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1. (WO2012048249) SITE-SPECIFIC INCORPORATION OF PHOSPHOSERINE INTO PROTEINS IN ESCHERICHIA COLI
Latest bibliographic data on file with the International Bureau   

Pub. No.:    WO/2012/048249    International Application No.:    PCT/US2011/055414
Publication Date: 12.04.2012 International Filing Date: 07.10.2011
IPC:
C12N 15/11 (2006.01), C12N 15/67 (2006.01), C12P 21/02 (2006.01), C12Q 1/25 (2006.01), C12Q 1/48 (2006.01)
Applicants: YALE UNIVERSITY [US/US]; Two Whitney Avenue New Haven, CT 06510 (US) (For All Designated States Except US).
PARK, Hee-Sung [KR/KR]; (KR) (For US Only).
SOLL, Dieter [US/US]; (US) (For US Only)
Inventors: PARK, Hee-Sung; (KR).
SOLL, Dieter; (US)
Agent: PABST, Patrea, L.; Pabst Patent Group LLP 1545 Peachtree Street, N.E., Suite 320 Atlanta, GA 30309 (US)
Priority Data:
61/470,332 31.03.2011 US
61/390,853 07.10.2010 US
Title (EN) SITE-SPECIFIC INCORPORATION OF PHOSPHOSERINE INTO PROTEINS IN ESCHERICHIA COLI
(FR) INCORPORATION SITE-SPÉCIFIQUE DE PHOSPHOSÉRINE DANS DES PROTÉINES DANS ESCHERICHIA COLI
Abstract: front page image
(EN)Nucleic acids encoding mutant elongation factor proteins (EF-Sep), phosphoseryl-tRNA synthetase (SepRS), and phosphoseryl-tRNA (tRNASep) and methods of use in site specific incorporation of phosphoserine into a protein or polypeptide are described. Typically, SepRS preferentially aminoacylates tRNASep with O-phosphoserine and the tRNASep recognizes at least one codon such as a stop codon. Due to the negative charge of the phosphoserine, Sep-tRNASep does not bind elongation factor Tu (EF-Tu). However, mutant EF-Sep proteins are disclosed that bind Sep-tRNASep and protect Sep-tRNASep from deacylation. In a preferred embodiment the nucleic acids are on vectors and are expressed in cells such as bacterial cells, archeaebacterial cells, and eukaryotic cells. Proteins or polypeptides containing phosphoserine produced by the methods described herein can be used for a variety of applications such as research, antibody production, protein array manufacture and development of cell-based screens for new drug discovery.
(FR)La présente invention concerne des acides nucléiques codant pour des protéines de facteur d'allongement (EF-Sep) mutantes, phosphoséryl-ARNt synthétase (SepRS), et phosphoséryl-ARNt (ARNtSep) et des procédés d'utilisation dans l'incorporation site-spécifique de phosphosérine dans une protéine ou un polypeptide. Typiquement, SepRS aminoacyle de préférence ARNtSep avec de la O-phosphosérine et l'ARNtSep reconnaît au moins un codon tel qu'un codon non-sens. En raison de la charge négative de la phosphosérine, Sep-ARNtSep ne se lie pas au facteur d'allongement Tu (EF-Tu). Cependant, des protéines EF-Sep mutantes sont décrites qui se lient à Sep-ARNtSep et protègent Sep-ARNtSep contre la désacylation. Dans un mode de réalisation préféré, les acides nucléiques sont sur des vecteurs et sont exprimés dans des cellules telles que des cellules bactériennes, des cellules archéobactériennes, et des cellules eucaryotes. Les protéines ou polypeptides contenant de la phosphosérine produite par les procédés présentement décrits peuvent être utilisés pour différentes applications telles que la recherche, la production d'anticorps, la fabrication de puce à protéine et le développement de criblages à base de cellules pour la découverte de nouveaux médicaments.
Designated States: AE, AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BH, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CL, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DK, DM, DO, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, GT, HN, HR, HU, ID, IL, IN, IS, JP, KE, KG, KM, KN, KP, KR, KZ, LA, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LY, MA, MD, ME, MG, MK, MN, MW, MX, MY, MZ, NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PE, PG, PH, PL, PT, QA, RO, RS, RU, RW, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, ST, SV, SY, TH, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, ZA, ZM, ZW.
African Regional Intellectual Property Organization (BW, GH, GM, KE, LR, LS, MW, MZ, NA, RW, SD, SL, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
Eurasian Patent Organization (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM)
European Patent Office (AL, AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HR, HU, IE, IS, IT, LT, LU, LV, MC, MK, MT, NL, NO, PL, PT, RO, RS, SE, SI, SK, SM, TR)
African Intellectual Property Organization (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Publication Language: English (EN)
Filing Language: English (EN)