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1. (WO2010143194) STABLE IMMUNOGENIC PROTEIN HAVING MULTIPLE CYSTEINES MOLECULES PROCESS THEREFOR AND COMPOSITION THEREOF
Latest bibliographic data on file with the International Bureau   

Pub. No.:    WO/2010/143194    International Application No.:    PCT/IN2009/000417
Publication Date: 16.12.2010 International Filing Date: 23.07.2009
IPC:
C07K 14/445 (2006.01), C07K 1/14 (2006.01), C07K 1/22 (2006.01), A61K 39/00 (2006.01), A61K 39/002 (2006.01), A61K 39/015 (2006.01)
Applicants: BHARAT BIOTECH INTERNATIONAL LIMITED [IN/IN]; Genome Valley Turkapally Shameerpet 500 078 Hyderabad (IN) (For All Designated States Except US).
ELLA, Krishna Murthy [IN/IN]; (IN) (For US Only).
RAVI , Ganapathy [IN/IN]; (IN) (For US Only)
Inventors: ELLA, Krishna Murthy; (IN).
RAVI , Ganapathy; (IN)
Agent: BALASUBRAHMANYSM, Lakshmi; Corporate Law Group 1106 - 1107 , Kailash Building, 26, K. G. Marg New Delhi 110 001 (IN)
Priority Data:
1356/CHE/2009 09.06.2009 IN
Title (EN) STABLE IMMUNOGENIC PROTEIN HAVING MULTIPLE CYSTEINES MOLECULES PROCESS THEREFOR AND COMPOSITION THEREOF
(FR) PROTÉINE IMMUNOGÈNE STABLE CONTENANT PLUSIEURS MOLÉCULES DE CYSTÉINE, SON PROCÉDÉ ET SA COMPOSITION
Abstract: front page image
(EN)The invention describes a stable immunogenic protein having multiple cysteines molecules wherein the protein is having stability up to two years and purity more than 98% particularly rPvRII and/or rPfF2. It also discloses a method for producing said immunogenic protein comprising the following steps: culturing the host E.coli cells containing a desired recombinant gene construct comprising a codon optimized gene sequence of rPvRII and/or rPfF2 to produce cells in high density; inducing expression rPvRII and/or rPfF2 as inclusion bodies; harvesting the cells and isolating the said inclusion bodies; separating rPvRII and/or rPfF2 from inclusion bodies by repeated sequential washing and solubilizing with chaotrophic agents comprising guanidine hydrochloride and / or urea; purifying the protein by subjecting to metal-chelate affinity chromatography; re-folding of the purified rPvRII and/or rPfF2 obtained in step e) with a redox system to recover a high yield of the soluble protein, followed by further purifying the desired protein by removing impurities by subjecting to chromatography. Further the invention discloses formulation comprising rPvRII or rPfF2, preferably being lyophilized using polysaccharides preferably sucrose, lactose, and pharmaceutically acceptable adjuvants such as aluminum hydroxide, aluminum phosphate, CpG nucleotides, non-CpG nucleotides, Montanide ISA-720, MF-59, Mono- phosphoryl Lipid-A (MPL-A) and QS-21.
(FR)L'invention concerne une protéine immunogène stable contenant plusieurs molécules de cystéine, la protéine étant stable jusqu'à deux ans et ayant une pureté supérieure à 98 %, notamment rPvRII et/ou rPfF2. Elle concerne également un procédé de fabrication de ladite protéine immunogène, qui comprend les étapes suivantes : la culture des cellules E.coli hôtes contenant une construction de gènes recombinante souhaitée qui comprend une séquence de gène à codon optimisé de rPvRII et/ou rPfF2 pour produire des cellules en une densité élevée; l'induction de l'expression de rPvRII et/ou rPfF2 sous la forme de corps d'inclusion; la récolte des cellules et l'isolement desdits corps d'inclusion; la séparation de rPvRII et/ou rPfF2 des corps d'inclusion par un lavage séquentiel répété et une solubilisation avec des agents chaotrophiques comprenant de l'hydrochlorure de guanidine et/ou de l'urée; la purification de la protéine par chromatographie d'affinité métal-chélate; le re-pliage de la rPvRII et/ou rPfF2 purifiée obtenue à l'étape e) avec un système redox pour récupérer un rendement élevé de la protéine soluble, suivi par une purification supplémentaire de la protéine souhaitée par élimination des impuretés par chromatographie. L'invention concerne également une formulation comprenant rPvRII ou rPfF2, de préférence lyophilisée en utilisant des polysaccharides, de préférence du sucrose, du lactose, et des adjuvants pharmaceutiquement acceptables tels que l'hydroxyde d'aluminium, le phosphate d'aluminium, des nucléotides CpG, des nucléotides non-CpG, Montanide ISA-720, MF-59, MPL-A (Monophosphoryl Lipid-A) et QS-21.
Designated States: AE, AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BH, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CL, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DK, DM, DO, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, GT, HN, HR, HU, ID, IL, IN, IS, JP, KE, KG, KM, KN, KP, KR, KZ, LA, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LY, MA, MD, ME, MG, MK, MN, MW, MX, MY, MZ, NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PE, PG, PH, PL, PT, RO, RS, RU, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, ST, SV, SY, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, ZA, ZM, ZW.
African Regional Intellectual Property Organization (BW, GH, GM, KE, LS, MW, MZ, NA, SD, SL, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
Eurasian Patent Organization (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM)
European Patent Office (AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HR, HU, IE, IS, IT, LT, LU, LV, MC, MK, MT, NL, NO, PL, PT, RO, SE, SI, SK, SM, TR)
African Intellectual Property Organization (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Publication Language: English (EN)
Filing Language: English (EN)