,J=6Hz),6.898(s,lH),6.917(s,lH),7.048-7.098( m,lH),7.253(d*d,lH,J=8.8Hz,1.6Hz),7.536(s,lH),7.781(s,lH),11.47(brs,l H)

ESI-MS:466(M+1)。

实施例 11

1-4盐酸盐的制备

将 I-4(lmmol)溶解与乙酸乙酯 (50mL)中,缓慢滴加无水氯化氢的 乙酸乙酯溶液 (lmol/L,5mL),搅拌 2h,析出固体,过滤,滤饼以乙酸 乙酯洗涤, 50°C真空干燥 4h,得白色粉末状固体 0.437g。

元素分析结果:

计算值: C, 62.21%; H, 5.82%; C1, 7.06%; F, 3.78%; N, 8.37%; 0, 12.75%

实验值: C, 62.14%; H, 5.88%; Cl, 7.12%; F, 3.76%; N, 8.33%; O, 12.76%

ESI-MS:466 o

实施例 12

1-4甲磺酸盐的制备

将 I-4(lmmol)溶解与乙酸乙酯 (50mL)中,缓慢滴加甲磺酸的乙酸 乙酯溶液 (lmol/L,5mL),搅拌 2h,析出固体,过滤,滤饼以乙酸乙酯 洗涤, 50°C真空干燥 4h,得白色粉末状固体 0.49g。

元素分析结果:

计算值: C, 57.74%; H, 5.74%; F, 3.38%; N, 7.48%; 0, 19.94%; S, 5.71%

实验值: C, 57.69%; H, 5.70%; F, 3.43%; N, 7.53%; 0, 19.91%; S, 5.73%

ESI-MS:446(M+1正离子模式), 95(CH3SO3—,负离子模式)。

实施例 13

(R)-7-(3-(4-(6-氟苯并 [d]异哑唑 -3-基)哌啶 -1-基)丙氧基 )-3,4-二氢 -3-甲基喹啉 -2(1H)-酮和 (S)- 7-(3-(4-(6-氟苯并 [d]异哑唑 -3-基)哌啶 -1-基) 丙氧基 )-3,4-二氢 -3-甲基喹啉 -2(1H)-酮的制备

将化合物 I-l(20g)进行手性色谱分离,色谱柱为 CHIRALPAK IA, 以甲醇:二氯甲烷:二乙胺 =95:5:0.1 (体积比)为流动相,分别得到

1-1 的两个光学异构体,按保留出峰先后顺序,依次命名为 peck-l、 peck-2 , peck-2的绝对构型经单晶 X衍射鉴定为 S构型,则 peck-1为 R构型,具体见图 1〜图 5。

手性液相色谱分析结果如图 1〜图 3所示,图 1 为消旋体液相图 谱,图 2为 peck-1液相图谱,图 3为 peck-2液相图谱,图 4为 peck-2 单晶 X-Ray衍射正视图,图 5为 peck-2单晶 X-Ray衍射侧视图。

实施例 14

片剂:本发明的化合物 25mg

蔗糖 155mg

玉米淀粉 65mg

硬脂酸镁 5mg

制备方法:将活性成分与蔗糖、玉米淀粉混合,加水润湿,搅拌 均匀,干燥,粉碎过筛,加入硬脂酸镁,混合均匀,压片。每片重 250

实施例 15

针剂:本发明的化合物 10mg

注射用水 90mg

制备方法:将活性成分溶解于注射用水,混合均匀,过滤,将所 获得的溶液在无菌条件下分装于安瓿瓶中,每瓶 10mg,活性成分含量 为 lmg/瓶。

实施例 16

多巴胺 D2受体结合试验

1、实验材料:

(1) D2受体细胞转染:

本实验用含有 D2受体蛋白基因的质粒载体转染 HEK293细胞,使 用磷酸钙转染法,并从转染后的细胞中,通过含 G418的培养液培养,

以及挑选细胞单克隆和放射性配基结合实验,最终获得能稳定表达 D2 受体蛋白的稳定细胞株。

(2) 受体结合实验材料:

同位素配基 Spiperone(113.0Ci/mmol) ; 购自 Sigma 公司;

(+) spiperone, 购自 RBI公司; GF/B玻璃纤维滤纸,购自 Whatman公 司; Tris进口分装; PPO、 POPOP购自上海试剂一厂;脂溶性闪烁液。 Beckman LS-6500型多功能液体闪烁计数仪。

2、实验方法:

(1) 细胞:

用含以上各种基因的重组病毒分别感染 HEK-293细胞, 48-72小 时后受体蛋白在膜上大量表达,将细胞 lOOOrpm离心 5min后弃培液, 收胞体,保存于 -20 °C冰箱内备用。实验时用 Tris-HCl 反应缓冲液 ( PH7.5 ) 重悬。

(2) 受体竞争结合实验:

将待测化合物与放射性配基各 20uL及 160uL受体蛋白加入反应试 管中,使受试化合物及阳性药物终浓度均为 10umol/L, 30°C水浴孵育 50min后,即刻移至冰浴终止其反应;在 Millipore细胞样品收集器上, 经过 GF/C玻璃纤维滤纸快速抽滤,并用洗脱液 (50mMTris-HCl, PH7.5) 3mL*3次,用微波 5~6 min烘干,将滤纸移入 0.5mL离心管中,加入 500uL脂溶性闪烁液。避光静置 30min以上,计数测定放射性强度。按 以下公式计算各化合物对同位素配基结合的抑制率百分率:

抑制率 (1%)=总结合管 cpm—化合物 cpm/总结合管 cpm—非特异结 合管 cpm X 100%

化合物每次实验做双复管,进行两次单独实验。

实施例 17

5-HT2a受体结合试验

1、实验材料:

(1) 5-HT2a细胞转染:

本实验用含有 5-1^21受体蛋白基因的质粒载体转染 HEK293 细 胞,使用磷酸钙转染法,并从转染后的细胞中,通过含 G418的培养液 培养,以及挑选细胞单克隆和放射性培基结合实验,最终获得能稳定 表达 5-HT2a受体蛋白的稳定细胞株。

(2) 受体结合实验材料:

同位素配基 [3H]-Ketanserin(67.0Ci/mmol) , 购自 PerkinElmer 公 司;(+)spiperone,购自 RBI公司; GF/B玻璃纤维滤纸,购自 Whatman 公司; Tris 进口分装; PPO、 POPOP 购自上海试剂一厂;脂溶性闪烁 液。 Beckman LS-6500型多功能液体闪烁计数仪。

2、实验方法:

受体竞争结合实验:

用含以上各种基因的重组病毒分别感染 HEK-293细胞, 48-72小 时后受体蛋白在膜上大量表达,将细胞 lOOO rpm离心 5min后弃培液, 收胞体,保存于 -20°C冰箱内备用。实验时用 Tris-HCl反应缓冲液(PH= 7.7 ) 重悬。

将待测化合物与放射性配基各 10 uL及 80 ul受体蛋白加入反应试 管中,使受试化合物及阳性药物终浓度均为 10 umol/L, 37°C水浴孵育 15 min后,即刻移至冰浴终止其反应;在 Millipore细胞样品收集器上, 经过 GF/B玻璃纤维滤纸快速抽滤,并用洗脱液 (50 mM Tris-HCl, PH 7.7) 3 mL * 3次,用微波炉 8~9 min烘干,将滤纸移入 0.5 mL离心管中, 加入 500 uL脂溶性闪烁液。避光静置 30min以上,计数测定放射性强 度。按以下公式计算各化合物对同位素配基结合的抑制率百分率:

抑制率 (I %)=总结合管 cpm—化合物 cpm/总结合管 cpm—非特异 结合管 cpm X 100%

化合物每次实验做两复管,进行两次单独实验。

实施例 18

5-HTla受体结合试验

1、实验材料:

5-HTla 受体同位素配基 [1H].8-OH-DPAT(购自 PE 公 司), (+)5-hydroxytrptamine (购自 Sigma公司), GF/B玻璃纤维滤纸(购自 Whatman 公司),脂溶性闪烁液: ΡΡΟ,ΡΟΡΟΡ (购自上海试剂一厂), 甲苯 (购自国药集团化学试剂有限公司), Tris进口分装。

细胞:用基因重组稳定表达 5-HT1A受体的 HEK-293 细胞,用 DMEM+10%血清的细胞培养液培养 3-5后,用 PBS收细胞,将细胞用 -4度 3000转离心 10分钟后弃上清液,收胞体,存于 -80度冰箱保存。 实验时用 Binding Buffer ( PH7.4 ) 重悬。

2、实验方法:

粗筛测定每个化合物 10umol/L浓度对 [3H] 8-OH-DPAT与 5-HT1A 受体结合的竞争抑制率;抑制率高于 95%的化合物进行一系列浓度的 受体结合试验,确定半数抑制量(IC50, 抑制 50%[1H] 8-OH-DPAT与 5-HTla受体结合所需化合物浓度)。每浓度测定两副管,每个化合物 进行两次独立试验。

总结合管 8-OH-DPAT 20ul

Di Binding Buffer 20ul

细胞 160ul

非特异管 8-OH-DPAT 20ul

5-HT do-4) ) 20ul

细胞 160ul

待测物管 8-OH-DPAT 20ul

待测物 20ul

细胞 160ul

以上反应管混匀后,转移至 30度水浴(1小时),取出立即置于 冰浴中,用 Harvest抽滤(冰冷的 Tris淋洗液抽 5次),滤膜用中火 8

分钟烘干,移入 0.5mL离心管中,加闪烁液,静置 30分钟后测数据。

1%= (总结合 CPM - 待测物 CPM ) /(总结合 CPM - 非特异 CPM)* 100%

表 2 本发明化合物对 D2、 5-HT2a、 5-HTla受体亲和力


实施例 19

D2受体拮抗作用试验

1、实验材料:

稳定表达 rD2R 的 CHO 细胞; Forskolin、 IBMX、 Dopamine、 Haloperidol购自 Sigma; 其余试剂购自国药集团上海化学试剂公司。

2、实验方法:

CHO-rD2细胞以 30000个 /孔接种于 96孔板,培养过夜;各药物 溶解于含 ΙΟΟμΜ ΙΒΜΧ的无血清 F12培液,加入细胞中于 37°C预孵育 30min; 加入含 10μΜ Forskolin 禾卩 10μΜ Dopamine 的无血清 F12培液 反应 8min,加入 ΙΟΟμΙ预冷的 IM HCIO4终止反应,置冰 40min,加入 20μ1 2Μ Κ^Ο3中和反应液, 3000rpm 4°C离心 15min,弃 KClO4沉淀, 取一定量的上清稀释于 0.05M 醋酸缓冲液中,用放射免疫方法测定 cAMP生成量。 [125I]cAMP放免试剂盒购自上海中医药大学核医学实验 中心,具体步骤可参见其说明书。各化合物每浓度测定两副管,每个

化合物至少进行两次独立试验,试验结果见下表:

本发明化合物对02受体拮抗作用结果


实施例 20

D2内在激动活性的 腺苷摄取试验

通过使用 200μ1 不含血清的培养基洗涤两次对细胞除去血清,将 90μ1不含血清的培养基加入到各孔中. 将平板保温 2-3 小时。将作为 阳性对照的 10μ含有血清的培养基、载体(不含血清的培养基)、阴 性对照(拮抗剂)或在不含血清的培养基中的测试化合物和标准品(终 浓度为 luM 的 ΙΟμΙ的 lOuM 溶液)加入到各孔中. 使平板返回到保 温箱中。 18小时后,加入 腺苷 (0.5μα /孔)在 ΙΟμΙ不含血清 的培养基中,并使平板返回到保温箱中。 4 小时后,加入胰蛋白酶 (0.25 %) (ΙΟΟμΙ/孔)。再次使平板返回到保温箱中。 1 小时后,通过经 Whatman GF I B 玻璃纤维滤器进行快速过滤终止试验。例如使用 Brandel MLR -96T 细胞收集器,用 500 mL 50 mM Tris-HCI pH7.0缓冲 液洗涤滤器。例如,使用 Wallac 1205 Betaplate 液体闪烁计数器评估 滤器上的保留的放射性 (50 %有效量)。将内在活性定义为总摄取量 ( ΙμΜ 奎吡罗)减去不含血清的培养基,将测试化合物与分类为 100 %内在活性的 ΙμΜ奎吡罗(完全 DA 激动剂)比较。所有试验均优选 按照一式三份进行,其中每种药物在每个平板中占完整的一列,试验 结果见下表:

本发明化合物 D2部分激动作用结果


实施例 21

5-HT2a受体拮抗作用试验

1、实验材料

[35S] GTPyS ; GF/C玻璃纤维滤纸;脂溶性闪烁液; CHO细胞表 达的 5-HT2a受体蛋白。 Gpp(NH)p, GDP, RB缓冲液。

2、实验方法

CHO细胞用 50mM Tris, H =7.4, 破细胞, 1000xg, 4°C离心 10 分钟,上清再 36000xg, 4°C离心 30分钟,保留沉淀即细胞膜,用 50mM Tris,pH 7.4悬浮, BCA法测蛋白浓度。

GTPyS结合实验在 ΙΟΟμΙ缓冲体系中进行,每管 10μ§蛋白,反应 缓冲液为 50mM Tris, pH7.4, 5mM MgCl2, ImM EDTA, lOOmM NaCl, ImM DTT, pH7.5。反应体系含 40μΜ GDP , 非特异管加入 ΙΟΟμΜ Gpp(NH)p , 测试管加入不同浓度受试药物及 10μΜ 5-ΗΤ。各管加入 O.lnM [35S] GTPyS, 置于 30°C水浴反应 30min。取出置冰上中止反应, 经 GF/C膜过滤,烘干后置于 0.5ml EP管中,加入 500μ1脂溶性闪烁液, 用 MicroBeta液闪仪测放射强度。每个浓度三复管,进行至少 2次独立 计算公式为: [35S] GTPyS Bound ( % above basal) = 100x (样品 dpm—基础 dpm)/ (基础 dpm—非特异 dpm) %

用软件拟合浓度-效应曲线并得出 IC5Q值,具体结果见下表:

表 5 本发明化合物 5-HT2a受体拮抗作用结果


实施例 22

5-111^受体部分激动作用试验

1、实验材料:

[35S]GTPyS (1200 Ci/mmol)、 [1H]8-OH-DPAT (124.9Ci/mmol) 及 5-HTla受体表达的 CHO细胞, GF/C玻璃纤维滤纸;脂溶性闪烁液; Gpp(NH)p, GDP, RB缓冲液。

2、实验方法:

CHO细胞用 50mM Tris, pH 7.4,破细胞, 1000xg, 4°C离心 10 分钟,上清再 36000xg, 4°C离心 30分钟,保留沉淀即细胞膜,用 50mM Tris, pH 7.4悬浮, BCA法测蛋白浓度。

GTPyS结合实验在 ΙΟΟμΙ缓冲体系中进行,每管 10μ§蛋白,反应

缓冲液为 50mM Tris, pH7.4, 5mM MgCl2, O.lmM EGTA, lOOmM NaCl, ImM DTT, pH7.5。反应体系含 40μΜ GDP , 非特异管加入 ΙΟΟμΜ Gpp(NH)p , 测试管加入不同浓度受试药物及 ΙΟμΜ 5-ΗΤ。各管加入 O.lnM [35S] GTPyS, 置于 22°C水浴反应 60min。取出置冰上中止反应, 经 GF/C膜过滤,烘干后置于 0.5mL EP管中,加入 500μί脂溶性闪烁 液,用 MicroBeta液闪仪测放射强度。每个浓度三复管,进行至少 2次 独立实验。

计算公式为: [35S] GTPyS Bound ( % above basal) = 100x (样品 dpm—基础 dpm)/ (基础 dpm—非特异 dpm) %

用软件拟合浓度-效应曲线并得出 IC5Q值,结果如表 5

表 6 本发明化合物 5-111 ^受体部分激动作用结果


实施例 23

本发明中所述六个化合物体内抗精神分裂活性试验

1、阿扑吗啡模型:

(1) 阿扑吗啡诱导小鼠精神分裂症实验模型建立

近交系 C57BL/6小鼠 108只,雌雄各半,按体重均衡随机分为 8组: 空白对照组,模型对照组,受试化合物梯度剂量组(5个剂量,具体根 据预实验情况确定) 和利培酮组(1.00 mg-kg 1) , 阿立哌唑组

(0.50mg/Kg), 灌胃给药。模型对照组灌胃给予相同体积的溶剂。给予 受试药后 30分钟,用浓度为 10.0 mg'kg- 1的阿扑吗啡溶液(溶于 0.1%的 抗坏血酸中),按 10.0 mLkg-1小鼠体重进行腹腔注射诱导建立小鼠精

(2) 刻板行为学观察

小鼠给予阿扑吗啡后,分别观察记录第 6-10、 11-15、 16-20、 21-25、 26-30、 31-35、 36-40、 41-45、 46-50、 51-55、 56-60分钟时的前 30秒 内小鼠是否出现竖尾和爬壁等刻板行为,并按以下标准进行评分:0分, 在 30秒内无上述行为出现(K1秒); 1分,在 30秒内出现不连续的 中度的上述行为 (1秒 <3秒); 2分,在 30秒内出现连续的强的上 述行为 (t > 3秒)。计算 60分钟内小鼠出现竖尾和爬壁等刻板行为的 总 分 。 ED50 计 算 按 照 公 式 :

(3) 统计方法

全部数据以 ±SD表示,用 SPSS17.0软件统计包处理,进行两个样 本均数比较的 t检验及单因素方差分析,以 PO.05为显著性差异。

(4) 实验结果

具体结果见表 7和表 8

表 7 化合物 1-1 单次口服给药对阿扑吗啡诱导的小鼠精神分裂症 模型总刻板运动的影响

组别 n 剂量 (mg_kg— ^ 刻板运动评分改善率(%)

空白对照组 12 - 0.50 土 0.80

模型对照组 12 - 27.83 土 5.10**

利培酮组 12 1.00 5.42 土 4.01 80.54

阿立哌唑组 12 0.50 6.41 土 4.72 76.98

1-1 组 12 0.12 24.17 土 4.65 13.17

1- 1组 12 0.18 15.75 土 4.96## 43.41

1-1 组 12 0.25 1 1.58 土 2.84## 58.38

1- 1组 12 0.35 7.42 土 5.71## 73.35

1-1 组 12 0.50 0.75 土 1.48## 97.31

与空白对照组比较: P<0.05, P<0.01 ; 与模型对照组比较: # P<0.05 , ## P<0.01

表 8单次口服给药对阿扑吗啡诱导的小鼠精神分裂症模型总刻板 运动 ED5o


注: Π-1为专利 CN101302214中的优势化合物

2、 MK-801模型:

(1) MK-801诱导小鼠精神分裂症实验模型建立

近交系 C57BL/6小鼠 108只,雌雄各半,按性别和体重均衡随机分 为 9组:空白对照组,模型对照组,阿立哌唑组(0.3mg/Kg) 、利培酮 阳性对照组 (0.3mg/kg) 、受试化合物梯度剂量组(5个剂量,具体根 据预实验情况确定)。每只动物于实验前一天放入隔音箱适应 30min, 第二天给予受试物后 30分钟,用浓度为 0.04 mg/mL的 MK-801溶液,按 10.0 mL/kg小鼠体重进行腹腔注射诱导建立小鼠精神分裂症实验模型, 空白对照组和模型对照组腹腔注射同体积受试物溶媒。

(2) 旷场跑动行为学观察

小鼠给予 MK-801后,立即放入隔音箱,观察记录 60分钟内小鼠 自主活动的总路程。

改善率 = (模型对照组活动总路程给药组活动总路程) I (模型对 照组活动总路程) * 100%

ED5Q根据上述公式,作回归方程,计算得到。

(3) 统计方法

全部数据以 ±SD表示,用 SPSS17.0软件统计包处理,进行两个样 本均数比较的 t检验及单因素方差分析,以 PO.05为显著性差异。

(4)实验结果

具体结果见表 9与表 10

表 9 单次口服给予 I-l对 MK-801诱导小鼠精神分裂症模型旷场运 动总路程的影响 ( ±SD )

动物数 剂量 自主活动总路程

改善率(%) (只) (mg/kg) (cm)

正常对照组 12 - 8580.12 ± 3069.84

模型对照组 12 - 25256.73土 7129.47**

利培酮组 12 0.30 3028.00土 825.3 1 88.01 阿立哌唑组 12 0.30 2975.00±814.25 88.22

1- 1 组 12 0.07 27887.03±9385.58 - 10.41

1-1组 12 0.10 2021 1.47土 9785.36 19.98

1-1组 12 0.14 16632.34土 7646.37 # 34.15

1-1组 12 0.20 9730.62土 1865.34 ## 61.47

1-1组 12 0.28 7951.01±3339.76## 68.52 与正常对照组比较: P<0.05, P<0.01 ; 与模型对照组比较:

P<0.05 , 冊 P<0

表 10单次口服给药对 MK-801诱导小鼠精神分裂症模型旷场运动 总路程的影响 ED50


实施例 24

本发明中所述六个化合物引起小鼠共济失调试验 ED2Q

1、抗精神分裂药物导致的小鼠共济失调实验模型建立

雄性 C57 BL/6小鼠 110只,每组 10只,共 11组,空白对照组、 利培酮组 (1.0, 1.25, 1.56, 1.95,2.44mg/Kg)、受试物梯度剂量组(五个剂 量组,具体剂量根据预实验结果确定),口服灌药 0.5h后观察小鼠共 济失调情况,空白对照组灌服同体积受试物溶媒。

2、共济失调行为观察

对小鼠录像采用盲法评定。共济失调行为程度评分标准:0 =正常, 1 =身体略有摇晃、后肢未伸出或略有伸出, 2 =身体摇晃明显、后肢 伸出明显或后肢略有拖地走, 3 =后肢伸出明显、后肢无力拖地走, 4 =小鼠呆在一个地方基本不能动、身体 (头和后肢)颤抖, 5=小鼠完全静 止不动

3、统计方法

全部数据以 ±SD表示,用 SPSS 17.0软件统计包处理,进行两个 样本均数比较的 t检验及单因素方差分析,以 PO.05为显著性差异。用 曲线下面积 (AUC) 对小鼠的共济失调行为进行评价:

共 济 失调 行为 ED2Q 计算 按照 公 式: 失调率 =空白对 给纖 X 100O/O,作回归方程,计算得到。

4、实验结果

表 11 单次口服给予本发明化合物导致小鼠共济失调 ED

化合物 ED20(mg/Kg)

利培酮 1.58

1-1 3.87

1-2 3.95

1-3 3.56

1-4 3.43

(R)- 1-1 4.05

(S)- 1-1 3.93

(Π-1) 1.50

实施例 25

小鼠药代动力学试验

取 ICR小鼠 70只,随机分为 7组,每组 10只。将权利要求所述 六个化合物及化合物 Π-1 进行小鼠灌胃给药,每个化合物对应一组, 即 10只动物,剂量均为 2mg/Kg,进行药代动力学实验,结果如下:

血浆主要药代动力学参数


脑脊液主要药代动力学参数


结果表明:本发明所述六个化合物在吸收、血脑屏障透过率方面 远优于化合物 π-ΐ。

实施例 26

本发明书中所述六个化合物的急性毒性研究

用 Bliss法统计,小鼠分别单次灌服本发明所述六个化合物 LD5() 均大于 1500mg/kg,其 LD5Q数值远大于药效剂量 (ED5Q)的 20倍,属于 高度安全的化合物。

实施例 27

本发明中所述六个化合物的细菌回复突变试验

菌种:鼠沙门氏菌组氨酸营养缺陷突变株 TA97, TA98, TA1(K)和 TA102

结果:实验包括 -s«^n + s9两个部分,在无 S9测试系统中丁 98和 加 S9测试系统中 ΤΑ97 5000μ§/皿有抑菌作用。其它剂量对所有菌株均 无抑菌作用,生长背景良好。所有测试剂量无论在无 S9或加 S9实验系 统中,均未引起任何菌落回变数明显增加, Ames试验阴性。