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1. WO2011000977 - MINIATURIZED MULTI-WELL-PLATE METHOD FOR ANALYZING LIGAND/NUCLEIC ACID BINDING BY MEANS OF THERMAL FUSION CURVES

Publication Number WO/2011/000977
Publication Date 06.01.2011
International Application No. PCT/ES2010/000264
International Filing Date 16.06.2010
IPC
C12Q 1/68 2006.01
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
1Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
68involving nucleic acids
CPC
B01L 7/52
BPERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
01PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
LCHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
7Heating or cooling apparatus
52with provision for submitting samples to a predetermined sequence of different temperatures, e.g. for treating nucleic acid samples
C12Q 1/6816
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS
1Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms
68involving nucleic acids
6813Hybridisation assays
6816characterised by the detection means
Applicants
  • UNIVERSIDAD DE ALCALÁ [ES]/[ES] (AllExceptUS)
  • DOMINGO GALÁN, Alberto [ES]/[ES] (UsOnly)
  • GARCÍA HERNÁNDEZ, Verónica [ES]/[ES] (UsOnly)
  • VAQUERO LÓPEZ, Juan José [ES]/[ES] (UsOnly)
Inventors
  • DOMINGO GALÁN, Alberto
  • GARCÍA HERNÁNDEZ, Verónica
  • VAQUERO LÓPEZ, Juan José
Agents
  • CARVAJAL Y URQUIJO, Isabel
Priority Data
P20090150830.06.2009ES
Publication Language Spanish (ES)
Filing Language Spanish (ES)
Designated States
Title
(EN) MINIATURIZED MULTI-WELL-PLATE METHOD FOR ANALYZING LIGAND/NUCLEIC ACID BINDING BY MEANS OF THERMAL FUSION CURVES
(ES) PROCEDIMIENTO MINIATURIZADO EN PLACAS MULTIPOCILLO PARA ANALIZAR LA UNIÓN DE LIGANDOS A ÁCIDOS NUCLEICOS MEDIANTE LA OBTENCIÓN DE CURVAS DE FUSIÓN TÉRMICA
(FR) PROCÉDÉ MINIATURISÉ APPLIQUÉ DANS DES PLAQUES MULTIPUITS POUR ANALYSER LA LIAISON DE LIGANDS À DES ACIDES NUCLÉIQUES À TRAVERS L'OBTENTION DE COURBES DE FUSION THERMIQUE
Abstract
(EN)
A miniaturized multi-well-plate method for analyzing ligand/nucleic acid binding by means of thermal fusion curves is described. In order to achieve miniaturization, fluorescent labeling strategies are used that allow determination of the proportion of associated and dissociated complexes in the homogeneous phase. The reaction mixtures to be analyzed are placed in different wells of a multi-well plate. Next, the plate undergoes a gradual temperature increase, programmed over time, fluorescence-intensity readings in respect of each well being taken after each temperature-increase step. A gradual temperature-decrease programme may also be implemented, fluorescence-intensity readings likewise being taken with each temperature change. The programmed temperature change and fluorescence-emission intensity reading may be performed on a real-time PCR apparatus or other equipment that allows said operations to be carried out on multi-well plates.
(ES)
Se describe un procedimiento miniaturizado en placas multipocillo para analizar la unión de ligandos a ácidos nucleicos mediante curvas de fusión térmica. Para conseguir Ia miniaturización se utilizan estrategias de mareaje fluorescente que permitan Ia determinación de Ia proporción de complejos asociados y disociados en fase homogénea. Las mezclas de reacción a analizar se disponen en distintos pocilios de una placa multipocillo. A continuación se somete Ia placa a un incremento de temperatura gradual programado en el tiempo, tomando lecturas de intensidad de fluorescencia de cada pocilio tras cada paso de incremento de temperatura. Puede ejecutarse también un programa de disminución gradual de temperatura, igualmente tomando lecturas de intensidad de fluorescencia con cada cambio. El cambio programado de temperatura y lectura de intensidad de emisión de fluorescencia se puede realizar en un aparato de PCR de tiempo real u otros equipos que permitan realizar dichas operaciones sobre placas multipocillo.
(FR)
L'invention concerne un procédé miniaturisé appliqué dans des plaques multipuits pour analyser la liaison de ligands à des acides nucléiques au moyen de courbes de fusion thermique. Afin de parvenir à la miniaturisation, on utilise des stratégies de marquage fluorescent qui permettent de déterminer la proportion de complexes associés et dissociés en phase homogène. Les mélanges réactionnels à analyser sont disposés dans différents puits d'une plaque multipuits. Ensuite, on soumet la plaque à une augmentation de température graduelle programmée dans le temps, on effectue des lectures d'intensité de fluorescence de chaque puits après chaque étape d'augmentation de température. Un programme de diminution graduelle de température peut également être exécuté, des lectures d'intensité de fluorescence étant également effectuées à chaque modification. La modification programmée de température et la lecture d'intensité d'émission de fluorescence peuvent être effectuées dans un appareil de PCR en temps réel ou d'autres équipements qui permettent d'effectuer ces opérations sur des plaques multipuits.
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