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1. (WO2010149861) METHOD FOR QUANTITATIVE PCR AMPLIFICATION OF DEOXYRIBONUCLEIC ACIDS FROM A SAMPLE CONTAINING PCR INHIBITORS
Latest bibliographic data on file with the International Bureau   

Pub. No.:    WO/2010/149861    International Application No.:    PCT/FI2010/050554
Publication Date: 29.12.2010 International Filing Date: 28.06.2010
IPC:
C12Q 1/68 (2006.01)
Applicants: FINNZYMES OY [FI/FI]; Keilaranta 16 A FI-02150 Espoo (FI) (For All Designated States Except US).
KURKELA, Jaakko [FI/FI]; (FI) (For US Only)
Inventors: KURKELA, Jaakko; (FI)
Agent: OY JALO ANT-WUORINEN AB; Iso Roobertinkatu 4-6 A FI-00120 Helsinki (FI)
Priority Data:
20095729 26.06.2009 FI
Title (EN) METHOD FOR QUANTITATIVE PCR AMPLIFICATION OF DEOXYRIBONUCLEIC ACIDS FROM A SAMPLE CONTAINING PCR INHIBITORS
(FR) PROCÉDÉ POUR L'AMPLIFICATION PAR PCR QUANTITATIVE D'ACIDES DÉSOXYRIBONUCLÉIQUES PROVENANT D'UN ÉCHANTILLON COMPRENANT DES INHIBITEURS DE PCR
Abstract: front page image
(EN)The present invention is directed to a method for quantitative PCR amplification of deoxyribonucleic acids (DNA) from a sample containing PCR inhibitors such as biological, clinical or environmental samples. In the method of the invention an inhibitor-tolerant DNA polymerase is used in a pre-amplification step to increase the copy number of DNA from these samples. In the pre-amplification step, the PCR reaction preferably comprises at least the same amount of effective PCR inhibitors as a reaction with 1% (v/v) human blood. The pre-amplified sample is subsequently diluted in order to dilute inhibitory substances remaining in the sample and thus rendering possible to use an aliquot of the diluted sample in quantitative PCR, which is very sensitive for these inhibitors.
(FR)La présente invention porte sur un procédé pour l'amplification par PCR quantitative d'acides désoxyribonucléiques (ADN) provenant d'échantillons contenant des inhibiteurs de PCR tels que des échantillons biologiques, cliniques ou environnementaux. Dans le procédé de l'invention une ADN polymérase tolérante aux inhibiteurs est utilisée dans une étape de préamplification pour augmenter le nombre de copies d'ADN provenant de ces échantillons. Dans l'étape de préamplification, la réaction de PCR comprend de préférence au moins la même quantité d'inhibiteurs efficaces de PCR qu'une réaction avec 1 % (v/v) de sang humain. L'échantillon préamplifié est par la suite dilué afin de diluer des substances inhibitrices restant dans l'échantillon, ce qui rend ainsi possible d'utiliser une petite portion de l'échantillon dilué dans une PCR quantitative, qui est très sensible à ces inhibiteurs.
Designated States: AE, AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BH, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CL, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DK, DM, DO, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, GT, HN, HR, HU, ID, IL, IN, IS, JP, KE, KG, KM, KN, KP, KR, KZ, LA, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LY, MA, MD, ME, MG, MK, MN, MW, MX, MY, MZ, NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PE, PG, PH, PL, PT, RO, RS, RU, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, ST, SV, SY, TH, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, ZA, ZM, ZW.
African Regional Intellectual Property Organization (BW, GH, GM, KE, LR, LS, MW, MZ, NA, SD, SL, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
Eurasian Patent Organization (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM)
European Patent Office (AL, AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HR, HU, IE, IS, IT, LT, LU, LV, MC, MK, MT, NL, NO, PL, PT, RO, SE, SI, SK, SM, TR)
African Intellectual Property Organization (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Publication Language: English (EN)
Filing Language: English (EN)