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1. WO2012058866 - BENZAMIDE DERIVATIVE WITH ANTICANCER ACTIVITY AND PREPARATION METHOD AND USE THEREOF

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[ ZH ]
具有抗癌活性的苯甲酰胺衍生物及其制备方法和用途 发明领域

本发明涉及具有抗癌活性的苯甲酰胺衍生物及其代谢物。本发明也涉及这类抗 癌药物的合成以及使用这类化合物治疗癌症的方法。

发明背景 说

癌症无疑是一种难以治疗并且威胁生命的疾病,也是世界范围内常见的疾病, 因此是一个严重的全球性的健康问题。在美国,在 85岁以下的美国人中,死于癌症 的占居首位;而在更老的美国人中,癌症也是第二书大死因。据统计,在美国每天大 约有 1500人死于癌症,而且每天大约有 3400个新的癌症病例;而在中国,每年大 约有 180万人死于癌症,而且每年大约有 260万个新的癌症病例,癌症已经成为中 国人的第一大死因。

癌症是一种起始于身体细胞的疾病,它是一种恶性肿瘤。这种肿瘤细胞极不正 常,进行随机而紊乱的分裂,因此其生长和增值完全失控。癌细胞攻击性很强,它 们进攻并损坏周围的组织。它们还可以离开原来的肿瘤而进入血液或淋巴系统,从 而在身体别的部分形成新的肿瘤。

虽然市场上已经有很多抗癌药物,但要想有效地治疗癌症,任务依然十分艰巨, 因此继续研发活性更高而且毒副作用更小的抗癌药物仍然是当务之急。有趣的是, 卤代硝基和亚硝基雌激素化合物可用于治疗癌症,尤其是乳腺癌;更有趣的是,结 构简单的芳香卤代硝基和亚硝基化合物也被发现具有很高的抗肿瘤活性,尤其针对 乳腺癌(Kun et al. US 5464871 )。这一类化合物是多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP) 抑制剂,而这种酶参与 DNA损坏后的修复。因此,抑制多聚(ADP-核糖)聚合酶 就可以抑制 DNA的修复,从而增强放疗和化疗对癌症的治疗效果(Ossovskaya et al. US 20090149397; Sherman et al. US 20090131529 and 20090123419)。实际上,芳香 硝基化合物在体内先转化成芳香亚硝基化合物,而后者才是抑制肿瘤生长的活性化 合物。由于芳香亚硝基化合物在生理 pH值的水溶性相对较差,稳定性又有限,因 此难以预见这些化合物是否能到达癌细胞,而芳香硝基化合物则没有这些问题,所

以它们是芳香亚硝基化合物理想的前药。在这类芳香硝基化合物之中, 4-碘 -3-硝基 苯甲酰胺(INBA, 代号 BSI-201 ) 是一个非常有希望的抗癌药物。目前,该化合物 已进入三期临床, 正在进一步评估它与其它抗肿瘤药物合用的抗癌效果,所治疗的 癌症是:已扩散了的,呈三重阴性的乳腺癌(mT BC) 。

由于有机碘代物对光和空气都很敏感,水溶性又较差,因此研发出活性更高, 水溶性更好,不含碘的抗癌药物正是所期盼的。本发明提供新的具有抗癌活性的苯 甲酰胺衍生物,这是一类不含碘的,比 INBA (BSI-201 ) 更有效的抗癌药物。

发明内容

本发明的目的之一在于公开了一类新的抗癌药物——苯甲酰胺衍生物或其药学 上适用的盐。

本发明所述的化合物可用式(I ) 表示:


R1和 R2独立地选自以下基团:氢、取代或未取代的(C「C8)烷基、取代或未 取代的(C3- C8) 烯基、取代或未取代的(C3-C8) 炔基、取代或未取代的(C3 - C7) 环垸基、 -COR5和 -C02R6; R1和 R2也可以环合起来形成取代或未取代的四、五或 六元环;

R3是硝基或亚硝基;

R4选自以下基团:乙炔基、丙炔基或氰基;

R5选自以下基团:取代或未取代的(C「C8) 烷基、取代或未取代的(C3~C8) 烯基、取代或未取代的(C3-C8) 炔基、取代或未取代的(C3 - C7) 环垸基、取代或 未取代的芳基;

R6选自以下基团:取代或未取代的(d- C8) 烷基、取代或未取代的(C3-C8) 烯基、取代或未取代的(C3-C8) 炔基、取代或未取代的(C3-C7) 环烷基;

其中上述的取代或未取代的(C3- C8) 烯基、取代或未取代的(C3-C8) 炔基优 选的是烯基的双键及炔基的三键不与酰胺 N、羰基或羰氧基直接相连。

或者其药学上可以接受的盐,或其前药。

本说明书所述的 "取代" ,如无特别指出,均是指可被选自以下的基团取代: 羟基、(d- )烷基、(C2~C8)烯基、(C2- C8)炔基、(C3- C7)环垸基、( - C8) 垸氧基、氨基、(Cr~ C8) 垸基氨基、二(d~C8) 垸基氨基、(d- C8) 垸基硫基、 卤素,优选羟基、甲氧基、氨基、甲胺基、二甲胺基、甲硫基和卤素。

其中上述 R1和 R2优选自氢、取代或未取代的(CH38)垸基、 -COR5或 -C02R6, R1和 R2也可以环合起来形成取代或未取代的四、五或六元环,其中 R5为取代或未 取代的(d-Cs) 烷基、取代或未取代的(C3 - C8) 烯基、取代或未取代的(C3-C8) 炔基、取代或未取代的(C3~C7) 环烷基、取代或未取代的芳基; R6为取代或未取 代的(C「C8) 垸基、取代或未取代的(C3~C8) 烯基、取代或未取代的(C3 - C8) 炔基、取代或未取代的(C3-C7) 环垸基;其中上述的取代或未取代的(C3 - C8) 烯 基、取代或未取代的(C3 - C8) 炔基优选的是烯基的双键及炔基的三键不与酰胺 N、 羰基或羰氧基直接相连。

•更优选的是, R1和 R2独立地选自氢、取代或未取代的(d-C8) 垸基、 -COR5 或 -C02R6, R1和 R2也可以环合起来形成取代或未取代的四、五或六元环,其中 R5 为取代或未取代的(C「C8) 垸基、取代或未取代的(C3-C7) 环烷基、取代或未取 代的芳基; R6为取代或未取代的 烷基、取代或未取代的(C3-C7)环垸基。

最优选的是, R1和 R2独立地选自氢、甲基、乙基、丙基、 -COR5或 -C02R6、 R1和 R2也可以环合起来形成取代或未取代的五或六元环,且所形成环的原子中可 以含有一个或多个杂原子,杂原子为氮、氧或硫原子,优选氮原子; R1和 R2环合 起来形成取代或未取代的含有一个或多个杂原子形成的五或六元环,优选吡咯垸环、 哌啶环、吗啉环、哌嗪环。

其中上述 R5优选取代或未取代的(d-Cs) 烧基、取代或未取代的芳基,最优 选为甲基、苯基。

其中 R6优选取代或未取代的(d- C8) 垸基,更优选为甲基、乙基、丙基、异 丙基、正丁基或异丁基,最优选为甲基、乙基。

其中 R3优选硝基或亚硝基,更优选硝基。

其中 R4优选乙炔基、丙炔基、氰基,更优选为乙炔基、氰基。

更具体地说,其中所述的化合物式(I) 选自:

4一乙炔基一 3—硝基苯甲酰胺(1-1 )

N—甲氧羰基一 4一乙炔基一 3—硝基苯甲酰胺(1-2)

N—乙氧羰基一 4一乙炔基一 3—硝基苯甲酰胺(1-3)

N—丙氧碳基一 4一乙炔基一 3—硝基苯甲酰胺

N—丁氧羰基一 4一乙炔基一 3—硝基苯甲酰胺(1-5)

N—异丙氧羰基一 4一乙炔基一 3—硝基苯甲酰胺(1~6)

N—异丁氧羰基一 4一乙炔基一 3—硝基苯甲酰胺(I - 7)

4一氰基一 3—硝基苯甲酰胺(I - 8)

N—甲基一 4一乙炔基一 3—硝基苯甲酰胺(I - 9)

N, N—二甲基一 4—乙炔基一3—硝基苯甲酰胺(1-10)

N—乙酰基一 4一乙炔基一 3—硝基苯甲酰胺(1-11 )

4一(1一丙炔基)一 3—硝基苯甲酰胺(I - 12)

N—苯甲酰基一 4一乙炔基一 3—硝基苯甲酰胺(1-13)

N, N—二乙基一 4一乙炔基一 3—硝基苯甲酰胺(1-14)

N, N—二丙基— 4—乙炔基一 3—硝基苯甲酰胺(1-15)

N, N—二丁基一4一乙炔基一 3—硝基苯甲酰胺(1-16)

N—乙基一4一乙炔基一 3—硝基苯甲酰胺(1-17)

N—丙基一 4一乙炔基一 3—硝基苯甲酰胺(1-18)

N—丁基一 4一乙炔基一 3—硝基苯甲酰胺(I - 19)

(4一乙炔基一 3—硝基苯基)(吡咯烷一 1—基)甲酮(I - 20)

(4一乙炔基一 3—硝基苯基)(哌啶一 1一基)甲酮(1-21 )

(4一乙块基一 3—硝基苯基)(吗啉一 4一基)甲酮(1-22)

(4一乙炔基一 3—硝基苯基)(哌嗪一 1一基)甲酮(1-23)

(4一乙炔基一 3—硝基苯基)(4一甲基哌嗪一 1一基)甲酮(I - 24) (4一乙炔基一 3—硝基苯基)(氮杂环丁酮一 1一基)甲酮(I - 25)

N—甲基一 4一(1—丙炔基)一 3—硝基苯甲酰胺(I - 26)

N—甲基一 4一氰基一 3—硝基笨甲酰胺(1-27)

4一乙炔基一 3—亚硝基苯甲酰胺(1-28)

(4一乙炔基一 3—硝基苯基)(4一甲基哌嗪一 1一基)甲酮盐酸盐(1-29) (4—乙炔基一 3—硝基苯基)(哌嗪一 1一基)甲酮盐酸盐(1-30)。

本发明的第二方面还公开了通式(I)化合物及其药物组合物在制备用于治疗癌 症的药物中的应用。所述癌症包括结肠癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、胃癌、急性白 血病、慢性白血病、前列腺癌、人子宫癌、胰腺癌、肝癌、脑癌、 CNS肿瘤、膀胱 癌、肾癌、皮肤癌、颈癌、肌肉瘤、淋巴癌、骨癌以及其它类型的癌症。同时还公 开了通式(I) 所表示的化合物及药物组合物在制备治疗细胞增殖和 /或血管新生的 破坏所导致、关联或伴随的病症的药物中的应用。

本发明的又一方面在于公开了通式(I) 化合物在制备用于治疗与多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP) 抑制剂相关的疾病的药物中的应用。与多聚(ADP-核糖) 聚合酶(PARP)抑制剂相关的疾病包括癌症、中风( Stroke)、心肌梗死(Myocardial infarction). 神经变性疾病(Neuodegenerative diseases)等。本发明再一方面提供了 使用有效量的通式(I) 所表示的化合物或含有通式(I)所表示的化合物的药物组 合物单独或者与其它药物联合使用进行治疗由细胞增殖和 /或血管新生的破坏所导 致、关联或伴随的病症的方法。本发明药物组合物中还可以包含与式(I)化合物相 容的药学上适用载体。式(I)化合物可以用一般的剂型给药,如注射剂型和口服剂 型,包括胶囊剂、片剂、粉剂、扁囊剂、混悬液剂或溶液剂,优选以注射的方式给 药。剂型和药用组合物可以用常用的药学上适用的赋形剂和添加剂以及常用的技术 制得。所述药学上适用的赋形剂和添加剂包括无毒性的可配伍的填充剂、粘合剂、 崩解剂、缓冲剂、防腐剂、抗氧化剂、润滑剂、矫味剂、增稠剂、着色剂、乳化剂 等。 '

本发明的另一方面在于公开所述苯甲酰胺衍生物的制备方法。

本发明的又一目的在于提供了一种制备化合物式(I) 的方法(如下反应式 1 所示)。该方法适用于式(I) 化合物中 I 1、 R2为氢, R3为硝基, R4为乙炔基、丙 炔基或氰基时的情况,如用于制备化合物 1-1、化合物 1-8和化合物 I - 12。


II

R1 = 2 = H, 3 = N02, R4为氰基 反应式 1

本发明的又一目的在于提供了以化合物 IX为原料制备化合物式(I)的方法(如 下反应式 2所示)。该方法适用于式(I) 化合物中 R1为氢、 R2为 -COR5或 -C02R6; R3为硝基, R4为乙炔基、丙炔基或氰基, R5和 R6如前述定义时的情况,如用于制 备化合物 1-2、化合物 1-3、化合物 1~ 、化合物 1-5、化合物 1~6、化合物 1-7、化 合物 1-11和化合物 I - 13。

R1为 H,R2为 -C02R6

R1为 H , R2为 -COR5


反应式 .2

本发明的再一目的在于提供了一种制备化合物式(I) 的方法(如下反应式 3 所示)。该方法适用于式(I)化合物中或 R2为氢、取代或未取代的(C「C8)烷 基、取代或未取代的(C3 - ) 烯基、取代或未取代的(C3-C8) 炔基、取代或未取 代的(C3 - C7)环垸基, R1和 R2也可以环合起来形成取代或未取代的四、五或六元 环,但 R1 , R2不能同时为氢; R3为硝基, R4为乙炔基、丙炔基或氰基时的情况, 如用于制备化合物 1-9、化合物 1-10、化合物 1-14、化合物 1-15、化合物 1-16、化 合物 1-17、化合物 1-18、化合物 1-19、化合物 1-20、化合物 1-21、化合物 I - 22、 化合物 1-23、化合物 1-24、化合物 1-25、化合物 1-26和化合物 I - 27。


反应式 3

本发明的再一目的在于提供了一种制备化合物式(I) 的方法(如下反应式 4 所示)。该方法适用于式(I)化合物中 R1和 R2为氢、取代或未取代的(CH^)烷 基、取代或未取代的(C3-C8) 烯基、取代或未取代的(C3-C8) 炔基、取代或未取 代的(C3 - C7) 环垸基、 -COR5和 -C02R6; R1和 R2也可以环合起来形成取代或未取 代的四、五或六元环; R3为亚硝基; R4为乙炔基、丙炔基或氰基; R5为取代或未 取代的(d-C8) 烷基、取代或未取代的(C3-C8) 烯基、取代或未取代的(C3 - C8) 炔基、取代或未取代的(C3~C7) 环垸基、取代或未取代的芳基; R6为取代或未取 代的(C「C8) 烷基、取代或未取代的(C3^C8) 烯基、取代或未取代的(C3 - C8) 炔基、取代或未取代的(C3-C7) 环烷基时的情况,如用于制备化合物 I - 28。

α、 2

、R3


R3为亚硝基

反应式 4

本发明还提供了一种化合物式(I)与酸成盐的方法:将本发明的化合物式(I) 与相应的酸(例如盐酸、硫酸等)充分混合,经过后处理,得到相应的盐,如制备 化合物 1-29和 I - 30。

本发明所使用的部分术语定义如下:

"卤素"是指氟、氯、溴和碘,优选氯、溴和碘。

"垸基" 当作一基团或一基团的一部分时是指直链或者带有支链的脂肪烃基 团。优先选择为 d-C8的烷基。烷基基团的例子包括但不限于甲基、乙基、正丙基、 2-丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、己基等。

"烯基" 作为一基团或一基团的一部分时是指含有一个碳碳双键的脂肪烃基 团,可为直链也可以带有支链。优先选择的是 8的烯基。烯基基团的例子包括, 但不限于烯丙基、 2-丁烯基等。

"炔基" 作为一基团或一基团的一部分时是指含有一个碳碳三键的脂肪烃基 团,可为直链也可以带有支链。优先选择的是 C3-C8的炔基。炔基基团的例子包括, 但不限于炔丙基、 2-丁炔基等。

"杂环基"是指芳香性或非芳香性杂环基,其中一个或多个成环的原子是杂原 子,如氧、氮、硫原子等。芳香性杂环基即通常所说的 "杂芳基",优先指芳族 5至 6元单环或 9至 10元双环,其可以包含 1, 2或 3个选自氮、氧和 /或硫中的原子, 如呋喃基,吡啶基, 2-氧代 -1, 2-二氢吡啶基,哒嗪基,嘧啶基,吡嗪基,噻吩基, 异噁唑基,噁唑基,噁二唑基,咪唑基,吡咯基,吡唑基,三唑基,四唑基,噻挫 基,异噻唑基, 1, 2, 3-噻二唑基,苯并间二氧杂环戊烯基,苯并咪唑基,吲哚基, 异吲哚基, 1, 3-二氧代 -异吲哚基,喹啉基,吲唑基,苯并异噻唑基,苯并噁唑基 和苯并异噁唑基。优选的杂芳基是吡啶基。杂芳基可以具有上面关于术语 "芳基" 所述的取代基。非芳香性杂环基是指非芳香性的杂环基团,优选具有 5至 6元单环 或 8至 10元双-或三环,其可以包含 1, 2或 3个选自氮、氧和 /或硫中的原子,如 吗啉基,硫代吗啉基,四氢吡喃基, 1, 1-二氧代-硫代吗啉基,哌啶基, 2-氧代-哌 啶基,吡咯烷基, 2-氧代 -吡咯烷基,哌嗪- 2-酮, 8-氧杂 -3-氮杂-双环 [3.2.1]辛基和哌 嗪基。杂环基可以任选具有上面关于术语 "芳基"所述的取代基。

此外,术语 "药学上可接受的盐"是指上述化合物能保持原有生物活性并且适 合于医药用途的某些盐类。式(I )所表示的化合物的药学上可接受的盐可以为金属 盐、与合适的酸形成的胺盐,金属盐优选碱金属、碱土金属盐,合适的酸包括无机 酸和有机酸,例如乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、 葡糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、苹果酸、马来酸、扁桃酸、甲 磺酸、硝酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸等。特别优选的是盐酸、 氢溴酸、瞵酸和硫酸,最优选的是盐酸盐。

"环烷基"是指饱和或部分饱和的单环、稠环或螺环之碳环。以 3-7个碳原子 组成的环为优先选择。实例包括,但不限于:环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。

"垸氧基"是指(烷基 -0-) 的基团。其中,烷基见本文有关定义。 CRC6的垸 氧基为优先选择。其实例包括,但不限于:甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、 正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基等。

术语"芳基",单独或者组合使用时,是指含有一个或者两个环的碳环芳香系统, 其中所述环可以以稠合的方式连接在一起。术语 "芳基"包括比如苯基、萘基、四 氢萘基的芳香基团。优选芳基为 C6-CK)芳基,更优选芳基为苯基。所述 "芳基"可 以带有一个或者多个取代基,比如 d- 垸基、羟基、卤素、卤代垸基、硝基、氰 基、 CRC6烷氧基、 CRC6垸基氨基等等。

我们已经发现,本发明化合物是高活性的肿瘤生长抑制剂。

下面通过实施例进一步阐明本发明。实施例给出了式(I )所表示的代表性化合 物的制备及相关结构鉴定数据。必须说明,下述实施例是用于说明本发明而不是对 本发明的限制。

在下列实例中,除非另有指明,所有温度为摄氏温度,除非另有指明,各种起 始原料和试剂均来自市售。市售原料和试剂均不经进一步纯化直接使用,除非另有

指明。

玻璃器皿用烘箱干燥和 /或加热干燥。反应用玻璃硅胶- 60 F254平板(0.25 mm) ( TLC ) 上进行跟踪。分析性薄层层析并以适当的溶剂比例(Wv) 加以展开。以 TLC上起始物质耗尽时为反应终点。

1H NMR图谱是用 Bruker仪器(400MHz) 测定而得,化学位移用 ppm表示。 使用四甲基硅烷内标准(0.00ppm)。 1H NMR的表示方法: s=单峰, d=双重峰, t= 三重峰, m=多重峰, 1?1=变宽的, dd=双重峰的双重峰, dt=三重峰的双重峰。若提 供偶合常数时,其单位为 Hz。

质谱是用 LC/MS仪测定得到,离子化方式可为 ESI或 APCI。

所有熔点均未经修正。

下面的实例仅仅是用来说明所发明的具体化合物的合成方法。但在合成方法上 并没有任何限制。在下面未列出的化合物, 也可以用与下面同样的合成路线与合成 方法,选择适当的起始原材料、在有必要的地方稍加适当的常识性的反应条件调整 即可加以制备。

具体实施方案

实施例 1 : 4一碘一 3—硝基苯甲酸(化合物 V) 的制备:


在反应瓶中加入 45克(0.25摩尔) 4一氨基一 3—硝基苯甲酸, 400毫升水和 100 毫升浓盐酸。开启搅拌,将混合液降温至 0~5°C,滴加 25.9克(0.38摩尔)亚硝酸 钠的水溶液 50毫升,固体逐渐溶解,滴毕后于 0〜5°C反应 1小时,并于该温度下滴 加含 88克(0.5摩尔)碘化钾的水溶液 200毫升,滴毕后室温搅拌 2 h,析出固体。 过滤,水洗,烘干得固体 4一碘一 3—硝基苯甲酸(化合物 V) 65克(0.22摩尔), 收率 89.7%。

实施例 2: 4—碘一 3—硝基苯甲酸甲酯(化合物 IV) 的制备:


Ο,Ν v 、coOMe

在反应瓶中加入 55克(0.19摩尔) 4一碘一 3—硝基苯甲酸(化合物 V), 16.5 克(0.12摩尔)碳酸钾和 550毫升乙腈,开启搅拌,降温至 0〜5°C , 加入 52.9毫升

(0.38摩尔)三乙胺,控制温度在 1CTC以下,加入 71毫升(1.12摩尔)碘甲垸, 加热至 40°C左右反应 8小时,反应完毕后,减压浓缩蒸去大部分乙腈。然后用 500 毫升乙酸乙酯萃取,水洗涤三次,有机层用无水硫酸钠干燥,过滤,滤液浓缩至少 量,再加入 300毫升石油醚,搅拌 30 min后过滤,石油醚洗涤滤饼,烘干得 4一碘 —3—硝基苯甲酸甲酯(化合物 IV) 约 41.2克(0.13摩尔),收率 71.5%。 1H MR

(400 MHz, DMSO-i 6): δ 3.91 (s, 3 H), 7.87 (dd, 1 H, Ji = 8.08 Hz, J2 = 1.88 Hz), 8.26 (d, 1 H, J= 8.12 Hz), 8.34 (d, 1 H, J= 9.12 Hz); MS (m/z): 308 [M+H]。

实施例 3: 4—(2—三甲基硅基)乙炔基一 3—硝基苯甲酸甲酯(化合物 III) 的制备:


在反应瓶中加入 25克(0.08摩尔) 4一碘一 3—硝基苯甲酸甲酯(化合物 IV), 20毫升(0.14摩尔)三乙胺和 200毫升四氢呋喃,氮气保护,搅拌溶解,然后加入 2.4克(0.0034摩尔)双(三苯基磷)二氯化钯, 0.65克(0.0034摩尔)碘化亚铜和 13.7毫升(0.096摩尔)三甲基硅乙炔,室温反应 1小时,减压浓缩蒸去大部分四氢 呋喃,加入 300毫升乙酸乙酯萃取,有机层用水洗涤三次,有机层用无水硫酸钠干 燥,过滤,滤液浓缩至干,柱层析分离得 4— (2—三甲基硅基)乙炔基一 3—硝基 苯甲酸甲酯 (化合物 III) 15.1克(0.055摩尔),收率 66.9%。 1HNMR (400 MHz, DMS0-4): δ 0.09 (s, 9 H), 3.74 (s, 3 H), 7.69 (d, 1 H, J= 8.08 Hz), 8.00 (dd, 1H, J = 8.08 Hz, J2 = 1.52 Hz), 8.30 (d, 1 H, J= 1.36 Hz); MS (m/z): 278 [M+H]。

实施例 4: 4一乙炔基一 3—硝基苯甲酸甲酯(化合物 II - 1 ) 的制备:


在反应瓶中加入 15克(0.054摩尔) 4一(2—三甲基硅基)乙炔基一 3—硝基苯 甲酸甲酯(化合物 III) 和 225毫升四氢呋喃,开启搅拌,降温至 -20〜- 25t),然后 滴加含 7.1克(0.027摩尔)四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液 35毫升,滴毕后继续反 应 20 min。 TLC检测反应完毕后,加入 0.5 M盐酸调 PH至 4~5。减压浓缩蒸去大 部分四氢呋喃,然后用 300毫升乙酸乙酯萃取,有机层用水洗涤三次,有机层用无 水硫酸钠干燥,过滤,滤液浓缩至干,得到粗产物约 10.5克,柱层析分离得到 4一 乙炔基一 3—硝基苯甲酸甲酯(化合物 11-1 )7.3克(0.036摩尔),收率 65.8%。 1HNMR (400 MHz, DMSO-i¾): δ 3.93 (s, 3 H), 5.02 (s, 1 H), 7.93 (d, 1H, J= 8.08 Hz), 8.21 (dd, 1 H, J! = 8.08 Hz, J2 = 1.64 Hz), 8.50 (d, 1 H, J= 1.48 Hz); MS (m/z): 206 [M+H]。

实施例 5: 4—乙炔基一 3—硝基苯甲酰胺(化合物 1-1 ) 的制备-


Π-1 1-1

在反应瓶中加入 7.3克(0.036摩尔) 4一乙炔基一 3—硝基苯甲酸甲酯(化合物 11-1 ), 300毫升甲醇和 200毫升四氢呋喃,搅拌,通氨气 1小时。然后室温反应 24 小时, TLC 检测反应完毕,减压浓缩蒸去大部分四氢呋喃及甲醇,然后用 300 ml 乙酸乙酯萃取,有机层用水洗涤三次,有机层用无水硫酸钠干燥,过滤,滤液浓縮 至干,柱层析分离得到 4一乙炔基一 3—硝基苯甲酰胺(化合物 1-1 ) 3.6克(0.0019 摩尔),收率 53.2%。 'HNMR (400 MHz, DMSO-i/6): δ 4.93 (s, 1 Η), 7.82 (s, 1 Η), 7.92 (d, 1 Η, J= 8.08 Hz), 8.21 (dd, 1 H, J! = 8.04 Hz, J2 = 1.68 Hz), 8.37 (s, 1 H), 8.57 (d, 1 H, J= 1.56 Hz); MS (m/z): 191 [M+H]。

实施例 6: N—甲氧羰基一 4一乙炔基一 3—硝基苯甲酰胺(化合物 I - 2) 的制备


在 100毫升四口反应瓶中,加入 3克(0.016摩尔) 4一乙炔基一 3—硝基苯甲酰 胺(化合物 I - 1 ), 45毫升四氢呋喃和 6毫升氯甲酸甲酯,搅拌溶解,降温至 -10°C, 加入 7.5克氢化钠,保持在 0°C左右反应 30分钟,反应完毕后,将反应液倒入碎冰 中,用盐酸调 PH至酸性,然后用 200毫升乙酸乙酯萃取,有机层用水洗涤三次, 有机层用无水硫酸钠干燥,过滤,滤液浓缩至干,得到粗产物约 3.5克,柱层析分 离得到 N—甲氧羰基一 4一乙炔基一 3—硝基苯甲酰胺(化合物 I - 2) 1.6克(0.0065 摩尔),收率 40.8%。 1HNMR (400 MHz, DMS0- 6): δ 3.76 (s, 3 H), 4.98 (s, 1 H), 7.91 (d, 1 H, J= 8.08 Hz), 8.18 (dd, 1 H, J, = 8.08 Hz, J2 = 1.80 Hz), 8.58 (d, 1 H, J- 1.72 Hz), 11.36 (s, 1 H); MS (m/z): 249 [M+H]。

以化合物 I-l为原料,选用合适的试剂,按实施例 6方法制备以下化合物:



实施例 12: 4—氰基一 3—硝基苯甲酸甲酯(化合物 II-8) 的制备:


在反应瓶中加入 5克(0.016摩尔) 4一碘一 3—硝基苯甲酸甲酯(化合物 IV - 1 ), 1.77克(0.02摩尔)氰化亚铜和 15毫升六甲基磷酰三胺,加热至 100°C反应 1小时, 反应完毕,冷却至室温,然后用 100毫升乙酸乙酯萃取,有机层用水洗涤三次,无 水硫酸钠干燥,过滤,将滤液浓缩至千,柱层析分离得到 4一氰基一 3—硝基苯甲酸 甲酯(化合物 11—8) 2.7克(0.013摩尔),收率 80.4%。 1HNMR(400 MHz, DMSO- ): δ 3.96 (s, 3 Η), 8.34 (d, 1 H, J = 7.9 Hz), 8.42 (d, 1 H, J = 7.7 Hz), 8.68 ( s, 1 H) ; MS (m/z): 229 [M+Na]。

实施例 13: 4—氰基一 3—硝基苯甲酰胺(化合物 1-8) 的制备-


在反应瓶中加入 2克 (9.71毫摩尔 )4一氰基一 3—硝基苯甲酸甲酯 (化合物 H - 8) 和 60毫升甲醇,搅拌,通氨气 1小时,然后室温反应 8小时,待反应完毕,减压浓 缩蒸去大部分甲醇,然后用 100毫升乙酸乙酯萃取,有机层用水洗涤三次,无水硫 酸钠干燥,过滤,将滤液浓缩至干,得粗产物 1.1克(5.76毫摩尔),以乙酸乙酯正 己垸重结晶得 4一氰基—3—硝基苯甲酰胺(化合物 1-8)0.6克,收率 32,6%。 1HNMR (400 MHz, DMSO-i 6): θ 7.97 (s, 1 H), 8.32 (d, 1 H, J= 7.96 Hz), 8.39 (dd, 1 H, Ji = 7.96 Hz, J2 = 1.56 Hz), 8.53 (s, 1 H), 8.78 (d, 1 H, J= 1.52 Hz); MS (m/z):

实施例 14: N—甲基一 4一碘一 3—硝基苯甲酰胺(化合物 VII - 1 ) 的制备:


在反应瓶中加入 10克(0.034摩尔) 4—碘一 3—硝基苯甲酸(化合物 VI-1 )和 50毫升 N, N-二甲基甲酰胺,搅拌溶解,降温至 10°C以下,加入 7.5毫升(0.10摩 尔)氯化亚砜,滴毕升至室温反应一小时,将反应液倒至低温的 200毫升 30%甲胺 水溶液中,搅拌 5分钟,析出固体,再加入 500毫升冰水,搅拌 10分钟,过滤,水 洗,烘干,得到 N—甲基一 4一碘一 3—硝基苯甲酰胺(化合物 VII - 1 ) 6.5克(0.021 摩尔),收率 62.3%。 1H MR (400 MHz, DMSO-i/6): 6 2.81 (d, 3 H, J= 4.1 Hz), 7.84 (d, 1 H, J = 7.8 Hz), 8.23 (d, 1 H, J= 8.1 Hz), 8.33 (s, 1 H), 8.75 (s, 1 H); MS (m/z): 307 [M+H]0

实施例 15: N—甲基—4一(2—三甲基硅基)乙炔基一3—硝基苯甲酰胺(化合

物 VIII- 1 ) 的制备:


VIII-1

在 100毫升四口瓶中加入 6克(0.02摩尔) N—甲基一 4一碘一 3—硝基苯甲酰 胺 (化合物 VII - 1 ), 60毫升四氢呋喃和 4.2毫升三乙胺,搅拌溶解,加入 0.44克 (0.63毫摩尔)双(三苯基磷)二氯化钯, 0.24克(1.26毫摩尔)碘化亚铜和 6毫 升 (0.042摩尔)三甲基硅乙炔,室温反应 l h, 减压浓缩蒸去大部分四氢呋喃,加 入 200毫升乙酸乙酯萃取,有机层用水洗涤三次,无水硫酸钠干燥,过滤,将滤液 浓缩至干,柱层析分离得到固体 N—甲基一 4一(2—三甲基硅基)乙炔基一 3—硝基 苯甲酰胺(化合物 VIII- 1 ) 3.8克(0.014摩尔),收率 70.2%。 1HNMR (400 MHz, DMSO-i 6): δ 0.26 (s, 9 H), 2.81 (d, 3 H, J= 4.5 Hz), 7.87 (d, 1 H, J= 8.1 Hz), 8.14 (dd, 1 H, J! = 8.1 Hz, J2 = 1.6 Hz), 8.52 (d, 1 H, J= 1.5 Hz), 8.83 (d, 1 H, J = 4.4 Hz); MS (m/z): 277 [M+H]。

实施例 16: N—一 4一乙炔基一 3—硝基苯甲酰胺(化合物 1-9) 的制备


在 100毫升反应瓶中加入 3.3克(0.012摩尔) N—甲基一 4一(2—三甲基硅基) 乙炔基一 3—硝基苯甲酰胺(化合物 VIII - 1 )和 20毫升甲醇,搅拌溶解,加入 0.53 克(0.0056摩尔)二水合氟化钾,反应 30分钟,反应完毕,滴加 60毫升水,过滤, 烘干,得到固体 2.2克,以乙酸乙酯正己垸重结晶,得 N—甲基一 4一乙炔基一 3—

硝基苯甲酰胺 (化合物 1-9) 1.5克 (0.0074摩尔),收率 61.7%。 1HNMR (400 MHz, DMSO- 6): δ 2.82 (d, 3 H, J= 4.56 Hz), 4.92 (s, 1 H), 7.92 (d, 1 H, J= 8.08 Hz), 8.17 (dd, 1 H, J = 8.08 Hz, J2 = 1.76 Hz), 8.54 (d, 1 H, J= 1.64 Hz), 8.86 (d, 1 H, J= 4.32 Hz); MS(m/z): 203 [M-H]。

实施例 17: N, N—二甲基一4一乙炔基一 3—硝基苯甲酰胺(化合物 I - 10) 的 制备


1-10

以化合物 4一碘一 3—硝基苯甲酸(化合物 VI - 1 ) 和二甲胺为原料,按实施例 14,实施例 15和实施例 16方法制备化合物 1-10: 1HNMR (400MHz, CDC13): δ 3.02 (s, 3 H), 3.14 (s, 3 H), 3.62 (s, 1 H), 7.67 (dd, 1 H, J = 7.96 Hz, J2 = 1.64 Hz), 7.74 (d, 1 H, J= 7.92 Hz), 8.12 (d, 1 H, J= 1.56 Hz); MS(m/z): 219 [M+H]

实施例 18: N—乙酰基一 4一乙炔基一 3—硝基苯甲酰胺(化合物 1-11 ) 的制备


1-1 1-11

在反应瓶中加入 4克(0.021摩尔) 4一乙炔基一 3—硝基苯甲酰胺(化合物 I - 1 ), 30毫升(0.320摩尔)乙酸酐和 20毫升乙酸,搅拌,加热至 120°C反应 15小时, TLC检测反应完毕后,用 300毫升乙酸乙酯萃取,有机层用水洗涤三次,无水硫酸 钠干燥,过滤,将滤液浓缩至干,柱层析分离得到 N—乙酰基一 4一乙炔基一 3—硝 基苯甲酰胺(化合物 I - 11 ) 1.1克(0.0047摩尔),收率 22.6%。 1HNMR (400 MHz, DMS0- 6): S 2.36 (s, 3 H), 4.99 (s, 1 H), 7.94 (d, 1 H, J= 8.08 Hz), 8.21 (dd, 1 H, J - 8.12 Hz, J2 = 1.80 Hz), 8.60 (d, 1 H, J= 1.72 Hz), 11.32 (s, 1 H); MS (m/z): 231 [M- H]。

硝基苯甲酰胺(化合物 1-12) 的制备


以化合物 4一碘一 3—硝基苯甲酸甲酯(化合物 IV) 和三甲基炔丙基硅烷为原 料,按实施例 3,实施例 4和实施例 5方法制备化合物 1-12: 1HNMR (400 MHz, DMS0-i ): 6 2.16 (s, 3 H), 7.74 (s, 1 H), 7.79 (d, 1 H, J= 8.16 Hz), 8.14 (dd, 1 H, J! - 8.13 Hz, J2 = 1.77 Hz), 8.30 (s, 1 H), 8.50 (d, 1 H, J= 1.71 Hz); MS (m/z): 203 [M-H] 0

实施例 20: N—苯甲酰基一 4一乙炔基一 3—硝基苯甲酰胺(化合物 I - 13) 的制 备


以化合物 1-1和苯甲酰氯为原料按实施例 6方法制备化合物 1-13: ]Η ΜΚ (400 MHz, DMS0- 6): δ 4.89 (s, 1 Η), 7.54 (t, 2 Η, J = 7.5 Hz), 7.66 (t, 1 H, J= 7.4 Hz), 7.91-7.96 (m, 3 H), 8.20 (dd, 1 H, J = 8.1 Hz, J2 = 1.6 Hz), 8.58 (d, 1 H, J = 1.5 Hz), 11.52 (s, 1 H); MS (m/z): 293 [M-H]0

以化合物 4—碘一 3—硝基苯甲酸(化合物 VI-1 ) 为原料,选用合适的胺和三 甲基硅乙炔,依次按实施例 14,实施例 15和实施例 16方法制备化合物 1-14、化合 物 1-15、化合物 1-16、化合物 1-17、化合物 1-18、化合物 1-19、化合物 1-20、化合 物 1-21、化合物 1-22、化合物 1-23、化合物 1-24和化合物 1-25; 以化合物 N—甲基 一 4一碘一 3—硝基苯甲酰胺(化合物 VII - 1 ) 和三甲基炔丙基硅烷为原料,依次按

实施例 15和实施例 16方法制备化合物 1-26:




实施例 34: N—甲基一 4一氰基一 3—硝基苯甲酰胺(化合物 1-27) 的制备

在反应瓶中加入 2克(6.53毫摩尔) N—甲基一 4一碘一 3—硝基苯甲酰胺(化 合物 VII-1 ), 0.09克(10.0毫摩尔)氰化亚铜和 10毫升六甲基磷酰三胺,加热至 10CTC反应 40分钟,反应完毕,冷却至室温,然后用乙酸乙酯萃取,有机层用水洗 涤三次,无水硫酸钠干燥,活性炭脱色,过滤,将滤液浓缩至干,乙酸乙酯重结晶 得到 N—甲基一 4—氰基一 3—硝基苯甲酰胺(化合物 1-27) 0.74克,收率 55.2%。 1HNMR (400 MHz, DMS0- ^): δ 2.84 (d, 3 H, J= 4.6 Hz), 8.27 (d, 1 H, J= 8.0 Hz), 8.32 (dd, 1 H, Ji = 8.0 Hz, J2 = 1.5 Hz), 8.72 (d, 1 H, J= 1.4 Hz), 8.90 (m, 1 H); MS (m/z): 204 [M-H] c

实施例 35: 4—乙炔基一 3—亚硝基苯甲酰胺(化合物 1-28) 的制备


XII-1 XI-1 1-28

步骤一:在 150毫升四口瓶中加入 5克(26.3毫摩尔) 4一乙炔基一 3—硝基苯 甲酰胺(化合物 XII - 1 )和 75毫升四氢呋喃,机械搅拌溶解后,加入溶有 10克(186.9 毫摩尔)氯化铵的水溶液 10毫升,然后分批加入 10克(178.5毫摩尔)铁粉,室温 下反应 4小时,反应完毕,过滤,四氢呋喃洗涤滤饼,滤液用乙酸乙酯萃取,有机 相用水洗涤,无水硫酸钠干燥,活性炭脱色,过滤,浓缩至析出固体,过滤烘干得 4一乙炔基一 3—氨基苯甲酰胺(化合物 XI - 1,灰色固体) 2.4克,收率 59.4%。 1HNMR (400 MHz, DMS0-c/6): 5 4.55 (s, 1 H), 7.25 (dd, 1 H, J = 8.0 Hz, J2 = 1.6 Hz), 7.31 (d, 1 H, J= 7.9 Hz), 7.35 (s, 1 H), 7.61 (d, 1 H, J= 1.4 Hz), 7.97 (s, 1 H), 8.21 (s, 1 H), 8.65 (s, 1 H); MS (m/z): 161 [M+H]。

步骤二:在 50毫升单口瓶中加入 0.46克(2.87毫摩尔) 4一乙炔基一 3—氨基 苯甲酰胺(化合物 XI-1 ), 10毫升水,加入 1.2克 58%硫酸,再加入 0.92克 18.5% 重铬酸钾溶液,搅拌 3分钟,反应完毕,乙酸乙酯萃取,无水硫酸钠干燥,柱层析 分离得 4一乙炔基一 3—亚硝基苯甲酰胺(化合物 1-28,黄绿色固体) 0.06克,收率 12%, 于 -20°C保存。 1HNMR (400 MHz, DMS0-4 ) : δ 4.97 (s, 1 H), 6.99 (d, 1 H,

J- 1.3 Hz), 7.70 (s, 1 H), 8.09 (d, 1 H, J= 8.0 Hz), 8.27 (s, 1 H), 8.34 (dd, 1 H, J, = 8.0 Hz, J2 = 1.6 Hz); MS (m/z): 219 [M+HCOO-]。

实施例 36: (4—乙炔基一 3—硝基苯基)(4一甲基哌嗪— 1一基)甲酮盐酸盐(化 合物 1-29) 的制备


在 50 ml单口瓶中加入 0.75克(2.74毫摩尔)(4一乙炔基一 3—硝基苯基)(4 一甲基哌嗪一 1—基)甲酮(化合物 I - 24)和 7.5毫升无水甲醇,磁力搅拌溶解,加 浓盐酸调 PH值至 2,冰水冷却下析出白色固体,过滤,无水乙醇洗涤滤饼,烘干 得(4一乙炔基一 3—硝基苯基)(4一甲基哌嗪一 1一基)甲酮盐酸盐(化合物 I - 29) 0.46克,收率: 54.1%。 'HNMR (400 MHz, DMS0-i/6): δ 2.76 (s, 3 Η), 3.16 (br s, 4 H), 3.66 (br s, 4 H), 4.91 (s, 1 H), 7.85 (dd, 1 H, J! = 8.0 Hz, J2 = 1.4 Hz), 7.88 (d, 1 H, J= 8.0 Hz), 8.21 (d, 1 H, J= 1.3 Hz); MS (m/z): 274 [M+H—HCl]

实施例 37: (4—乙炔基一 3—硝基苯基)(哌嗪一 1一基)甲酮盐酸盐(化合物 1-30) 的制备


以 (4一乙炔基一 3—硝基苯基)(哌嗪一 1一基)甲酮(化合物 1-23) 为原料按 实施例 36方法制备(4一乙炔基一 3—硝基苯基)(哌嗪一 1一基)甲酮盐酸盐(化合

物 1—30)。 1HNMR (400 MHz, D20): 5 3.32 (br s, 2 H), 3.45 (br s, 2 H), 3.78 (br s, 2 H), 4.03 (br s, 2 H), 4.11 (s, 1 H), 7.80 (dd, 1 H, J = 8.0 Hz, J2 = 1.6 Hz), 7.91 (d, 1 H, J= 8.0 Hz), 8.24 (d, 1 H, J= 1.4 Hz); MS (m/z): 260 [M+H-HC1] 本发明化合物的药效学筛选,按下列方式进行

一.体外药效学筛选

1. 细胞培养

人类结肠癌细胞株(Colo205 和 HCT-116 )、人类乳腺癌细胞株(MCF-7 和 MDA-MB435 ) 人类肺癌细胞株(A549, 95D 和 NCI460 )、人卵巢癌细胞株 (OVCAR-5, OVCAR-8, HO8910和 SKOV-3 )、人白血病(HL- 60和 K562)、人前 列腺癌(DU145和 BXPC-3 )、人子宫癌(Hela)、人胰腺癌(PANC-1 )、人肝癌(HepG 2 ), 均获自 ATCC。将 Colo205、 HL-60、 K562细胞培养于含 2 mM/L-谷氨酞胺、 10% FBS, l.O mM丙酮酸钠的 RPMI 1640中。将 HCT-116、 MCF-7、 A549、 95D、 HO8910、 NCI460、 OVCAR-5 ^ OVCAR-8. DU145、 BXPC-3、 Hela、 PANC-K HepG 2细胞培养于含 2 mM L-谷氨酰胺、 10% FBS的 DMEM中。将 MDA-MB435细胞 培养于含 2 mM/L-谷氨酰胺、 10% FBS的 L-15中。将 SK0V-3细胞培养于含 2 mM/L 一谷氨酰胺、 10% FBS的 McCoy's中。将 Colo205、 HL-60和 K562细胞接种于 96 孔板, 150 μ!7?ί,每孔 8000个细胞,将 96孔板于 37°C,. 5% C02, 100%相对湿度 培养箱预培养 24 小时。将 HCT-116、 MCF-7, NCI460、 OVCAR-5 ^ OVCAR-8 ^ Hela、 HepG 2和 MDA-MB435细胞接种于 96孔板,每孔为 5000个细胞;将 A549、 95D、 HO8910、 DU145 BXPC-3, PANC-1和 SKOV-3细胞接种于 96孔板,每孔 为 10000个细胞,将 96孔板于 37Γ, 5% C02, 100%相对湿度培养箱预培养 24小 时,使细胞贴壁。

2. 筛选化合物

在每种细胞株的 time zero对照孔加入 50 μL预冷的 50% (质量 /体积) TCA固 定细胞。其他孔加入不同浓度的化合物 50 ptL,作用 48 h,每个药物浓度设 3个复 孔,并设空白对照(细胞培养液,不含细胞)、无药对照孔(不加药物,加等量完全 培养基)、阳性药对照 BSI-201 , 置于 37°C、 5% C02培养箱在全湿(100%相对湿度) 条件下培养 48 ho

3. 细胞检测

于培养液液面上加入 50 /zL预冷的 50% (质量 /体积) TCA固定细胞。然后在 4°C 中放置 1 h,弃上清,各孔用去离子水洗涤 5遍,以去除 TCA和血清蛋白等。在空气 中干燥后,每孔加足够量的 0.4% SRB (用 1%乙酸配制)约 ΙΟΟ μί, 室温放置 20〜30 min。弃去各孔内液体,快速用 1%乙酸洗涤 5遍,去除未结合的染料,直到未结合的 染料漂洗干净。空气中干燥直到看不见湿气后,用 200 L Tris baSe溶解,在平板振 荡器上振荡 5 min或用 Tip头上下击打混匀 , 并在多功能仪上 (M5 detection system, MD Group Ltd. ) 测定, 690 nm空白对照调零,检测波长为 515 nm。

使用 XL-fit绘制剂量反应曲线以测定其 GI5o值。

4. 筛选结果

通过体外药效筛选实验,以 BSI-201 ( Iniparib)作为阳性药,结果显示化合物 1—1、 1-2、 1—3、 1-5、 1-6 ¾ 1—7、 1—8、 1—9、 1—10、 1—11、 1-12. 1—13、 1—14、 1-15、 1-16、 1-17、 1-18、 1-19 1—20、 1-21、 1—22、 1-23 1-24、 1-25、 1-26、 1-27、 1—28、 1-29、 1-30有抑制肿瘤细胞增殖作用,其中,化合物 1-1在所测的 18株肿瘤细胞株 上药效是阳性药 BSI-201的 10倍以上; 1-2、 1-3、 1-14、 1-15、 1-17、 1-20, 1-21、 1—23、 1—24、 1—29、 1-30药效略差于 1-1 ; 1- 1—5、 1-6, 1-7、 1—8、 1—9、 1—10、 1-11、 1-12 > 1-13、 1-16、 1-18、 1-19、 1-25、 1-27、 1-28也有很好的抑制肿瘤细胞增殖作 用。筛选结果见表 1

表 1 化合物(I)对肿瘤细胞抑制活性部分数据


说明:表 1中的 "- "表示活性未测试; "ND"表示化合物有活性,但 GI5o值在使用的测试的条件下未测出。

化合物 (I)对肿瘤细胞抑制活性部分数据


说明:表 1中的 " -"表示活性未测试; "ND"表示化合物有活性,但 GI5o值在使用的测试的条件下未测出。

二.体内药效学筛选

1. 动物模型建立

取 5-6周龄雌性或雄性 BALB/C裸鼠,体重约 18-20克,饲养。建造人癌裸鼠异体 移植性肿瘤模型:人结肠癌细胞株 HCT-116和 Colo205、人类乳腺癌细胞株 MDA-MB435, 人类前列腺癌细胞株 BXPC-3、人类卵巢癌细胞株 SKOV-3、人类肺 癌细胞株 A549、人类胰腺癌细胞株 PANC-1、人类子宫癌细胞株 Hda,均来自 ATCC。 培养,将单层培养的肿瘤细胞消化脱壁后,收集并重悬于不含血清的培养液,调整 到浓度 2x l06/0.2 mL,放于冰盒中携至动物房,直接用带 6号针头的注射器取 0.2 mL 细胞悬液移植于裸鼠左腋窝后方肩胛部皮下, 2x l06/0.2 mL/只,每 2-3天测一次成瘤 体积,两周后选择肿瘤生长旺盛且无溃破的荷瘤裸鼠,在无菌条件下,取出肿瘤, 将瘤组织剪成直径约 2-3 mm接种于裸鼠左腋窝后方肩胛部皮下,传三代后,当肿瘤 体积生长至 100 mm3时去掉瘤块过大或过小的裸鼠随机分组给药。

2. 筛选化合物

随机分 5个组,包括阴性对照组(溶媒),阳性对照组(BSI-201 , 80 mg/kg), 高中低三个剂量的治疗组(分别为 40 mg/kg, 30 mg/kg, 20 mg/kg, 其中高剂量低 于 MTD),每组 8只裸鼠,其中阴性对照组为 16只,腹腔注射给药,每天一次,连 续 3周。期间每 2天检测动物体重,瘤体积并记录动物死亡数。末次给药后 24小时 处死动物,测量肿瘤体积大小、瘤重、裸鼠体重,绘制肿瘤体积生长曲线、裸鼠体 重生长曲线和肿瘤抑制率,动物死亡率,计算相对肿瘤增殖率 T/C (%), 根据公式 T/C (%) = TRTV/CRTV*100%。(TRTV: 治疗组 RTV; CRTV: 阴性对照组 RTV, 相对肿瘤体积 RTV = Vt Vc,其中 Vo为分组给药时肿瘤体积, Vt为给药后肿瘤体积)。

3. 筛选结果

通过体内药效筛选实验,以 BSI-201 (Iniparib)作为阳性药,结果显示化合物 I - 1 30 111^§的剂量与881-201 80mg kg药效相当,具有显著药效作用,筛选结果见 表 2。

表 2化合物(I)对裸鼠肿瘤模型抑瘤率


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