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Pub. No.:    WO/2011/135880    International Application No.:    PCT/JP2011/052122
Publication Date: 03.11.2011 International Filing Date: 02.02.2011
C12N 15/09 (2006.01), C12Q 1/68 (2006.01)
Applicants: SHIMADZU CORPORATION [JP/JP]; 1, Nishinokyo-kuwabaracho, Nakagyo-ku, Kyoto-shi, Kyoto 6048511 (JP) (For All Designated States Except US).
OHASHI, Tetsuo [JP/JP]; (JP) (For US Only).
WATANABE, Masayuki [JP/JP]; (JP) (For US Only)
Inventors: OHASHI, Tetsuo; (JP).
WATANABE, Masayuki; (JP)
Agent: OKADA, Masahiro; OKADA & CO. 12th Shinko Bldg. 10F, 1-6, Zaimoku-cho, Chuo-ku, Osaka-shi, Osaka 5400010 (JP)
Priority Data:
2010-104580 28.04.2010 JP
(JA) 液滴操作によるリアルタイム核酸増幅法
Abstract: front page image
(EN)Provided is a method for real-time nucleic acid amplification whereby a fluorescence, which is obtained by a nucleic acid amplification method performed in droplets in a completely closed system, can be detected at a high speed and a high accuracy. The real-time nucleic acid amplification reaction method is to be used for conducting a nucleic acid amplification reaction in droplets present in a vessel, wherein: the droplets are formed of a nucleic acid amplification reaction solution containing the nucleic acid to be amplified and magnetic particles; the vessel holds a droplet-encapsulation medium, said droplet-encapsulation medium being immiscible with the nucleic acid amplification reaction solution forming the droplet, and is provided with a carrying surface being under a temperature gradient; at the start of the nucleic acid amplification reaction, at least the droplet-encapsulation medium, or both of the droplets and the droplet-encapsulation medium, contain a fluorescent dye; and, at the start of the nucleic acid amplification reaction and during the maintenance of said reaction, a magnetic field is generated by a magnetic field-applying means so as to carry the droplets together with the magnetic particles, and the droplets are placed at the temperature points on the carrying surface, at said temperature points the start and maintenance of the nucleic acid synthesis reaction being ensured, thereby controlling the temperature of the reaction liquor.
(FR)La présente invention concerne une méthode d'amplification en temps réel d'acides nucléiques, dans laquelle un signal de fluorescence obtenu par une méthode d'amplification d'acides nucléiques mise en œuvre dans des gouttelettes dans un système entièrement fermé peut être détecté à vitesse et exactitude élevées. La méthode de réaction d'amplification des acides nucléiques en temps réel est destinée à la mise en œuvre d'une réaction d'amplification des acides nucléiques dans des gouttelettes présentes dans un réacteur, où : les gouttelettes sont formées à partir d'une solution réactionnelle d'amplification d'acides nucléiques contenant l'acide nucléique à amplifier et des particules magnétiques; le réacteur contient un milieu d'encapsulation de gouttelettes, ledit milieu d'encapsulation de gouttelettes étant immiscible à la solution réactionnelle d'amplification d'acides nucléiques formant les gouttelettes, et étant doté d'une surface porteuse soumise à un gradient de température; au départ de la réaction d'amplification de l'acide nucléique, au moins le milieu d'encapsulation des gouttelettes, ou les gouttelettes et le milieu d'encapsulation des gouttelettes, contiennent un colorant fluorescent; et, au début de la réaction d'amplification de l'acide nucléique et pendant le déroulement de ladite réaction, un champ magnétique est généré par un dispositif d'application d'un champ magnétique de manière à transporter les gouttelettes avec les particules magnétiques, et les gouttelettes sont placées aux points de température de la surface porteuse, le début et le déroulement de la réaction de synthèse de l'acide nucléique étant garantis au niveau desdits points de température, ce qui permet de contrôler la température du mélange réactionnel.
(JA) 本発明は、完全密閉系において液滴中で実施される核酸増幅法において得られる蛍光を高速且つ高精度に検出することができるリアルタイム核酸増幅法を提供する。容器中に存在する液滴中で核酸増幅反応を行う核酸増幅反応方法であって、液滴が、増幅すべき核酸と磁性体粒子とを含む核酸増幅反応液からなり、容器が、液滴を形成する核酸増幅反応液と混ざり合わない液滴封入媒体が保持され、温度勾配が設けられた搬送面を有するものであり、核酸増幅反応の開始時において、液滴及び液滴封入媒体のうち少なくとも液滴封入媒体に蛍光色素が含まれ、核酸増幅反応の開始及び維持において、磁場印加手段によって磁場を発生させて磁性体粒子と共に液滴を搬送すると共に、搬送面上の核酸合成反能の開始及び維持を達成する温度地点に液滴を配置することによって反応液の温度制御をする、リアルタイム核酸増幅反応方法。
Designated States: AE, AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BH, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CL, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DK, DM, DO, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, GT, HN, HR, HU, ID, IL, IN, IS, KE, KG, KM, KN, KP, KR, KZ, LA, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LY, MA, MD, ME, MG, MK, MN, MW, MX, MY, MZ, NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PE, PG, PH, PL, PT, RO, RS, RU, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, ST, SV, SY, TH, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, ZA, ZM, ZW.
African Regional Intellectual Property Organization (BW, GH, GM, KE, LR, LS, MW, MZ, NA, SD, SL, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
Eurasian Patent Organization (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM)
European Patent Office (AL, AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HR, HU, IE, IS, IT, LT, LU, LV, MC, MK, MT, NL, NO, PL, PT, RO, RS, SE, SI, SK, SM, TR)
African Intellectual Property Organization (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Publication Language: Japanese (JA)
Filing Language: Japanese (JA)