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Pub. No.:    WO/2010/137717    International Application No.:    PCT/JP2010/059160
Publication Date: 02.12.2010 International Filing Date: 28.05.2010
C12N 15/09 (2006.01), C07K 14/47 (2006.01), C07K 19/00 (2006.01), C12N 9/02 (2006.01), C12Q 1/26 (2006.01), G01N 21/76 (2006.01), G01N 33/566 (2006.01)
Applicants: THE UNIVERSITY OF TOKYO [JP/JP]; 3-1, Hongo 7-chome, Bunkyo-ku, Tokyo 1138654 (JP) (For All Designated States Except US).
ProbeX INC. [JP/JP]; Cosmos-Hongo Bldg., 1-4, Hongo 4-chome, Bunkyo-ku, Tokyo 1130033 (JP) (For All Designated States Except US).
TOYO BOSEKI KABUSHIKI KAISHA [JP/JP]; 2-8, Dojimahama 2-chome, Kita-ku, Osaka-shi, Osaka 5308230 (JP) (For All Designated States Except US).
OZAWA, Takeaki [JP/JP]; (JP) (For US Only).
MISAWA, Naomi [JP/JP]; (JP) (For US Only).
MIURA, Kenji [JP/JP]; (JP) (For US Only).
OKAMOTO, Tasuku [JP/JP]; (JP) (For US Only).
NISHII, Shigeaki [JP/JP]; (JP) (For US Only).
MASUDA, Kenji [JP/JP]; (JP) (For US Only)
Inventors: OZAWA, Takeaki; (JP).
MISAWA, Naomi; (JP).
MIURA, Kenji; (JP).
OKAMOTO, Tasuku; (JP).
NISHII, Shigeaki; (JP).
MASUDA, Kenji; (JP)
Agent: ISSHIKI & CO.; Rookin-Shinbashi Bldg., 12-7, Shinbashi 2-chome, Minato-ku, Tokyo 1050004 (JP)
Priority Data:
2009-131481 29.05.2009 JP
2010-037921 23.02.2010 JP
(JA) タンパク質間相互作用の高感度検出方法
Abstract: front page image
(EN)Disclosed is an assay system which utilizes a split luciferase and has a significantly high sensitivity. In an embodiment of the assay system, for the purpose of detecting the binding between a first protein and a second protein both having a binding ability to each other, a first fusion protein of the first protein and a peptide having an amino acid sequence depicted in SEQ ID NO: 1 is prepared, a second fusion protein of the second protein and a peptide having an amino acid sequence selected from the group consisting of the sequences depicted in SEQ ID NO: 2 to SEQ IS NO: 6 is prepared, the first fusion protein and the second fusion protein are allowed to interact with each other to form a complex, and subsequently the luminescent activity of the complex is determined.
(FR)La présente invention concerne un système d'analyse qui se sert d'une luciférase sous forme divisée (« split luciférase ») et possède une sensibilité significativement élevée. Dans un mode de réalisation de ce système d'analyse, dans le but de détecter la liaison entre une première protéine et une seconde protéine chacune capable de se lier à l'autre, une première protéine hybride composée de la première protéine et d'un peptide possédant la séquence d'acides aminés présentée dans SEQ ID NO : 1 est préparée, une seconde protéine hybride composée de la seconde protéine et d'un peptide possédant une séquence d'acides aminés choisie dans le groupe constitué des séquences présentées dans SEQ ID NO : 2 à SEQ ID NO : 6 est préparée, la première protéine hybride et la seconde protéine hybride sont mises à interagir l'une avec l'autre pour former un complexe, et par la suite l'activité luminescente du complexe est déterminée.
(JA) 本発明は、著しく検出感度の高いスプリットルシフェラーゼによるアッセイ系を提供することを目的とする。一実施態様として、相互に結合能を有する第1のタンパク質と第2のタンパク質との結合を検出する際、第1のタンパク質をアミノ酸配列番号1のアミノ酸配列からなるペプチドに融合させた第1の融合タンパク質を作製し、第2のタンパク質をアミノ酸配列番号2~6からなる群より選択されるアミノ酸配列からなるペプチドに融合させた第2の融合タンパク質を作製し、第1の融合タンパク質と第2の融合タンパク質とを相互作用させ、複合体を形成させたあとで、その複合体の発光活性を調べる。
Designated States: AE, AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BH, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CL, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DK, DM, DO, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, GT, HN, HR, HU, ID, IL, IN, IS, KE, KG, KM, KN, KP, KR, KZ, LA, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LY, MA, MD, ME, MG, MK, MN, MW, MX, MY, MZ, NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PE, PG, PH, PL, PT, RO, RS, RU, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, ST, SV, SY, TH, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, ZA, ZM, ZW.
African Regional Intellectual Property Organization (BW, GH, GM, KE, LR, LS, MW, MZ, NA, SD, SL, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
Eurasian Patent Organization (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM)
European Patent Office (AL, AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HR, HU, IE, IS, IT, LT, LU, LV, MC, MK, MT, NL, NO, PL, PT, RO, SE, SI, SK, SM, TR)
African Intellectual Property Organization (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Publication Language: Japanese (JA)
Filing Language: Japanese (JA)