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1. (WO2012113954) NOVEL METHOD FOR IN VITRO MUTAGENESIS AND CLONING BY MEANS OF REVERSE PCR FOR CLONING
Latest bibliographic data on file with the International Bureau   

Pub. No.:    WO/2012/113954    International Application No.:    PCT/ES2012/070096
Publication Date: 30.08.2012 International Filing Date: 21.02.2012
IPC:
C12Q 1/68 (2006.01)
Applicants: UNIVERSIDADE DE SANTIAGO DE COMPOSTELA [ES/ES]; Centro de Innovación e Transferencia de Tecnoloxía Edificio Emprendia Campus Sur E-15782 Santiago de Compostela (A Coruña) (ES) (For All Designated States Except US).
DOMÍNGUEZ GERPE, María Lourdes [ES/ES]; (ES) (For US Only).
FERRO GALLEGO, Pedro Emilio [ES/ES]; (ES) (For US Only)
Inventors: DOMÍNGUEZ GERPE, María Lourdes; (ES).
FERRO GALLEGO, Pedro Emilio; (ES)
Agent: PONS ARIÑO, Ángel; Glorieta de Rubén Darío, 4 E-28010 Madrid (ES)
Priority Data:
P201130222 21.02.2011 ES
Title (EN) NOVEL METHOD FOR IN VITRO MUTAGENESIS AND CLONING BY MEANS OF REVERSE PCR FOR CLONING
(ES) NUEVO MÉTODO DE CLONACIÓN Y MUTAGÉNESIS IN VITRO MEDIANTE PCR INVERSA DE CLONACIÓN
(FR) NOUVEAU PROCÉDÉ DE CLONAGE ET DE MUTAGÉNÈSE IN VITRO PAR PCR INVERSE DE CLONAGE
Abstract: front page image
(EN)The invention relates to a novel method for directed cloning or for directed simultaneous cloning and mutagenesis, comprising: a first classic PCR with primers having a sequence that hybridises partially with the insert and partially with the desired vector and can contain mutations; and a second reverse PCR for cloning, which directly uses the amplicons generated during the classic PCR, generating new double-stranded amplicons having complementary long cohesive ends that circularise in situ in the form of vector-type genetic structures, which already contain the DNA fragment cloned in the desired vector directly. The invention also relates to a kit comprising the instructions for carrying out said method and to the use of the kit for directed cloning or for directed simultaneous cloning and mutagenesis.
(ES)La presente invención se refiere a un nuevo método de clonación dirigida o de clonación y mutagénesis dirigidas y simultáneas que comprende una primera PCR clásica con unos cebadores cuya secuencia híbrida en parte con el inserto y en parte con el vector deseado y puede contener mutaciones, y una segunda PCR inversa de clonación que usa directamente los amplicones generados en la PCR clásica generando nuevos amplicones bicatenarios de largos extremos cohesivos complementarios que circularizan in situ en forma de construcciones génicas estables tipo vector, que ya contienen el fragmento de ADN clonado en el vector deseado directamente. La presente invención se refiere también a un kit que comprende las instrucciones para llevar a cabo dicho método y al uso del kit para la clonación dirigida o la clonación y mutagénesis dirigidas y simultáneas.
(FR)La présente invention concerne un nouveau procédé de clonage dirigé ou de clonage et mutagénèse dirigés et simultanés dans lequel est effectuée une première PCR classique avec des amorces dont la séquence s'hybride en partie avec l'insert et en partie avec le vecteur désiré et peut contenir des mutations, et une deuxième PCR inverse de clonage qui utilise directement les amplicons générés dans la PCR classique produisant des nouveaux amplicons bicaténaires à longues extrémités cohésives complémentaires qui circularisent in situ sous forme de constructions géniques stables de type vecteur, contenant le fragment d'ADN cloné dans le vecteur désiré directement. La présente invention concerne également un kit qui comprend les instructions pour mettre en oeuvre ledit procédé et l'utilisation dudit kit pour le clonage dirigé ou le clonage et la mutagénèse dirigés et simultanés.
Designated States: AE, AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BH, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CL, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DK, DM, DO, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, GT, HN, HR, HU, ID, IL, IN, IS, JP, KE, KG, KM, KN, KP, KR, KZ, LA, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LY, MA, MD, ME, MG, MK, MN, MW, MX, MY, MZ, NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PE, PG, PH, PL, PT, QA, RO, RS, RU, RW, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, ST, SV, SY, TH, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, ZA, ZM, ZW.
African Regional Intellectual Property Organization (BW, GH, GM, KE, LR, LS, MW, MZ, NA, RW, SD, SL, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
Eurasian Patent Organization (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM)
European Patent Office (AL, AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HR, HU, IE, IS, IT, LT, LU, LV, MC, MK, MT, NL, NO, PL, PT, RO, RS, SE, SI, SK, SM, TR)
African Intellectual Property Organization (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Publication Language: Spanish (ES)
Filing Language: Spanish (ES)